药物分析 药物的鉴别试验

1、12药物分析 主讲：南昌大学药学系 黄惠明 3一、概述一、概述二、二、鉴别试验的项目鉴别试验的项目三、鉴别方法三、鉴别方法四、鉴别试验条件四、鉴别试验条件五、鉴别试验的灵敏度五、鉴别试验的灵敏度 第二章第二章 药物的鉴别试验药物的鉴别试验4Identification:根据药物的分子根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真化学或生物学方法来判断药物的真伪。伪。51. 取样取样2. 鉴别鉴别3. 检查检查4. 含量测定含量测定5. 检验报告检验报告工工 作作 程程 序序 药品检验工作的药品检验工作的基本基本内容内容6鉴鉴 别别 是根

2、据药物的是根据药物的分子结构分子结构、理理化性质化性质，采用化学、物理化，采用化学、物理化学或生物学方法来学或生物学方法来判断药物判断药物的真伪的真伪. .鉴别方法要求鉴别方法要求: 专属性强、专属性强、 再现性好、灵敏度高、简便快再现性好、灵敏度高、简便快速速7鉴鉴 别别 中国药典中国药典鉴别项下规定的试验方法鉴别项下规定的试验方法, ,仅反仅反应药品某些物理、化学或生物学应药品某些物理、化学或生物学等性质的等性质的特征特征，不完全不完全代表对该代表对该药品药品化学结构化学结构的的确认确认8 用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其用来证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物，而不是

3、对未知物进行定性分析，所标示的药物，而不是对未知物进行定性分析，因为这些鉴别试验虽有一定的专属性，但不具备因为这些鉴别试验虽有一定的专属性，但不具备进行未知物确证的条件，故不能鉴别未知物进行未知物确证的条件，故不能鉴别未知物91. 已知物的确证试验,不是鉴定未知物的组成和结构，仅用于证实贮藏在有标签容器中的药物是否为其所贮藏在有标签容器中的药物是否为其所标示的药物标示的药物，而非对未知物的鉴别。 2.鉴别试验是个别分析不是系统分析(采用灵敏度高专属性强的方法,试验项目少)3.选用药物的化学鉴别反应,光谱特征,色谱行为,物理常数等不同方法鉴别同一个供试品4.鉴别制剂注意消除辅料的干扰10 鉴别试

4、验鉴别试验 鉴别试验项目鉴别试验项目 鉴别方法鉴别方法 鉴别试验条件鉴别试验条件鉴鉴 别别11鉴别实验项目鉴别实验项目鉴鉴 别别（一）性状（一）性状（二）一般鉴别试验（二）一般鉴别试验（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验12性状性状包括颜色、臭味等应包括颜色、臭味等应有的有的外观外观以及以及溶解度溶解度和和物理常数物理常数. . 是质量重要表征之一是质量重要表征之一, ,在一在一定程度上反映药品的纯度及疗效定程度上反映药品的纯度及疗效. .13 1外观 指药物外表感观和色泽，包括聚集状态、晶型、色泽以及臭味等性质。 如如中国药典中国药典对二巯基丁二钠的描述为对二巯基丁二钠的描述为“本品为本品为

5、白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭白色至微黄色的粉末；有类似蒜的特臭”。 2溶解度 溶解度是药物的一种物理性质，在一定程度上反映了药品的纯度。 如磺胺嘧啶如磺胺嘧啶“在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎在乙醇或丙酮中微溶，在水中几乎不溶；在氢氧化钠试液中易溶，在稀盐酸中溶解不溶；在氢氧化钠试液中易溶，在稀盐酸中溶解”。 鉴别实验项目鉴别实验项目14溶剂体积(1g/ml)极易溶解10000溶解度尼莫地平 在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶在丙酮、三氯甲烷或乙酸乙酯中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。解，在乙醚中微溶，在水中几乎不溶。中国药典中国药典15 3 3物理常数物理常数

6、 物理常数：评价药品质量的重要指标物理常数：评价药品质量的重要指标 药物鉴别药物鉴别，药品的，药品的纯杂程度。纯杂程度。 中国药典中国药典收载的物理常数包括：收载的物理常数包括： 相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。系数。 。鉴别实验项目鉴别实验项目16 (1) 熔点熔点： 由固体熔化成液体的温度由固体熔化成液体的温度 熔融同时分解的温度熔融同时分解的温度 在熔化时在熔化时初熔初熔至至全熔全熔的一段温的一段温度度。 鉴别实验项目鉴别实验项目172）法定测定方法：）法

7、定测定方法：毛细管测定法，分三法：毛细管测定法，分三法：第一法：测定易粉碎的固体药品第一法：测定易粉碎的固体药品 第二法：测定不易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品 第三法：测定凡士林或其他类似物第三法：测定凡士林或其他类似物质质 18初熔初熔全熔全熔19 3）影响熔点测定的主要因素）影响熔点测定的主要因素a. 传温液传温液 mp.在在80以下的，用水以下的，用水 mp.在在80以上的，用硅油或液体以上的，用硅油或液体 石蜡石蜡 b. 毛细管毛细管 中性硬质玻璃管，长：中性硬质玻璃管，长： 9cm 内径：内径：0.91.1mm 壁厚：壁厚：0.100.15mm c. 升温速度升温速度

8、 11.5 /min 熔融同时分解熔融同时分解 2.5 3 /min d. 温度计温度计 0.5刻度，且经校正刻度，且经校正20（2）比旋度比旋度： 在一定波长与温度下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm1dm且每且每1ml1ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g1g的溶液时测得的旋光度称的溶液时测得的旋光度称为比旋度。为比旋度。 反映手性药物特性及其纯度的主要指标反映手性药物特性及其纯度的主要指标 用途：鉴别药品用途：鉴别药品 纯度检查纯度检查 含量测定含量测定21鉴别实验项目鉴别实验项目 例1: 溴化新斯的明项下所述：“本品的熔点为171176，熔融时同时分解”。 例2：

9、 如维生素C的比旋度测定：“取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释使成每1ml中约含0.10g的溶液，依法测定，比旋度为+20.5至+21.5”。 22 （3）吸收系数吸收系数： 在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收系数收系数。 表示方法表示方法： 摩尔吸收系数摩尔吸收系数 百分吸收系数百分吸收系数 用用 途：途： 检查纯度检查纯度 测定制剂含量测定制剂含量鉴别实验项目鉴别实验项目%1cm1E23例1：鉴别是（ ）。A.判断药物的纯度 B.判断已知药物的真伪C.判断药

10、物的均一性D.判断药物的有效性E.确证未知药物24例2：溶质1g（mL）能在溶剂1000mL中不能完全溶解（ ）。A.极易溶解B.几乎不溶或不溶C.微溶D.溶解E.略溶25例3：中国药典收载的熔点测定方法有几种？测定易粉碎固体药品的熔点应采用哪一法（ ）。A.2种，第一法B.4种，第二法C.3种，第一法D.4种，第一法E.3种，第二法26例4：中国药典规定，熔点测定所用温度计（）。A.有分浸型温度计B.必须具有0.5刻度的温度计C.必须进行校正D.若为普通型温度计，必须进行校正E.采用分浸型、具有0.5刻度的温度计，并预先用熔点测定用对照品校正27例5：药品检验工作程序（ ）。A.性状、检查、

11、含量测定、检验报告B.鉴别、检查、含量测定、原始记录C.取样、检验（性状、鉴别、检查、含量测定）、记录与报告D.取样、鉴别、检查、含量测定E.性状、鉴别、含量测定、报告28例5：药物的性状项下包括（ ）。A.外观B.臭C.溶解性D.味E.剂型29例6：我国药典对“熔点”测定规定如下（ ）。A.记录初熔时温度B.“初熔”系指出现明显液滴时温度C.“全熔”系指供试品全部液化时的温度D.重复测定三次，取平均值E.被测样品需研细干燥30 例7：mp（ ）。A.百分吸收系数B.比旋度C.折光率D.熔点E.沸点31 依据某一类药物的依据某一类药物的化学结构化学结构或或理化理化性质性质的特征，通过化学反应来

12、鉴别药的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪物的真伪鉴别实验项目鉴别实验项目一般鉴别试验一般鉴别试验32无机药物无机药物: : 根据阴、阳离子根据阴、阳离子（钠盐、钙盐、（钠盐、钙盐、硫酸盐、氯化物）硫酸盐、氯化物）的特殊反应的特殊反应, ,并以药典附并以药典附录项下的一般鉴别试验为依据；录项下的一般鉴别试验为依据；有机药物有机药物: : 多采用典型的官能团反应多采用典型的官能团反应（芳香第一胺、水杨酸盐）芳香第一胺、水杨酸盐）. .鉴别实验项目鉴别实验项目一般一般鉴别试验鉴别试验33只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。例如:钠盐的焰色试验,不能辨认是氯化钠、苯钾酸钠或者是其它某一种钠

13、盐药物.只适用于确认单一单一的化学药物，对多种药物的混合物或有干扰物存在时，不适用。 鉴别实验项目鉴别实验项目一般一般鉴别试验鉴别试验34无机酸盐无机酸盐有机酸盐有机酸盐无机金属盐类无机金属盐类有机氟化物类有机氟化物类芳香第一胺类芳香第一胺类托烷生物碱类托烷生物碱类丙二酰脲类丙二酰脲类中中 国国 药药 典典351.有机氟化物有机氟化物无机氟化物无机氟化物 茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈pH 4.3蓝紫色蓝紫色络合物络合物36 1 有机氟化物有机氟化物 （地塞米松、依诺沙星、氧氟沙星、醋酸曲安奈德、醋酸氟轻松、醋地塞米松、依诺沙星、氧氟沙星、醋酸曲安奈德、醋酸氟轻松、醋酸氟轻可的松酸氟轻可的

14、松） 取供试品约取供试品约7mg7mg，照氧瓶燃烧法进行有，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用水机破坏，用水20ml20ml与与0.01mol/L0.01mol/L氢氧化钠溶氢氧化钠溶液液6.5ml6.5ml为吸收液，待燃烧完全后，充分振为吸收液，待燃烧完全后，充分振 摇，取吸收液摇，取吸收液2ml2ml，加茜素氟蓝试液，加茜素氟蓝试液 0.5ml0.5ml，再加再加12%12%醋酸钠的稀醋酸溶液醋酸钠的稀醋酸溶液0.2 ml0.2 ml，用水，用水稀释至稀释至4ml4ml，加硝酸亚铈试液，加硝酸亚铈试液0.5ml0.5ml，即显，即显蓝紫色，同时做蓝紫色，同时做空白对照空白对照试验。试验。 一般鉴

15、别实验鉴别方法鉴别方法37 NaFHFOFCNaOH2蓝紫色配合物硝酸亚铈茜素氟蓝溶液点燃 1、有机氟化物、有机氟化物38F+OOOOCH2NCH2COOHCH2COOH+Ce3+pH4.3OOOOCH2NCH2COOCH2COOCeFOHH蓝紫色39 仪器与材料仪器与材料燃烧瓶为燃烧瓶为500、1000或或2000ml无色、磨口、厚壁、无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空空心，底部熔封铂丝一根，心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状下端呈螺旋状或网状40 本法特点是简便、快速、破坏完本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析全，尤其适用于微量样品的分析

16、41 2 2有机酸盐有机酸盐（1 1）水杨酸）水杨酸1 1）鉴别）鉴别方法一方法一：取供试品的稀溶液，加三：取供试品的稀溶液，加三氯化铁试液氯化铁试液1 1滴，即显紫堇色。滴，即显紫堇色。2 2）反应原理：本品在）反应原理：本品在中性中性或或弱酸弱酸性条件下，性条件下，与三氯化铁试液生成配位化合物，在中与三氯化铁试液生成配位化合物，在中性时呈红色，弱酸性时呈紫色。性时呈红色，弱酸性时呈紫色。 一般鉴别实验422.水杨酸盐水杨酸盐鉴别方法二鉴别方法二FeCl3反应反应OHCOOH6+ FeCl312HClO-COO-2Fe3Fe+弱酸性中性加稀加稀HClHCl，即析出白色沉淀；分离，沉淀溶于，即

17、析出白色沉淀；分离，沉淀溶于醋酸铵溶液。醋酸铵溶液。43（2 2）酒石酸盐酒石酸盐1）鉴别方法鉴别方法：取供试品的中性溶液，置取供试品的中性溶液，置洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，洁净的试管中，加氨制硝酸银试液数滴，置水浴中加热，银即游离并附在试管内置水浴中加热，银即游离并附在试管内壁成壁成银镜。一般鉴别实验一般鉴别实验44 2 2） 反应原理：其反应式为：反应原理：其反应式为： HOCHCOOH + 2Ag(NH3)2OH HOCHCOOH HOCCOONH4 2Ag + + 2NH3 + 2H2O HOCCOONH445 3 芳香第一胺类（1）鉴别方法：取供试品约：取供试品约50mg5

18、0mg，加稀盐，加稀盐酸酸1ml1ml，必要时缓缓煮沸使溶，放冷，加，必要时缓缓煮沸使溶，放冷，加亚亚硝酸钠硝酸钠溶液（溶液（0.1mol/L0.1mol/L）数滴，滴加）数滴，滴加碱性碱性-萘酚萘酚试液数滴，视供试品不同，生成试液数滴，视供试品不同，生成橙黄色橙黄色到猩红色沉淀到猩红色沉淀。 （2）反应原理：重氮化-偶合反应一般鉴别实验46NHOOH(红色）NaOHN_ClNHClNaNO2，+NH2NRRR 47 中国药典2005版二部芳香第一胺反应鉴别的药物 对乙酰氨基酚 盐酸普鲁卡因 艾司唑仑 硝西泮 奥沙西泮 磺胺嘧啶48 4 4 托烷生物碱类托烷生物碱类 （硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪

19、碱、氢溴酸东莨菪碱）（硫酸阿托品、氢溴酸山莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱） （1）鉴别方法：取供试品约）鉴别方法：取供试品约10mg10mg，加发烟硝，加发烟硝酸酸5 5滴，置水浴上蒸干，即得黄色的残渣，放滴，置水浴上蒸干，即得黄色的残渣，放冷，加乙醇冷，加乙醇2-32-3滴，加固体氢氧化钾一小颗，滴，加固体氢氧化钾一小颗，即显深紫色。即显深紫色。 （2 2）反应原理：托烷生物碱类均具有莨）反应原理：托烷生物碱类均具有莨菪酸结构，有菪酸结构，有VitaliVitali反应，显反应，显紫色紫色。后马托品。后马托品具莨菪醇结构而不具莨菪酸结构，无此反应。具莨菪醇结构而不具莨菪酸结构，无此反应。一般鉴别实验

20、49莨菪酸莨菪酸三硝基衍生物三硝基衍生物醌式化合物醌式化合物硝基化反应硝基化反应莨菪醇莨菪醇50 5 5无机金属盐无机金属盐（1 1）NaNa、K K、CaCa的焰色反应的焰色反应 1 1）鉴别方法：取铂丝，用盐酸湿润后，）鉴别方法：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，火焰即显各离子的特征颜色。即显各离子的特征颜色。 NaNa+ + 鲜黄色鲜黄色 K K+ + 紫色紫色 CaCa2+2+ 砖红色砖红色一般鉴别实验512）测定原理：）测定原理： 火焰光谱的谱线不同火焰光谱的谱线不同Na 589.0nm、589.6nm，显黄色。K 766.49nm

21、、769.90nm，由于人眼 在此波长附近敏感度较差，显紫色。Ca 622nm、554nm、442.67nm与 602nm， 622nm的谱线最强，砖红色。一般鉴别实验52 （2 2）铵盐）铵盐 鉴别方法：鉴别方法： 供试品供试品+NaOH NH3a.发生氨臭；发生氨臭；b.b.遇湿润的红色石蕊试纸遇湿润的红色石蕊试纸 蓝蓝c.c.硝酸亚汞硝酸亚汞试液湿润的滤纸试液湿润的滤纸 黑黑一般鉴别实验53NH4+OHNH3+H2ONH43+2Hg (NO3)2+H2OOHgHgNH2 .NO3+2Hg+3 NH4NO3254 6 6 无机酸根无机酸根 （1 1）氯化物）氯化物 鉴别一：鉴别一：硝酸银反

22、应：硝酸银反应： Cl- + AgNO3 AgCl NH3H2O 沉淀溶解 +HNO3 沉淀生成 如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。取滤液进行试验。 一般鉴别实验55 鉴别二 取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰, ,混匀混匀, ,加硫酸湿润加硫酸湿润, ,缓缓加热缓缓加热, ,即发生氯气即发生氯气. . Cl2 + KI-淀粉试纸 蓝色一般鉴别实验一般鉴别实验56 （2）硫酸盐 鉴别一：鉴别一： SO42

23、- + BaCl2 BaSO4 沉淀在 HCl或 HNO3中不溶解。 鉴别二：鉴别二： 取供试品溶液，加取供试品溶液，加醋酸铅醋酸铅试液，即生成白色沉试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在淀；分离，沉淀在醋酸铵醋酸铵试液或试液或氢氧化钠氢氧化钠试液试液中溶解中溶解。一般鉴别实验57 （3）硝酸盐 鉴别一：取供试品溶液，加等量硫酸，混合冷却沿壁管加FeSO4试液,使成两液层，界面显棕色 鉴别二： 取供试品溶液，加硫酸和铜丝，加热即生成红棕色蒸汽。一般鉴别实验58（三）专属鉴别试验（三）专属鉴别试验 证实某一种药物的依据证实某一种药物的依据 它根据每一种药物化学结构的差异它根据每一种药物化学结构的差异

24、及其引起的物理化学性质不同及其引起的物理化学性质不同, ,选用某选用某些些灵敏的定性灵敏的定性反应反应, ,来鉴别药物真伪来鉴别药物真伪. .鉴别实验项目鉴别实验项目59 一般鉴别试验一般鉴别试验, , 区别不同区别不同类别类别的药物。的药物。 专属鉴别试验专属鉴别试验，区别各个药物，区别各个药物单体单体，达，达到最终确证药物真伪的目的。到最终确证药物真伪的目的。60如：母核相同，如：母核相同， 取代基不同取代基不同一般鉴别试验一般鉴别试验某一某一类类药物药物专属鉴别实验专属鉴别实验此类药物中的此类药物中的某一某一种种药物药物61HNNHOOC2H5OC2H5苯巴比妥司可巴比妥钠巴比妥HNNO

25、OONaCH2CHCH2C3H7HNNHOOC2H5O62例1：重氮化反应要求在强酸性介质中进行，这是因为（ ）。A.防止亚硝酸挥发B.可加速反应的进行C.重氮化合物在酸性溶液中较稳定D.可使反应平稳进行E.可防止生成偶氮氨基化合物63例2：影响重氮化反应的因素有（ ）。A.药物的脂溶性B.加入的酸量C.催化剂D.反应温度E.滴定方式64例3：重量分析法分为（ ）。A.萃取法B.挥发法C.酸性沉淀法D.提取沉淀法E.沉淀法65 四四 鉴别方法鉴别方法 化学法化学法光谱鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法色谱鉴别法 生物学法生物学法要求：专属性强、再现性好、灵敏度高、操作简便快速要求：专属性强、再现性好、

26、灵敏度高、操作简便快速66四、鉴别方法四、鉴别方法（一）化学鉴别法（一）化学鉴别法 三氯化铁呈色反应三氯化铁呈色反应(Ar-OH, Ar-OCOCH3) 异羟戊酸铁反应异羟戊酸铁反应(Ar-COOH;-COOR) 1. 显色反应鉴别法显色反应鉴别法 茚三酮呈色反应茚三酮呈色反应(脂肪氨基脂肪氨基,氨基酸）氨基酸） 重氮化重氮化-偶合呈色反应偶合呈色反应(Ar-NH2;-NHCOR) 氧化还原显色反应及其它颜色反应氧化还原显色反应及其它颜色反应 67 与金属离子的沉淀反应与金属离子的沉淀反应 2. 沉淀生成鉴别法沉淀生成鉴别法 与硫氰化铬铵的沉淀反应与硫氰化铬铵的沉淀反应 其它沉淀反应其它沉淀反

27、应(如生物碱沉淀剂）如生物碱沉淀剂） 68 药物本身在可见光下发射荧光药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光药物溶液加硫酸后在可见光下发射荧光 3. 荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 药物与溴反应后，在可见光下发出荧光药物与溴反应后，在可见光下发出荧光 药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光药物与间苯二酚溴反应后，发射出荧光 药物其它反应后，发射出荧光药物其它反应后，发射出荧光 制备衍生物：制备衍生物： 药物试剂药物试剂 具有荧光的衍生物具有荧光的衍生物69 1. 胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处胺类、酰脲类、酰胺类药物经强碱处 理生成理生成氨气氨气 ( NH3 ；NH(C2H

28、5)2) 2.含硫药物经强酸处理后，加热，生成含硫药物经强酸处理后，加热，生成 4. 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 硫化氢硫化氢气气体体(H2S+Pb2+ PbS +2H+) 3.含碘有机药物，加热。生成紫色含碘有机药物，加热。生成紫色碘碘蒸蒸 汽汽 4.含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后，含醋酸酯和乙酰胺类药物酸水解后， 加乙醇可产生加乙醇可产生乙酸乙酯乙酸乙酯705. 制备衍生物测定熔点法制备衍生物测定熔点法 药物试剂药物试剂 新化合物有一定新化合物有一定mp; 药物酸化或碱化生成游离酸或碱。药物酸化或碱化生成游离酸或碱。 操作繁琐费时间，应用较少。操作繁琐费时间，应用较少。71化学鉴

29、别法化学鉴别法化学鉴别法必须反应迅速、现象明显化学鉴别法必须反应迅速、现象明显 类型：类型：(1)(1)呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 (2)(2)沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 (3)(3)荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 ( (4)4)气体生成鉴别法气体生成鉴别法 （5 5）使试剂褪色鉴别法）使试剂褪色鉴别法72(1)(1)呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 三氯化铁呈色反应三氯化铁呈色反应HOOCH3N对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 异羟肟酸铁反应异羟肟酸铁反应OOOCH3CH3CH3氯贝丁酯氯贝丁酯 Cl化学鉴别法化学鉴别法73(1)(1)呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 茚三酮呈色反应茚三酮呈色反应

30、 重氮化重氮化- -偶合呈色反应偶合呈色反应OHOHNH2左旋多巴左旋多巴 HOOCH3N对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚化学鉴别法化学鉴别法74(2)(2)沉淀生成鉴别法沉淀生成鉴别法 与重金属离子沉淀反应与重金属离子沉淀反应 还原基团的银镜反应还原基团的银镜反应 异烟肼异烟肼化学鉴别法化学鉴别法二银盐白色可溶性一银盐取代的巴比妥类药物，3323AgNO CONa AgNO5575 (3)(3)荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 药物本身在可见光下发射荧光药物本身在可见光下发射荧光 药物溶液药物溶液+ +硫酸硫酸 药物溶液药物溶液+ +溴溴 药物溶液药物溶液+ +间苯二酚间苯二酚化学鉴别法化学鉴别法76(

31、4)(4)气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法化学鉴别法化学鉴别法大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某大多数伯胺（铵）类药物、酰尿类以及某 些酰胺类药物些酰胺类药物, ,可经强碱处理后加热产生氨气可经强碱处理后加热产生氨气. . 化学结构含硫药物化学结构含硫药物, ,可经强酸处理后加热可经强酸处理后加热 产生硫化氢气体产生硫化氢气体. .HNNNHNSH2N7H2O硫鸟嘌呤硫鸟嘌呤 巴比妥类药物巴比妥类药物77(4)(4)气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法化学鉴别法化学鉴别法含碘有机药物含碘有机药物 经直火加热可经直火加热可 生成紫色碘蒸气生成紫色碘蒸气. .OOHHOHNNOI碘苷碘苷含醋

32、酸酯和乙酰胺含醋酸酯和乙酰胺醋酸酯类药物经硫酸醋酸酯类药物经硫酸水解后水解后, ,加乙醇可产加乙醇可产生醋酸乙酯的香味生醋酸乙酯的香味. .HOOCH3N对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚78 （二）光谱鉴别法（二）光谱鉴别法1.紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法原理：原理：有机药物具有能吸收紫外可见光的基团，则显示特有机药物具有能吸收紫外可见光的基团，则显示特 征的吸收光谱，不同结构的物质可产生不同的紫外征的吸收光谱，不同结构的物质可产生不同的紫外 可见吸收光谱可见吸收光谱缺点：缺点：光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于IR方法：方法： (1)- (5)特点：特点

33、：具有一定的专属性，仪器普及率高，操作简单，应具有一定的专属性，仪器普及率高，操作简单，应 用范围广用范围广 79v 对照品对照法；对照品对照法；v 规定吸收波长法；规定吸收波长法；v 规定吸收波长和相应的吸收度法；规定吸收波长和相应的吸收度法；v 规定吸收波长和吸收系数法；规定吸收波长和吸收系数法；v 规定吸收波长和吸收度比值法。规定吸收波长和吸收度比值法。 1、紫外光谱鉴别常用的方法：、紫外光谱鉴别常用的方法：801.1.紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法( (Ultraviolet spectrophotometry) )美法仑 测定测定maxmax，或同时测定，或同时测定minmin； 测定

34、一定浓度的供试液在测定一定浓度的供试液在maxmax处的处的A A 规定规定和和E E 规定规定 和和A A1 1/A/A2 2 经化学处理后，测定其反应产物的吸经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。收光谱特性。1281紫外紫外- -可见分光光度法可见分光光度法 546 546 种种红外分光光度法红外分光光度法 593593 种种高效液相色谱法高效液相色谱法 484484 种种薄层色谱法薄层色谱法 199199 种种气相色谱法气相色谱法 3 3 种种821 1 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法测定测定maxmax，或同时测定，或同时测定minmin乙胺嘧啶乙胺嘧啶 供试品在供试品在0.1mo

35、l/L0.1mol/L盐酸介质盐酸介质中的紫外吸收在中的紫外吸收在272nm272nm处为峰处为峰,216nm,216nm处处为谷为谷. .光谱鉴别法光谱鉴别法83测定一定浓度的供试液在测定一定浓度的供试液在maxmax处的处的A A 盐酸布比卡因浓度盐酸布比卡因浓度0.4mg/ml0.4mg/ml溶液溶液, ,在在263nm、271nm波长处有最大吸收波长处有最大吸收. .其吸其吸光度分别为光度分别为0.53-0.580.53-0.58与与0.43-0.480.43-0.48光谱鉴别法光谱鉴别法84 规定规定和和E E 光谱鉴别法光谱鉴别法 经化学处理后经化学处理后, ,测定其反应产物测定其

36、反应产物的吸收光谱特性的吸收光谱特性. .85规定规定和和A1/AA1/A2 2 两性霉素在两性霉素在362nm、381nm、405nm波波长处有最大吸收长处有最大吸收. .规定规定362nm与与381nm处吸收度比值不大于处吸收度比值不大于0.6、 381nm与与405nm波长比值不大于波长比值不大于0.9.光谱鉴别法光谱鉴别法86 在在200 200 400nm 400nm 波长范围内扫描波长范围内扫描两溶液两溶液, ,要求在相同的波长处有要求在相同的波长处有最最大吸收大吸收、最小吸收最小吸收和相同的和相同的吸收吸收系数系数，或，或吸收比吸收比在规定的范围内在规定的范围内. .UPS(29

37、)UPS(29)与对照品比较与对照品比较, ,对比吸收光谱对比吸收光谱 的一致性的一致性光谱鉴别法光谱鉴别法87鉴别鉴别VB12注射液注射液 : :361nm,550nm =3.153.45 88鉴别鉴别VK1 : :243nm,249nm,261nm,270nm :228nm,246nm,254nm,266nm =0.700.7589 2 2 红外光谱法红外光谱法特点：专属性强，应用广（固体、液体、 气体）用途：原料药 同类药（其他方法不易区分的 ） 磺胺类、甾体激素类、半合成抗生素光谱鉴别法光谱鉴别法90 2 2 红外光谱法红外光谱法Ch.PCh.P（20052005） 采用标准图谱对照法

38、采用标准图谱对照法BP BP （20052005） 采用标准图谱对照法采用标准图谱对照法USP USP （2929） 采用对照品法采用对照品法JP JP （1515） 采用规定条件下测定一定波采用规定条件下测定一定波 数处的特征吸收峰数处的特征吸收峰光谱鉴别法光谱鉴别法91 压片法：取供试品压片法：取供试品1mg，置玛瑙研钵中，置玛瑙研钵中，加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约加入干燥的溴化钾或氯化钾细粉约200mg，充分研磨混匀，再抽真空压，充分研磨混匀，再抽真空压片。片。 片子越薄越透明越好，应绝对无水。片子越薄越透明越好，应绝对无水。92n糊法：以两个溴化钾片把药物制成的糊糊法：以两个溴化钾片

39、把药物制成的糊状物夹于其中。状物夹于其中。n膜法：测定液态样品，与糊法测定方法膜法：测定液态样品，与糊法测定方法类似。类似。n溶液法：将供试品制成溶液法：将供试品制成1%10%浓度的浓度的溶液在液体池来测定。溶液在液体池来测定。93 图谱的要求：分辨率为图谱的要求：分辨率为2cm1条件下绘制，条件下绘制，基线一般控制在基线一般控制在90%透光率以上，供试品透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强吸收峰在取样量一般控制在使其最强吸收峰在10%透光率以下。透光率以下。94特征区指纹区95 3 3 近红外光谱法近红外光谱法 测定物质在近红外谱区7502500nm的特征光谱，用化学计量的方法提取信息

40、进行定性、定量分析。 特点：快速、准确、对样品无破坏光谱鉴别法光谱鉴别法963.3.近红外光谱法近红外光谱法(Near-(Near-Infrared spectrophotometry) )97 4 4 原子吸收法原子吸收法 利用原子蒸汽可以吸收由该元素作为空心阴极灯发出的特征谱线，供试液溶液在特征谱线处的最大吸收和特征谱线强度减弱程度进行定性、定量分析。光谱鉴别法光谱鉴别法98 5 5 核磁共振法核磁共振法 测定供试品指定基团上质子峰的化学位移和偶合常数进行药物的鉴别光谱鉴别法光谱鉴别法99 结晶物质的鉴别 比较 供试品 已知物质的X射线粉末衍射图 依据： 各衍射线的衍射角（2） 相对强度

41、面间距X X射线粉末衍射法射线粉末衍射法100色谱谱鉴别法色谱谱鉴别法 适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴适用于复杂环境下药物有效成分及杂质鉴别别, ,具有分离、分析同时进行的特点具有分离、分析同时进行的特点. .高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)供试品和对照品供试品和对照品色谱峰保留时间一致色谱峰保留时间一致. .气相色谱法气相色谱法 (GC)(GC)同同HPLCHPLC要求要求薄层扫描法薄层扫描法(TLC)对照品比较法，对照品比较法， 供试供试品斑点与对照品的品斑点与对照品的Rf值及斑点的颜色应一致值及斑点的颜色应一致.色谱法（色谱法（ HPLC GC TLC MS)HPLC GC

42、 TLC MS)1011.薄层色谱法（薄层色谱法（ TLC)102色谱谱鉴别法色谱谱鉴别法 同浓度对照品在同一块薄层板比较同浓度对照品在同一块薄层板比较 供试品与对照品等体积混合在同一块薄层供试品与对照品等体积混合在同一块薄层板比较板比较 供试品与和其化学结构相似对照品比较供试品与和其化学结构相似对照品比较 将将下两溶液等体积混合点样、比较下两溶液等体积混合点样、比较1.1.薄层色谱法（薄层色谱法（ TLC)TLC)103（三）色谱鉴别法（三）色谱鉴别法 1、薄层薄层色谱鉴别法色谱鉴别法 瑞士瑞士CAMAG SCANNER 3 CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪薄层扫描仪岛津岛津CS-

43、9000CS-9000双波长薄层扫描仪双波长薄层扫描仪104色谱谱鉴别法色谱谱鉴别法高效液相色谱法高效液相色谱法(HPLC)供试品和对照品供试品和对照品色谱峰保留时间一致色谱峰保留时间一致. .内标法时内标法时, ,药物峰保留药物峰保留时间与内标峰保留时间比值一致时间与内标峰保留时间比值一致气相色谱法气相色谱法 (GC)(GC)同同HPLCHPLC要求要求2.2.高效液相色谱法（高效液相色谱法（ HPLC)HPLC)105GC和和HPLC鉴别法鉴别法1062、高效液相高效液相色谱鉴别法色谱鉴别法 气相气相色谱鉴别法色谱鉴别法107色谱谱鉴别法色谱谱鉴别法 在高真空状态下将被测物质离子化在高真空

44、状态下将被测物质离子化, ,按质子按质子的质荷比的质荷比(m/z(m/z) )大小分离进行定性和定量分析大小分离进行定性和定量分析3.3.质谱法（质谱法（MS)MS)1083.质谱鉴别法质谱鉴别法 (Mass Spectrometry)9-HO-LPT #1664 RT: 9.39 AV: 1 NL: 5.18E6T: + c sid=-10.00 Q3MS 50.00-500.0050100150200250300350400450500m/z0102030405060708090100Relative Abundance427.17428.18432.18102.02274.21318.2

45、359.94302.22415.1768.96129.93362.28433.21246.16218.16144.95473.23109 生物鉴别法生物鉴别法 特点：利用微生物或实验动物利用微生物或实验动物 进行鉴别进行鉴别 用途：抗生素抗生素 生化药物生化药物生物鉴别法生物鉴别法110鉴鉴 别别 方方 法法化学鉴别法化学鉴别法光谱鉴别法光谱鉴别法生物学法生物学法 色谱鉴别法色谱鉴别法 HPLC、GC鉴别法鉴别法 薄层色谱鉴别法薄层色谱鉴别法 纸色谱鉴别法纸色谱鉴别法 呈色反应鉴别法呈色反应鉴别法 沉淀生成反应鉴别法沉淀生成反应鉴别法 气体生成反应鉴别法气体生成反应鉴别法 使试剂褪色鉴别法使试

46、剂褪色鉴别法荧光反应鉴别法荧光反应鉴别法 紫外光谱鉴别法紫外光谱鉴别法 红外光谱鉴别法红外光谱鉴别法 111 化学法和仪器法相结合化学法和仪器法相结合, ,每种药每种药 品一般选用品一般选用2 2 4 4种方法进行鉴种方法进行鉴 别试验别试验, ,相互取长补短相互取长补短. . 方法要有一定的专属性、灵敏方法要有一定的专属性、灵敏 性、且便于推广性、且便于推广. . 尽可能采用药典中收载的方法尽可能采用药典中收载的方法. .鉴别法小结鉴别法小结112（2）在维生素C的分子中具有烯二醇的结构，这个结构具有很强的还原性,可以和一些氧化剂作用.ml10(0.2g)水样品)Ag(TSAgNOml53黑

47、色OCO HHC H2O HOO HO H例1.维生素C的鉴别：维生素C分子中具有2个手性C原子,所以具有旋光性,可以通过测定旋光度来进行鉴别.（1） 药典中规定：维生素C的比旋度应为+20.5+21.5鉴别法小结鉴别法小结113 硫酸阿米卡星的薄层色谱法鉴别试验：硫酸阿米卡星的薄层色谱法鉴别试验： “取本品与硫酸阿米卡星标准品适量，分别加水制成每1ml中约含10mg的溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10ul，分别点于同一硅胶H薄层板上，以氯仿-甲醇-浓氨溶液-水（1：4：2：1）为展开剂，展开后，晾干，喷以0.2%茚三酮的水饱和正丁醇溶液，在100加热10min。供试品溶液与标准品

48、溶液所显主斑点的颜色与位置应相同”。 114例1：荧光分光光度（ ）。A.组分的迁移距离与展开剂的迁移距离之比B.测量物质的质量与温度C.检测器与光源成90角D.测量样品与参比物之间的温差随温度的变化E.横坐标以-1表示，纵坐标以T%表示115例2：BeerLambert定律A=lgT=ELC中，A.T.E.L分别代表（ ）。A.A吸收度T光源E吸收系数L液层厚度（cm）B.A吸收度T透光率E吸光度L液层厚度（cm）C.A吸收度T温度E吸收系数L液层厚度（cm）D.A吸收度T透光率E吸收系数L液层厚度（cm）E.A吸收度T透光率E吸收系数L液层厚度（mm）116例3：紫外测定中的空白对照试验（

49、）。A.将溶剂盛装在与样品池相同的参比池内，调节仪器，使透光率为100%，然后测定样品池的吸收度B.将溶剂盛装在石英吸收池内，以空气为空白，测定其吸收度C.将溶剂盛装在玻璃吸收池内，以空吸收池为空白，测定其吸收度D.将溶剂盛装在玻璃吸收池内，以水为空白，测定其吸收度E.将溶剂装在吸收池内，以水为空白，测定其吸收度，然后从样品吸收中减去此值117例4：用于官能团鉴别（ ）。A.紫外线分光光度法B.红外线分光光度法C.直接电位法D.X-衍射光谱E.荧光光谱118例5：高效液相色谱仪常用的检测器是（ ）。A.紫外检测器B.红外检测器C.热导检测器D.电子捕获检测器E.光焰离子化检测器119例6：发射

50、光谱（ ）。A.紫外线分光光度法B.红外线分光光度法C.直接电位法D.X-衍射光谱E.荧光光谱120例7：TCL 法鉴别药物（ ）。A.比较供试品与对照品的死时间B.比较供试品与对照品的保留时间的比值C.比较供试品与对照品的斑点大小D.比较供试品与对照品的比移值E.比较供试品与对照品的斑点颜色121例8：红外光谱法主要用于药物的（ ）。A.鉴别、检查、含量测定B.杂质检查和含量测定C.晶型鉴别D.鉴别、无效晶型检查E.制剂的鉴别、区别和检查122例9：紫外光区（ ）。A.200400nmB.400760nmC.4000400D.4000400-1E.100nm123例10：紫外法用作定性鉴别时

51、，常用的特征参数有（ ）。A.max，a，肩峰B.max，min，A1/A2，E1% 1cmC.末端吸收，E1% 1cmD.max/min，末端吸收E.max，min，A124例11：紫外法用于药物的杂质检查是（ ）。A.利用约物与杂质的等吸收点进行检测的B.彩计算分光光度法求得杂质限量C.利用药物与杂质的吸收光谱的差异，选择合适波长进行检测D.测定某一波长处杂质的百分吸收系数E.测定杂质的一对或几对波长处的紫外吸收度比 125 溶液的浓度溶液的浓度 溶液的温度溶液的温度 溶液的酸碱度溶液的酸碱度 试验时间试验时间鉴别实验条件鉴别实验条件 干扰成分的存在干扰成分的存在1261、IR和和HPLC

52、的广泛使用。的广泛使用。2、制剂中广泛使用制剂中广泛使用IR。3、鉴别条目简练，鉴别条目简练，2条一个药物。条一个药物。127 温度对试验结果有显著影响者，除另有规定外，应以（ E）。A.1030为准B.1530为准C.2030为准D.20-5为准E.25-2为准128 空白试验空白试验：在与供试品鉴别试验完全在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂均同样加入而进行的试验。其它试剂均同样加入而进行的试验。 为了消除为了消除试剂试剂和和器皿器皿可能带来的影可能带来的影响，应同时进行空白试验（响，应同时进行空白试验（blank blank test

53、test）以供对照。）以供对照。鉴别试验灵敏度鉴别试验灵敏度129用已知溶液代替试液同样进行的试验。用已知溶液代替试液同样进行的试验。对照试验用于检查试剂是否变质失效，对照试验用于检查试剂是否变质失效，或反应条件是否控制正常。或反应条件是否控制正常。130 空白试验（ B ）。A.流体药药物的物理性质B.不加供试品的情况下，按样品测定方法，同法操作C.用对照品代替样品同法操作D.用作药物的鉴别，也可反映药物的纯度E.可用于药物的鉴别、检查和含量测定131一一)反应的灵敏度（反应的灵敏度（sensitivity）在一定条件下可以检出的某官能团或离子的最小在一定条件下可以检出的某官能团或离子的最小

54、重量及最低浓度。重量及最低浓度。 最低检出量（最低检出量（minimum detectable quantity） 最低检出浓度（最低检出浓度（minimum detectable concentration） 实际分析方法验证中常用检测限表示实际分析方法验证中常用检测限表示(limit of detection,LOD):样品中被测物能被检出的最低浓度和样品中被测物能被检出的最低浓度和量。量。132应用某一反应，在一定的条件下，能够应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出的供试品的最小量，其单位通常用观测出的供试品的最小量，其单位通常用微克（微克（g）表示）表示。又称检出限量，以又称检出限量

55、，以m表示表示 133应用某一反应，在一定条件下，能够观应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以测出供试品的最低浓度，通常以1G（或（或1V）表示，其中）表示，其中G（V）表示含有）表示含有1g重某重某供试品的溶液的供试品的溶液的g（ml）数。）数。最低检出浓度又称界限浓度。最低检出浓度又称界限浓度。 134若鉴定某离子时是用若鉴定某离子时是用Vml样品溶液，因为样品溶液，因为溶液是很稀的水溶液，所以溶液是很稀的水溶液，所以Vml可认为就是可认为就是Vg，或，或V106g，而最低检出量为，而最低检出量为mg，则：则：1：G=m:V106 或GVm610 135以以K2Cr

56、O4检出检出Pb2+时，将时，将Pb2+溶液稀释至溶液稀释至Pb2=与水的重量比为与水的重量比为1：200000。取。取0.03ml这这种溶液加入种溶液加入K2CrO4溶液，还能勉强看到黄色浑浊。溶液，还能勉强看到黄色浑浊。溶液再稀或取量少于溶液再稀或取量少于0.03ml时就检查不出时就检查不出Pb2+.则15. 02000001003. 01066GVmg 136例如：用不同试剂检出例如：用不同试剂检出Cu2+时，取时，取0.05ml Cu2+溶液试验，各反应的灵敏度为：溶液试验，各反应的灵敏度为：试剂 反应产物及其颜色 最低检出量g 最低检出浓度 HCl HCuCl3 绿色 1 1:50,

57、000 NH3 Cu(NH3)4Cl2 蓝色 0.2 1:250,000 K4Fe(CN)6 K2Cu3Fe(CN)62红褐色 0.02 1:2,500,000 137在与供试品鉴别试验完全相同的条件在与供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其它试剂同样加下，除不加供试品外，其它试剂同样加入进行的试验。入进行的试验。 138五、鉴别试验的灵敏度五、鉴别试验的灵敏度（一）反应灵敏度和空白试验（一）反应灵敏度和空白试验 在一定的条件下，能在在一定的条件下，能在尽可能稀尽可能稀的溶液中观测出的溶液中观测出尽可能少尽可能少量量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为的供试品，反应对这一

58、要求所能满足的程度，即称为反应的反应的灵敏度灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量，即）。它以两个相互有关的量，即最低检出量最低检出量（minimum detectable quantity ）（又称检出限量）和）（又称检出限量）和最低检最低检出浓度出浓度（minimum detectable concentration ）（又称界限浓度）（又称界限浓度）来表示。来表示。 所谓所谓空白试验空白试验，就是，就是在供试品鉴别试验完全相同的条件下，在供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验。（二）提高反应灵敏度的方法（二）提高反应灵敏度的方法 1、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 2、改进观测方法、改进观测方法139用已知溶液代替试液同样进行的试验。用已知溶液代替试液同样进行的试验。对照试验用于检查试剂是否变质失效，对照试验用于检查试剂是否变质失效，或反应条件是否控制正常。或反应条件是否控制正常。140 分析方法验证的指标有（ABCE ）。A.精密度B.准确度C.检测限D.敏感度E.定量限141 用于评价药物含量测定方法的指标有（ BCDE ）。A.定量限B.精密度C.准确度D.选择性E.线性