生物药物分析与检验糖类、脂类和核酸类药物的分析

1、第九章第九章 糖类、脂类及核酸类药物的分析糖类、脂类及核酸类药物的分析 糖类物质：糖类物质：是多羟基（是多羟基（2 2个或以上）的醛类或酮类化合物，在个或以上）的醛类或酮类化合物，在水解后能变成以上两者之一的有机化合物。在化学上，由于其由水解后能变成以上两者之一的有机化合物。在化学上，由于其由碳、氢、氧元素构成，在化学式的表现上类似于碳、氢、氧元素构成，在化学式的表现上类似于“碳碳”与与“水水”聚合，故又称之为聚合，故又称之为碳水化合物碳水化合物。生物学功能：生物学功能：1.1.提供能量。植物的淀粉和动物的糖原都是能量的储存形式。提供能量。植物的淀粉和动物的糖原都是能量的储存形式。 2.2.细

2、胞的骨架。纤维素、半纤维素、木质素是植物细胞壁的主要成细胞的骨架。纤维素、半纤维素、木质素是植物细胞壁的主要成分，肽聚糖是原核生物细胞壁的主要成分。分，肽聚糖是原核生物细胞壁的主要成分。 3.3.细胞间识别和生物分子间的识别。细胞膜表面糖蛋白的寡糖链细胞间识别和生物分子间的识别。细胞膜表面糖蛋白的寡糖链参与细胞间的识别。红细胞表面参与细胞间的识别。红细胞表面ABOABO血型决定簇就含有岩藻糖。血型决定簇就含有岩藻糖。第一节第一节 糖类药物的分析糖类药物的分析葡萄糖葡萄糖 单糖单糖 蔗糖蔗糖乳糖乳糖 赋形剂和矫味剂赋形剂和矫味剂一、药物结构与性质一、药物结构与性质双糖双糖淀粉淀粉多糖多糖医学上的

3、糖类：医学上的糖类：葡萄糖葡萄糖属单糖，是人体能量的主要来源之一。属单糖，是人体能量的主要来源之一。乳糖、蔗糖，淀粉常被用作药物制剂的赋形剂或矫味剂。乳糖、蔗糖，淀粉常被用作药物制剂的赋形剂或矫味剂。临床上常用多糖药物：葡萄糖、右旋糖酐、肝素、硫酸软临床上常用多糖药物：葡萄糖、右旋糖酐、肝素、硫酸软骨素等。骨素等。 二、鉴别试验二、鉴别试验（一）比旋度测定（一）比旋度测定旋光度旋光度：直线偏振光通过光学活性化合物液体或溶液时，：直线偏振光通过光学活性化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光平面向左或右旋转，旋转的度数能引起旋光现象，使偏振光平面向左或右旋转，旋转的度数称旋光度。称旋光度。有

4、机化合物的结构中含有手性碳原子，具有旋光现象。利有机化合物的结构中含有手性碳原子，具有旋光现象。利用测定药物的旋光度进行用测定药物的旋光度进行定性、杂质检查和定量的分析方法定性、杂质检查和定量的分析方法，称为旋光度测定法。称为旋光度测定法。手性碳原子手性碳原子，是指和四个不同的原子或基团连接的碳原子。，是指和四个不同的原子或基团连接的碳原子。在一定条件下测得的旋光度称为在一定条件下测得的旋光度称为比旋度比旋度，以，以表示。表示。比旋度可以反映其纯度，故药典对葡萄糖原料不作专项含比旋度可以反映其纯度，故药典对葡萄糖原料不作专项含量测定，只规定比旋度范围量测定，只规定比旋度范围(二二) 与斐林（与

5、斐林（Fehling）试液反应）试液反应葡萄糖醛基的还原性葡萄糖醛基的还原性碱碱性性酒酒石石酸酸铜铜葡葡萄萄糖糖水、水、Cu2O Fehling试液试液 (四四) 高效液相色谱法高效液相色谱法 供试品溶液的保留时间应与对照溶液主峰的保留时间一致。供试品溶液的保留时间应与对照溶液主峰的保留时间一致。 (三三) 红外分光光度法红外分光光度法中国药典规定本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。中国药典规定本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致。 来源：来源：系蔗糖经肠膜状明串珠菌发酵后生成的一种高分子葡萄系蔗糖经肠膜状明串珠菌发酵后生成的一种高分子葡萄糖聚合物，经处理精制而得。由于聚合的葡萄糖分子数

6、目不同，糖聚合物，经处理精制而得。由于聚合的葡萄糖分子数目不同，而产生不同分子量的产品。有高分子而产生不同分子量的产品。有高分子( (平均分子量平均分子量10-2010-20万）、万）、中分子（中分子（6-86-8万）、低分子（万）、低分子（2-42-4万）、小分子（万）、小分子（1-21-2）。）。性状：性状：为白色或类白色无定形粉末，无臭，无味。易溶于热水，为白色或类白色无定形粉末，无臭，无味。易溶于热水，不溶于乙醇。其水溶液为无色或微带乳光的澄明液体。不溶于乙醇。其水溶液为无色或微带乳光的澄明液体。用途：用途：是目前最佳的是目前最佳的血浆代用品血浆代用品之一。临床上常用的有中分子之一。临

7、床上常用的有中分子右旋糖酐，用于出血性、创伤性及烧伤性休克等。低、小分子右旋糖酐，用于出血性、创伤性及烧伤性休克等。低、小分子右旋糖酐，能改善微循环，亦有扩充血容量作用。右旋糖酐，能改善微循环，亦有扩充血容量作用。注注:右旋糖酐右旋糖酐70（中分子）；右旋糖酐（中分子）；右旋糖酐40（低分子）；右旋糖酐（低分子）；右旋糖酐10（小分子）（小分子）四、检查四、检查 1 1、分子与分子量分布：、分子与分子量分布：右旋糖酐右旋糖酐20202 2、总氮量：肝素钠、总氮量：肝素钠3 3、残留溶剂：残留溶剂、残留溶剂：残留溶剂四、含量测定四、含量测定1、旋光光度法、旋光光度法右旋糖苷右旋糖苷20氯化钠注射

8、液的含量测定。氯化钠注射液的含量测定。本品为复方制剂，右旋糖苷本品为复方制剂，右旋糖苷20有旋光性，而氯化钠无旋光有旋光性，而氯化钠无旋光性，不干扰测定，用性，不干扰测定，用旋光度法旋光度法测定右旋糖苷测定右旋糖苷20的含量。的含量。C为每为每100mL注射液中含右旋糖酐注射液中含右旋糖酐20的质量，的质量，g; 为测得的为测得的旋光度旋光度稀释倍数稀释倍数 lcD20100%11951005128.0 滴定法：滴定法：甘露醇的含量测定甘露醇的含量测定 高效液相色谱法：高效液相色谱法：硫酸软骨素的效价测定硫酸软骨素的效价测定 生物法：生物法：肝素的效价测定肝素的效价测定1869年核酸最早分离自

9、外科绷带脓细胞的年核酸最早分离自外科绷带脓细胞的细胞核细胞核，当时发现这种物质含磷量之高超过当时发现的任何当时发现这种物质含磷量之高超过当时发现的任何一种有机物，并且一种有机物，并且含有很强的酸性含有很强的酸性，故得名核酸。，故得名核酸。19091909年其组成被研究清楚，年其组成被研究清楚，19441944年生物功能初步澄年生物功能初步澄清，在清，在X X射线衍射技术支持下射线衍射技术支持下19531953年结构澄清。年结构澄清。核酸是脱氧核糖核酸（核酸是脱氧核糖核酸（DNADNA）与核糖核酸（）与核糖核酸（RNARNA）的）的通称。通称。第三节第三节 核酸类药物的分析核酸类药物的分析核酸核

10、酸核苷酸核苷酸磷酸磷酸核苷核苷戊糖戊糖碱基碱基水水解解一、结构和分类一、结构和分类二、理化性质二、理化性质（一）两性性质：（一）两性性质：磷酸基；碱基（通常：酸性）磷酸基；碱基（通常：酸性） pHpH影响碱基间氢键稳定：影响碱基间氢键稳定：DNA pH4.0-11.0DNA pH4.0-11.0（二）水解性：（二）水解性：微溶于水，不溶于一般的有机溶剂微溶于水，不溶于一般的有机溶剂（三）（三）UVUV：max=260nm max=260nm 蛋白质蛋白质280nm280nm A A260260/A/A280 280 纯纯DNADNA1.81.8 纯纯RNARNA应达到应达到2.02.0 混有杂

11、蛋白混有杂蛋白 比值降低比值降低(一一) 肌苷的质量分析肌苷的质量分析1.结构：结构：C10H12N4O5 268.23本品为本品为9-D-9-D-核糖次黄嘌呤。按干燥品计算，含核糖次黄嘌呤。按干燥品计算，含C C1010H1H12 2N N4 4O O5 5应为应为98.098.0102.0102.0。2.性状：性状：本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。本品为白色结晶性粉末；无臭，味微苦。本品在水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀盐本品在水中略溶，在氯仿或乙醇中不溶，在稀盐酸和氢氧化钠溶液中易溶。酸和氢氧化钠溶液中易溶。3.鉴别鉴别取取0.010.01供试品溶液适量供试品溶液适量, ,加等体积

12、的加等体积的3,5-3,5-二二羟基甲苯溶液羟基甲苯溶液( (取取3 3，5-5-二羟基甲苯与三氯化铁二羟基甲苯与三氯化铁各各0.1g0.1g，加盐酸使成，加盐酸使成100ml)100ml)，混匀，在水浴中，混匀，在水浴中加热约加热约1010分钟，即显分钟，即显绿色。绿色。-苔黑酚反应苔黑酚反应取本品取本品1 1水溶液，加氨制硝酸银试液数滴，水溶液，加氨制硝酸银试液数滴，即产生即产生白色胶状白色胶状沉淀。沉淀。-嘌呤碱基嘌呤碱基 取含量测定项下的溶液取含量测定项下的溶液, ,照分光光度法测定，照分光光度法测定，在在248nm248nm的波长处有最大吸收，在的波长处有最大吸收，在222nm222

13、nm的波长的波长处有最小吸收。处有最小吸收。色谱图色谱图红外光谱（红外光谱（IRIR）4.4.检查检查溶液的澄清度与颜色（溶液的透光率）溶液的澄清度与颜色（溶液的透光率）取本品取本品0.5g0.5g，加水，加水50ml50ml使溶解，照分光光度法在使溶解，照分光光度法在430nm430nm的波长处测定透光率，不的波长处测定透光率，不得低于得低于98.098.0( (供注射用供注射用) )。干燥失重干燥失重取本品，在取本品，在105105干燥至恒重，减失重量不得过干燥至恒重，减失重量不得过1.01.0炽灼残渣炽灼残渣不得过不得过0.10.1( (供注射用供注射用),),或不得过或不得过0.20.

14、2( (供口服用供口服用重金属重金属取本品取本品1.0g1.0g，依法检查含重金属不得过百万分之十。，依法检查含重金属不得过百万分之十。 次黄嘌呤次黄嘌呤精密称取本品精密称取本品0.5g0.5g，置，置50ml50ml量瓶中量瓶中, , 加水溶解并加水溶解并稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法试验，吸取上述溶稀释至刻度，摇匀，照纸色谱法试验，吸取上述溶10l10l，点，点于于3 325cm25cm色谱滤纸上，照上行法，以水为展开剂，展开约色谱滤纸上，照上行法，以水为展开剂，展开约20cm20cm处，取出晾干，置紫外光灯处，取出晾干，置紫外光灯(254nm)(254nm)下检视，不得出现杂下检视，不得出

15、现杂质斑点。质斑点。 HPLC5.5.含量测定含量测定1 1）UVUV法：法：取本品，精密称定，加水制成每取本品，精密称定，加水制成每1ml1ml中约含中约含10g10g的溶液，照分光光度法在的溶液，照分光光度法在248nm248nm的波长处测定吸收度，按的波长处测定吸收度，按C C1010H H1212N N4 4O O5 5的的吸收系数（吸收系数（E E1 11cm1cm）为）为460460计算。计算。2）HPLC6.6.作用与用途作用与用途辅酶类药。有改善机体代谢作辅酶类药。有改善机体代谢作用。用于各种类型肝脏疾患、心脏疾患、白用。用于各种类型肝脏疾患、心脏疾患、白细胞减少症、血小板减少

16、症、中心视网膜炎、细胞减少症、血小板减少症、中心视网膜炎、视神经萎缩等。视神经萎缩等。7.7.用法与用量用法与用量口服，一次口服，一次0.20.20.6g0.6g一日一日0.60.61.8g1.8g8.8.贮藏贮藏遮光，密闭保存。遮光，密闭保存。9.9.制剂制剂(1)(1)肌苷口服溶液肌苷口服溶液(2)(2)肌苷片肌苷片(3)(3)肌肌苷注射液苷注射液 (4)(4)肌苷胶囊肌苷胶囊(5)(5)肌苷颗粒剂肌苷颗粒剂（二）三磷酸腺苷二钠（二）三磷酸腺苷二钠（ATP）的质量分析）的质量分析 拼音名：拼音名：SanlinsuanxianganSanlinsuanxianganerna erna 英文名

17、：英文名：Adenosine Disodium TriphosphateAdenosine Disodium Triphosphate C C1010H H1414N N5 5NaNa2 2O O1313P P3 3 551.15 551.151.1.结构：结构：本品为腺嘌呤核苷本品为腺嘌呤核苷-5-5- -三磷酸酯二钠盐三磷酸酯二钠盐三水化合物。按干燥品计算，含三水化合物。按干燥品计算，含C C1010H H1414N N5 5NaNa2 2O O1313P P3 3不得少于不得少于90.090.0。2.2.性状：性状：本品为白色或类白色粉末或结晶块状物；本品为白色或类白色粉末或结晶块状物；

18、无臭，味咸；有引湿性。本品在水中易溶，在无臭，味咸；有引湿性。本品在水中易溶，在乙醇、氯仿或乙醚中几乎不溶。乙醇、氯仿或乙醚中几乎不溶。 3.3.鉴别鉴别（1 1）取本品）取本品20mg,20mg,加稀硝酸加稀硝酸2ml2ml溶解后，加钼酸铵试液溶解后，加钼酸铵试液1ml1ml，加热，放冷，即析出黄色沉淀。，加热，放冷，即析出黄色沉淀。-磷酸盐磷酸盐（2 2）取本品约）取本品约10mg10mg，加盐酸溶液，加盐酸溶液(12)5ml(12)5ml溶解后，溶解后，加加间苯三酚间苯三酚10mg10mg，混匀，置水浴中加热约，混匀，置水浴中加热约1 1分钟，即分钟，即显玫瑰红色。显玫瑰红色。-戊糖戊糖（3 3）苔黑酚反应）苔黑酚反应戊糖戊糖 （3 3）UVUV（4 4）IRIR（5 5）本品的水溶液显钠盐的鉴别反应）本品的水溶液显钠盐的鉴别反应4.4.检查检查酸度酸度溶液的澄清度与颜色溶液的澄清度与颜色蛋白质蛋白质取本品取本品20mg20mg，加水，加水2ml2ml溶解后，滴加溶解后，滴加3030磺基磺基水杨酸水杨酸溶液溶液0.5ml0.5ml，不得发生浑浊。，不得发生浑浊。有关物质有关物质水分水分氯化物氯化物铁盐铁盐重金属重金属热原热原5.5.含量测定含量测定（1 1）总核苷酸：）总核苷酸：UVUV（2 2）三磷酸腺苷二钠的重量比：）三磷酸