观察血琼脂平板菌落性状及溶血情况

1、实验四1、观察血琼脂平板菌落性状及溶血情况、观察血琼脂平板菌落性状及溶血情况 2、取血平板上单个菌落涂片、染色、镜检、取血平板上单个菌落涂片、染色、镜检3、血浆凝固酶试验、血浆凝固酶试验 4、药物敏感性试验、药物敏感性试验5、三种葡萄球菌、三种链球菌培养物观察、三种葡萄球菌、三种链球菌培养物观察脓汁中病原性球菌分离鉴定（二）血琼脂平板菌落性状及溶血情况取血平板上单个菌落涂片、染色、镜检血浆凝固酶试验 原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可凝原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可凝固新鲜的人或兔血浆。此种酶的试验，常用于鉴固新鲜的人或兔血浆。此种酶的试验，常用于鉴定葡萄球菌的致病力，以区别非

2、致病性葡萄球菌。定葡萄球菌的致病力，以区别非致病性葡萄球菌。血浆凝固酶试验有两种方法。血浆凝固酶试验有两种方法。 ( (一一) )玻片法玻片法：用于检测结合在细胞壁上的凝固酶。用于检测结合在细胞壁上的凝固酶。1 1实验材料实验材料(1)(1)葡萄球菌琼脂平板葡萄球菌琼脂平板( (斜面斜面) )培养物。培养物。(2)(2)兔血浆。兔血浆。 (3)(3)生理盐水、载玻片、接种环等。生理盐水、载玻片、接种环等。2 2实验方法实验方法 在载玻片两端各滴盐水在载玻片两端各滴盐水1 1滴，取葡萄球菌培养物放滴，取葡萄球菌培养物放人生理盐水中混成均匀菌液，在其中一端的菌液中加人生理盐水中混成均匀菌液，在其中

3、一端的菌液中加兔血浆兔血浆1 1滴摇匀，立即观察结果，如血浆中有明显小滴摇匀，立即观察结果，如血浆中有明显小凝集块出现，而生理盐水中无此现象者为阳性，若血凝集块出现，而生理盐水中无此现象者为阳性，若血浆中无凝集块时为阴性。此法较简便，但不如试管法浆中无凝集块时为阴性。此法较简便，但不如试管法敏锐、准确。敏锐、准确。( (二二) )试管法试管法：用于检测释放到菌体外的游离的血浆凝固酶。用于检测释放到菌体外的游离的血浆凝固酶。1 1实验材料实验材料(1)(1)葡萄球菌培养物。葡萄球菌培养物。(2)1(2)1：4 4稀释的兔血浆稀释的兔血浆( (试管装试管装) )。(3)(3)无菌小试管、接种环、水

4、浴箱、酒精灯。无菌小试管、接种环、水浴箱、酒精灯。2 2实验方法实验方法 吸取吸取1 1：4 4稀释的兔血浆放于稀释的兔血浆放于2 2支无菌小试管支无菌小试管中，每管中，每管0 05mL5mL，用灭菌接种环取葡萄球菌，用灭菌接种环取葡萄球菌一满环，在一小试管内壁徐徐研磨成均匀悬一满环，在一小试管内壁徐徐研磨成均匀悬液。另一试管作为对照，将两支试管放在液。另一试管作为对照，将两支试管放在3737水浴箱中，每水浴箱中，每30min30min观察一次结果，观察观察一次结果，观察1 14h4h；观察时试管倾斜，凡血浆呈现胶胨样；观察时试管倾斜，凡血浆呈现胶胨样凝集者即为阳性，仍呈液体者为阴性。凝集者即

5、为阳性，仍呈液体者为阴性。三种葡萄球菌培养物乙型链球菌菌落乙型链球菌菌落( (溶血环溶血环) ) 三种链球菌培养物三种链球菌培养物药物敏感性试验 细菌对抗菌药物的敏感性试验，是指在体外测细菌对抗菌药物的敏感性试验，是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的方法。定药物抑菌或杀菌能力的方法。 实验室进行药敏试验主要有两个目的：一是帮实验室进行药敏试验主要有两个目的：一是帮助临床医生对感染性疾病选用最佳的药物治疗；二助临床医生对感染性疾病选用最佳的药物治疗；二是进行流行病学调查，了解某些细菌的耐药性变迁是进行流行病学调查，了解某些细菌的耐药性变迁情况。情况。 药敏试验的测定方法很多，常用的有扩散法、药敏试

6、验的测定方法很多，常用的有扩散法、试管稀释法、琼脂稀释法和试管稀释法、琼脂稀释法和E E试验等。试验等。 纸片扩散法纸片扩散法(Bauer-kirby(Bauer-kirby法法) )( (一一) )实验目的实验目的：掌握纸片扩散法试验掌握纸片扩散法试验. .( (二二) )实验原理实验原理：将干燥的浸有一定浓度的抗：将干燥的浸有一定浓度的抗菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌菌药物的滤纸片放在已接种一定量某种细菌的琼脂平板上的琼脂平板上. .经培养后经培养后, ,可在纸片周围出现可在纸片周围出现无细菌生长区无细菌生长区, , 称抑菌环称抑菌环. .目的是使学生学目的是使学生学会此试验方法并

7、了解其在临床治疗上的意义会此试验方法并了解其在临床治疗上的意义. . ( (三三) )实验材料实验材料 (1)(1)普通琼脂平板培养基。普通琼脂平板培养基。 (2)(2)金黄色葡萄球菌分离培养物。金黄色葡萄球菌分离培养物。 (3)(3)大肠杆菌分离培养物。大肠杆菌分离培养物。 (4)(4)药敏纸片。药敏纸片。 (5)(5)其他。镊子、酒精灯、接种环等。其他。镊子、酒精灯、接种环等。 (四)实验方法 (1)(1)按无菌操作法用接种环从分离培养平板上沾取细按无菌操作法用接种环从分离培养平板上沾取细菌，反复交叉密涂于平板培养基上菌，反复交叉密涂于平板培养基上( (注意不要划破培注意不要划破培养基养基) )。 (2)(2)将小镊子用酒精灯灭菌后，分别夹取含不同抗生将小镊子用酒精灯灭菌后，分别夹取含不同抗生素的药敏纸片，贴在已接种细菌的琼脂平板上，并轻素的药敏纸片，贴在已接种细菌的琼脂平板上，并轻轻压紧。一般每个平板贴轻压紧。一般每个平板贴46