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文档简介

1、细菌转化，单克隆挑选及摇菌1. 接种 50100ul 菌液于 5 ml LB 试管中， 37C 250 转/分震荡约 3 小时，至 OD6O0- 0.20.6 时停止振荡透过管能看到手指要挑选细菌活力强时2 、 取 1.5ml 离心管与菌液放冰浴冷却 15min3?将细菌转移至1.5mL的离心管中，4C, 4000转/别离心15min 防止菌体 破裂， 弃上清液4. 以 1ml0.1M 0.2 倍菌液体积 预冷的 CaCI2 重悬细菌沉淀， 冰浴 30min, 4C, 4000 转/别离心 15min ，弃上清液5. 用 250 卩 1 0.05 倍菌液体积预冷的 CaCI2 重悬细菌沉淀6.

2、1 ng 质粒 DNA 参加到感受态细菌中， 轻轻旋转几次以混匀内容物， 冰上 放置 30 分钟7. 将离心管放入 42C 的循环水浴中， 90 秒8. 将离心管置于冰上， 10 分钟9. 参加 200ulsoc 培养基参加了葡萄糖等物质，比 LB 培养基更营养，更利 于 热激后细菌恢复， 200 转 37C45min ，同时将培养平板放入孵箱10. 用一无菌玻璃推板轻轻将转化的细菌均匀地涂于培养基上。玻璃推板 充分 火焰消毒，待充分冷却后再进行涂板，可将推板贴在平板盖内侧，再用手 隔板盖感觉 温度11. 37C 培养箱中正置平板，待液体完全干后再倒置平板，培养 16 小时，将平板取出 4C 放置约 2 小时后观察。挑选单个肉眼能见菌落，坐上在平板上做 上标 记菌落不易太大，否那么有杂菌混入，培养箱中培养不超过16 个小时12. 在超净台内，将细菌挑入 LB 培养基，一个菌落一支管， 180200 转/分 钟过夜 1216 个小时，以菌体浑浊为佳。抽取质粒抽取质粒时每支LB 管 也应对应相应的 EP 管备注LB 培养基制备蛋白胨 1% g/ml NaCl 1%酵母粉 0.5%到此配方为 LB 培养基液体假设配制平板那么加琼脂粉 1.5%氨苄青霉素的储存浓度是 50100ug/ul ，使用时稀释 1000 倍，以下步骤在 超净

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