常用抗凝剂及其配置法

1、常用抗凝剂的配制及用法在医学实验中常需动物的全身抗凝， 采出的全血或血浆有的也需加入适当的抗凝 剂抗凝。对抗凝剂的要求是：用量少、溶解度大、不带进干扰实验的杂质。一、肝素（1）肝素抗凝作用原理肝素的抗凝作用很强 ,作死亡复苏等实验时 ,常用它作动物全身抗凝剂，肝素 的抗凝作用主要是抑制凝血致活酶的活力， 阻止血小板凝聚以及抑制抗凝血酶等 作用，从而使血液不发生凝固。（2）配制和用量纯的肝素10mg能抗凝65125 ml血液（按Img等于125U, 1020U能抗1 ml 血液计 ）。但由于肝素制剂的纯度高低以及其保存时间长短不等，因而其抗凝 效果也不相同。一般可配成 1 肝素生理盐溶液,用时取

2、 01 毫升于试管内, 100 C烘干，每管能抗凝510ml血液。也可将抽血注射器用配好肝素湿润一下 管壁,直接抽血至注射器内而使血液不凝。 在动物实验作全身抗凝时, 一般剂量 为：大白鼠 2530mg/200 300g 体质量，兔 10mgkg 体质量，狗 5 10mgkg 体质量。肝素可改变蛋白质等电点，因此当用盐析法分离蛋白质作蛋 白质各部分的测定时， 不可采用肝素。市售的肝素钠溶液每毫升含肝素 12500U， 相当于 100mg 。（3）注意事项做全血 DNA 提取的时候抗凝剂不能采用肝素！因为肝素是聚合酶链式反应 的抑制剂！二、草酸盐合剂（1）原理草酸胺能使血细胞略为膨大， 而草酸钾

3、能使血细胞微缩小， 因此草酸铵与草 酸钾按 3： 2 比例配置，可使血细胞体积保持不变；加福尔马林则能防止微生物 在血中繁殖。此抗凝剂最适于作红细胞比积测定。（2）配制方法及用量草酸铵 1 2g 、草酸钾 0 8g 、福尔马林 1 0 m l 、蒸馏水加至 100ml 每毫 升血加草酸盐合剂0 1ml（即相当草酸铵1. 2mg，草酸钾0. 8mg）。根据取血量将计算好的草酸盐剂量加入玻璃容器内烤干备用。如取05ml 于试管，烘干后每管可使 5ml 血不凝固。（3）注意事项草酸的作用在于能够沉淀血凝过程中所必需的钙离子， 而达到抗凝目的。 用 时注意加的量应适中， 不能过多， 以免妨碍去蛋白质血

4、滤液的制取。 不适用于血 液内钙或钾的测定，也不能用于血液非蛋白氮测定。三、枸櫞酸钠常配成35%水溶液。也可直接加粉剂，每毫升血加35mg ,即可达到抗 凝目的。枸櫞酸钠可使钙失去活性，防止凝血。但其抗凝作用较差，碱性较强，不宜 作化学检验之用。 仅可用于红细胞沉降速度测定。 急性血压测定实验所用枸櫞酸 钠为 56溶液。四、草酸钾（一）原理和注意事项草酸钾为最常用的抗凝剂。其与血液混合后可迅速与血液中的钙离子结合， 形成不溶解的草酸钙， 使血液不凝固。 常用于非蛋白氮测定， 但不适用于测定钾 和钙。草酸盐能抑制乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶和淀粉酶的活性，故应注意。（二）配制及使用方法取草酸钾 10g

5、 ，加蒸馏水少许使溶解，再加蒸馏水至 100ml 。配制成 10 水溶液，如每管加 0.1ml 则可使 510ml 血不凝。一般如作微量检验，用血量较 少，可配制成 2溶液，如每管加 01ml 可使 12ml 血液不凝。五、乙二胺四乙酸二钠盐（ EDTA）EDTA 对血液中钙离子有很大的亲和力，能与钙离子络合而使血液抗凝。每0.8mg 可抗凝 1ml 血液。除不能用于血浆中钙、钠及含氮物质之测定外，适用 于多种抗凝。六、（酸性）柠檬酸葡萄糖溶液B （ACD）（用于新鲜抽提或者是冻存的血 样品， 实验室常用 ）柠檬酸钠： 1.32% （ M/V ）柠檬酸：0.48% (M/V)葡萄糖： 1.47

6、% （M/V）ACD抗凝剂为：柠檬酸0.48g、柠檬酸钠1.32g、葡萄糖1.47g，加水至100ml , 灭菌后备用一般 20ML 新鲜血液中加入 3.5ML ACD 抗凝剂。比例依次类推！血液可以在 0 度条件下保存数天，或者是零下 70 度条件下无限期保存！从全血中制备基因组DNA, ACD做为抗凝剂要优于EDTA,因为他更加能保 存高分子质量的DNA，然而，血样常常被收集于用定量 EDTA作为抗凝剂的小 管中。在大多数美国的医院中， 收集血样的小管均用颜色标明是否含有抗凝剂， 紫 色顶管盖的小管一般含有抗凝剂， 通常是 EDTA 的干粉。 黄色顶盖的小管不含抗 凝剂。在分子克隆实验中，前者一般用于收集血样用于制备基因组的DNA，后者用于收集血样作为用EB病毒的永生化