自动生化分析仪应用中校准、维护和SOP文件准备要求

1、自动生化分析仪应用中校准、维护和 SOP 文件准备要求 天津医科大学第二医院 李忠信天津市儿童医院 沈永明 管卫 这是经典的检定报告，检定合格可以投入使用。某些仪器也报告过他们的性能指标，但没有提供检定方法。目前国家行政管理部门尚没有开展这方面的检定，国外大公司在中国的机构也不提供这方面的服务。药品食品监督管理局正在着手制定有关的技术标准。 ( 二 ) 用户对检测系统精密度和准确度的核实 实验室期望核实检测系统（为完成一个检测项目所涉及的仪器、试剂、标准品、校正品、质控品、操作程序和维护程序等的组合称为检测系统）已被认可的性能所进行的评估为核实（ Demonstration ）实验。 1. 使

2、用校正物对检测系统进行校准 一个检测系统在质控在控的条件下，检测校正物的值，若与校正物给定值的相对偏倚在± 2% 之内。表明所测结果准确并具有溯源性。 在初始校准未通过或 质控未通过 或更换试剂时应执行再校准。仪器在更换光源灯，反应槽清洗，更换比色杯，调整项目参数等维护保养程序之后亦应执行再校准。 检测系统设有校准程序。各项目在各系统中的校准周期不尽相同，应按各自配套的试剂盒说明书进行。项目确定后将其记录于“日校准记录表”中。校准结果的确认依据“试剂说明书”中的判断指标。若超出允许范围，应查找原因或与厂家联系。 2. 精密度核实 （ 1 ） 实验设计 天数和重复次数 以 s 批内 和

3、 s 总 各表示为厂商提供 的批内和 总精密度水平。以 s 批内 和 s 总 各表示为实验室核实实验 的批内和 总精密度水平。在进行以下标准差大小比较时，厂商的 s 批内 和 s 总 对应的各个均值（ 批内均值 和总均值）大小应相同或极其相近，只有在这样的条件下，才可以对标准差进行大小的比较。如果厂商按照美国的临床实验室标准委员会的 EP5 文件进行 的批内和 总精密度估计时，它们的均值 采用总 均值表示。在这样的情况下，进行标准差大小比较时可以直接使用变异系数（ CV ）作比较。 如果 s 批内 2/3 s 总 ，实验至少要做 5 天，每批每个水平作 4 次重复检测。 这个方案针对天间变异是

4、总精密度的重要组份的情况。 如果 s 批内 2/3 s 总 ，实验至少要做 3 天，每批每个水平作 3 次重复检测。 这个方案针对天间变异不是总精密度的重要组份的情况。 如果如果 s 批内 和 2/3 s 总 的关系不清楚，实验至少要做 5 天，每批每个水平作 4 次重复检测。 （ 2 ） 实验程序 每天做 1 批a . 如果 s 批内 2/3 s 总 ， 5 天内，每天做 2 个浓度水平，每个水平作 4 次重复检测。b . 如果 s 批内 2/3 s 总 ， 3 天内，每天做 2 个浓度水平，每个水平作 3 次重复检测。 实验时，仍然每天进行控制品的检测。如果控制值失控，或操作有问题，弃去数

5、据，重做。 可以在同一批内进行准确度实验样品的检测。 按照厂商说明要求进行校准。如果厂商强调，它的精密度数据是经过多次校准后产生的，操作人员也应在实验中进行重校准。 （ 3 ） 数据记录 附录 A 为记录数据表格样张，便于归纳数据和统计。计算表见附录 A （略）。如何使用和计算示例见附录 B （略）。每个浓度水平应分别计算。 （ 4 ）精密度数据计算 批内精密度 按下列公式计算： 此主题相关图片如下：式中： S 为总和记号。在记号右侧数据求总和。D 总天数（ 3 或 5 ）。n 每天重复检测总数（ 3 或 4 次），x di 每天重复检测结果（ 3 或 4 个）， 在第 d 天内所有结果的均值

6、。应注意的是，如果实验方案不是完全按上述方式进行（应该在不同天，所有 批进行 相同的重复），估计 的批内精密度 将不正确。将 s 批内 除 以所有结果的均值 的百分值为 下的 CV 批内 （）。 总精密度用下列公式进行总精密度的计算 5 。计算方差 B ，这是每天均值的方差。公式如下： 此主题相关图片如下：式中： 为第 d 天所有 结果均值， 为所有结果的均值。 按以下公式计算 s 总 ： 此主题相关图片如下：式中 n 每批重复数。 将 s 总 除以 所有结果的均值 的百分值为 下的 CV 总 （）。 （ 5 ） 将估计的批内 精密度和提供 的批内精密度 作比较 如果厂商 的批内精密度 为变异

7、系数（ CV 厂商批内 ），在均值水平相同（严格讲是及其接近）的条件下，可以 将估计的批内 精密度（ CV 批内 ）和厂商 的批内精密度 （ CV 厂商批内 ）作比较。 如果核实实验估计的 CV 批内 小于 厂商的 CV 厂商批内 ，实验室已经核实 了批内精密度 和 厂商批内精密度 的一致。若核实实验的 批内 CV 批内 大于厂商提供的 CV 厂商批内 ，注意：实验室的 CV 可以大于厂商的，但是可能在统计上差异是不显著的。所以若核实实验的 CV 批内 大于 厂商提供的 CV 厂商批内 ，应进行统计检验，确定是否在统计上差异是显著的（真的有差异）。本方案目前建议不作统计上的显著性检验，如果出现

8、核实实验的 CV 批内 大于 厂商原有 的批内 CV 厂商批内 ，就判断：该实验室条件下具有 的批内精密度 水平超出了厂商 的批内精密度 水平，厂商提供 的批内精密度 不能被确认，实验室应和厂商联系，解决问题。 （ 6 ）将核实实验估计的总精密度和厂商提供的总精密度作比较 如果厂商的总精密度为变异系数（ CV 厂商 总 ），在均值水平相同（严格讲是及其接近）的条件下，可以将核实实验估计的总精密度（ CV 总 ）和厂商的总精密度（ CV 厂商 总 ）作比较。 如果核实实验估计的总 CV 总 小于厂商的总精密度水平（ CV 厂商 总 ），用户已经核实了总精密度和厂商总精密度的一致。若核实实验的总精

9、密度 CV 总 大于厂商提供的总精密度水平（ CV 厂商 总 ），注意：用户的核实 实验总 精密度 CV 总 可以大于厂商提供的总精密度水平（ CV 厂商 总 ），但是可能在统计上差异是不显著的。所以若核实实验的 CV 总 大于厂商提供的总精密度（ CV 厂商 总 ）水平，应进行统计检验，是否在统计上差异是显著的（真的有差异）。 和批内精密度 的做法一样，目前建议不作统计上的显著性检验，如果出现核实实验的总精密度 CV 总 大于厂商原有的总精密度水平（ CV 厂商 总 ），就判断：该实验室条件下具有的总精密度水平超出了厂商的总精密度水平，厂商提供的总精密度不能被确认，实验室应和厂商联系，解决问

10、题。 （三） 非检测系统利用 临床项目 进行校准： 1. 临床项目的批内 精密度 对项目浓度范围满足表 3 的新鲜病人血清，重复测定 20 次，计算均值和变异系数（ CV ）。变异系数应满足表 3 的要求。 表 3 临床项目批内 精密度要求 项目名称 测试名称 浓度范围 要求 ALT （丙氨酸基转移酶） 零级动力学法 60 70 U/L CV 5% UREA （尿素） 一级动力学法 9 10 mmol/L CV 2.5% TP ( 总蛋白 ) 终点法 60 65 g /L CV 2.5% 2. 临床项目 准确度 与已通过注册、具有相同预期用途、原理与结构相似的检测系统进行方法学比较，其相对偏倚

11、满足表 4 的要求。 表 4 临床项目 准确度要求 项目名称 测试类型 要求 ALT （丙氨酸氨基转移酶） 零级动力学法 相对偏倚不大于± 10% UREA （ 尿素 ） 一级动力学法 相对偏倚不大于± 5% TP （总蛋白） 终点法 相对偏倚不大于± 5% 3. 临床相目可报告范围 对丙氨酸氨基转移酶（ ALT ）、尿素（ UREA ）和（ TP ） 3 个项目的可报告范围评估，实验的可报告范围的差异在± 10% 内。 目前北京市临床实验室管理办法第十五条 6 ，内蒙古自治区临床实验室管理暂行办法第十八条 7 和黑龙江省临床实验室管理暂行办法第十五条

12、8 均规定：“实验室必须对需要校准的检测设备和对检测结果有影响的辅助设备进行校准”。天津市临检中心 於 2003 年底学习北京市的经验按“临床实验室调查内容 33 条” 对尽百家 二级甲等医院进行了调查。在用自动生化分析仪种类繁多，多数实验室对校准程序不够了解，措施不力。上述三个方法期待与同仁的磋商与商榷。 二. 自动生化分析仪的维护 为保证仪器的安全运转和效率的稳定，需随时对仪器进行维护和检查。包括每日、每周、每月、每季、 每半年的定期检查和消耗部件检查及定期更换部件。 以 TOSHIBA 自动生化分析仪为例，其维护和检查周期是依据工作量决定的。每天 600 个测试（ 40 个 样品 / 天

13、，平均 15 个项目 / 样品，包括定标和 质控 ），每天开机时间为 8 小时。如果实测项目较多或开机时间较长时，维护和检查的周期应缩短。但是若仪器的利用率低于如上的设定，则不宜延长维护周期，否则应取得厂家的确定，因为某些部件（如老化）必须进行定期保养。 注意！发现仪器存在问题应立即停止使用，进行维护检查时，注意安全！自己解决不了时应与相应维 修部门 及时联系，以防损坏仪器。 兹以 BECKMAN SYNCHRON CX4 全自动生化分析仪为例，其维护周期与内容是： . 每天的维护：（ 1 ）检查冲洗浓缩液和探针漂洗液水平（ 2 ）检查状态监视器（ 3 ）检查比色 杯滑针 的方向和状态（ 4

14、）检查气压量计（ 5 ）检查空针活塞头有否磨损（ 6 ）用 70% 异丙醇清洁所有加样探针和混合棒 . 每周维护：（ 1 ）清洁全部被暴露的工作面（ 2 ）清洁加样针和加试剂针 . 每二周维护： 换采样空针柱塞头。每两周或 7500 个试验后或注视到磨损的小薄片和裂纹无论出现哪种情况都应换采样空针柱塞的头。 . 每月维护：（ 1 ）清洁系统中全部的空气过滤器（ 2 ）替换探针漂洗线上的过滤器（ 3 ） 换加试剂 空针的柱塞头 , 若观察到磨损不必等到按月维护 .（ 4 ）清洁样品密码读出器的光窗 4. 每二个月维护：（ 1 ）检查所有的冲洗瓶和防污染的浮子传感器（ 2 ） 换抽比 色杯真空的滑

15、臂 5. 每六个的维护：（ 1 ）换浓缩冲洗液管路中的过滤器（ 2 ）清洁全部稀释的冲洗液瓶和浮子传感器 再以 HITACHI 7170A 维护保养程序为例说明如下： 1. 维护每 周维护 保养程序：（ 1 ）清洗反应杯（ 2 ）测定杯空白， 若杯空白 数值超过± 800 ，需要将反应杯取出浸泡在 2%HITERGENT 中，过夜。再用清水充分清洗，再次确认杯空白， 若杯空白 值仍过大，或使用超过 1 个月以上请更换反应杯。在更换光源灯；光路清扫后；更换反应杯或反应 杯位置 交换后也需测定杯空白。（ 3 ）样品针、试剂针、 搅拌棒各清洗 槽的清扫，用试管刷蘸 2%HITERGRNT

16、进行洗刷。 2. 每月维护保养程序 （ 1 ）更换反应杯 （ 2 ） 清扫试剂冷藏库和样品盘槽 （ 3 ） 清洗反应槽及反应槽排水过滤网（ 4 ）清洗供水过滤网 （ 5 ）清扫散热器过滤网 （ 6 ）参数备份 3. 每季度维护保养程序 （ 1 ）样品吸量器密封垫的更换 （ 2 ） 试剂吸量器密封垫的更换 （ 3 ） 清扫冷却风扇 4. 每半 年维护 保养程序 更换光源灯 自动生化分析仪的维护中还应注意： 1. 环境温度：要求 15 32 。室温温度低，易 致帕易贴 元件超负荷，易烧毁；恒温水浴难升温，仪器报警，易烧电路，为避免不必要的损失应有暖气（此点在寒冷季节应有保障）。室温高，样本及反应液

17、易蒸发，应设空调2. 环境湿度：生化分析仪运转环境的相对湿度最好在 3565% 之间，允许相对湿度范围在 2080% 之间。湿度过低，静电反应增强，此点在北方的冬、春季易出现，影响检测结果；湿度过高，雾滴会影响仪器的电路传导，尤当停机后雾滴会落到光学元件表面，腐蚀影响干涉滤光片或光栅的性能。3. 避免阳光的直射。4. 蒸馏水或去离子水的质量：电阻值至少在 1 兆欧以上，粗过滤柱（预柱）起去除大分子、浮游 物几铁锈 的作用，应注意及时更换。水供给装置的出水水压应在 49343kPa （ 0.53.5kgf/cm 2 ）范围内。5. 电源电压变动在 220V ± 10% 以内，应配有相应

18、功率的 UPS 电源。6. 有保护性接地（接地电阻在 10 以下）。7. 应远离高频电磁波的干扰。 关于仪器的维护应当说在各自仪器的使用说明书中是十分明确与详细的，但在使用中相当大部分实验室没能严格遵守和执行。究其原因：一是溯源性概念性不强、对质 控意义 的理解差强人意，二是轻视质量片面追求经济效益，三是检验医学教育与中国实验室现代、自动化进展的现实衔接不够紧密，四是实验室技术人员动手能力不强，厂商的 培训重 使用鲜有维护技能的认真培训，五是厂商与经销商的片面误导，例如：“永久性”比色杯，六是传统的保守意识在作怪，七是缺乏严格的法规管理。在这方面我建议学习郭健领导的部检验中心生物化学实验室 长

19、期保持自动生化分析仪优良性的秘诀 认真严格地维护与保养。为降低发病率与死亡率，保证检验质量必须严格履行维护程序。 三. 自动生化分析 仪应用 中 SOP 文件准备要求 从 2002 年 11 月 5 日 至 2003 年 1 月 15 日 北京市组织了 32 位专家对 49 所医院的检验科和检验科以外的 188 个其它临床实验室共 273 家临床实验室的现状进行了调查与分析 . 临床实验室调查内容中的 AO7 项“检验仪器是否都有 SOP ”栏目中 , 结果显示检验科的满意率为 59.2%, 缺陷率为 40.8% ；其它临床实验室满意率为 59.6% ，缺陷率为 27.1% ，不满意率 13.

20、3% 9 。表明 40% 以上的实验室存在着检验仪器 SOP 文件的不足，欠发达地区的比例可能还要高些，应当学习和重视 SOP 文件的准备。 （一） 生化分析仪 SOP 文件的格式要求： 遵照中华人民共和国卫生行业标准 WS/ T 227 2002 “临床检验操作规程编写要求” 10 的如下格式： 1. 在第一页页首注明：×××自动生化分析仪标准操作规程××医院检验科操作规程文件号： ZDSHF ×××第×版共××页××××年×月

21、15;日起实施本规程每×年复审一次复审日期：××××年××月××日复审人：×××（签名）规程编写者：×××审批者：×××批准日期：××××年××月××日文件分发部门和 / 或个人：医务科：保管者：×××（签名）院长办公室：保管者：×××（签名）院档案室：保管者：×

22、15;×（签名）检验科：主任：×××（签名）临床化学检验室×××（签名）规程修订记录 2. 在以后各页 的眉首均有 ×××自动生化分析仪操作规程字样及文件编号 , 并印有横线 . 在每页的右下脚印有页序。 3. 在 定期复串或 发现问题时，需要作部分修改或更新时，应注明新确认的年月及版本。并由主任或主管签名认可。 鉴于自动生化分析仪结构复杂、功能全面，涉及面广。鼓励使用电脑编号规程，简化编辑和修订程序。鉴于仪器与试剂 盒配合 使用密不可分，实验室管理办法要求试验项目有 SOP 文件，建议 SOP

23、 文件二者紧密结合。每个试验项目的 SOP 文件参照 WS/T 227-2002 附录 A 中的 A1 例 1 血清总胆固醇（ TC ）测定和 A2 例 2 C 反应蛋白测定执行。 （二）自动化生化分析 仪标准 操作程序 1. 以仪器操作手册（使用说明书）直接作为规程的要求 （ 1 ）厂商一般都提供了详细的仪器使用说明。但是实验室只有确实按照厂商要求，使用仪器、指定的试剂、指定校准品（包括厂商和品种的一致）以及指定具体每一步操作步骤，而且定期对仪器 做保 养和校准，实验室才可直接采用厂商说明书作为自己的操作规程。 （ 2 ）实验室对厂商规程要求有任何变动和修改的，则产品说明书不能直接作为实验室

24、的操作规程。 （ 3 ）直接引用的产品说明书必须是中文的使用说明， 不 可用外文说明。 （三）自动生化分析仪标准操作规程必须具有明确而完整的操作规程资料以及精确的叙述。应具备下列内容： 以北京市临检中心和 株氏 会社 日立高新技术共同编制的日立 7170A 型自动生化分析 仪标准 操作程序（ SOP ）文件模板（范本）为例，供参考如下： 1. 运行条件，警告事项和注意事项2. 每日开关机程序：包括加注系统、清洗液、废液桶、打印机、仪器台面、 UPS 电源、供水、开机和关机后的维护（检查光度计、 吸量计 ）、开机后的准备工作（试剂准备、清除昨日结果和曾选项目）、关机和关机后的维护（用蘸有消毒乙醇的纱布擦拭样品针、试剂针，用蘸有 2%HITERGENT 的纱布擦拭搅拌棒并用纯水擦净）。3.24 小时 不 关机 一 起始运行程序：除 2 中所述之外，还有水浴槽换水。工作前检查：清洗液位置 清洗液种类1D1 2D1 HITERGENT1D2 2D2 HIALKALI-D1D3 2D3 HICARRYNON （选用）仪器左前门下左管路 HIALKALI-D仪器左前门下右管路 HIC