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1、实验三实验三双缩脲法测定双缩脲法测定蛋白质含量蛋白质含量原理 蛋白质含有两个以上的肽键，因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2形成紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量和氨基酸成份无关。 在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540560nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线，求出未知样品的蛋白质浓度， 注意1、除CONH-有此反应外CO NH2， -CH2-NH2，-CS- NH2等基团亦有此反应。 2、双缩脲法常用于蛋白质的快速测定 。3、低浓度的铵盐不干扰结果；Tris及含氨基酸、多肽的缓冲被以及蔗糖、甘油等干扰本实验。4、

2、反应完后，放置30min；灵敏度低120mg Tris:三羟甲基氨基甲烷盐酸盐操作1 1 2 3 4 52 3 4 5标准酪蛋白（ml）样品（ml）H2O(ml)双缩脲试剂（ml） 1.0 1.0 2.0 2.02.0 1.0 1.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0室温放置室温放置3030分钟，于分钟，于540nm540nm处比色处比色郎伯-比尔定律 1、公式描述2、注意： 当A值在0.20.7之间或者T值在6520%之 间，相对误差较小。课后练习1、记忆五种蛋白质浓度测定方法的优缺点、 灵敏度和原理。2、双缩脲法显色的颜色是什么?3、使用紫外可见分光光度计时，测定A值应当在什么范围内比较合理？为什么？ 在pH=7的水中加入一种纯的蛋白质，形成蛋白质溶液后

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