最终灭菌注射剂的质量控制

1、编辑课件1 最终灭菌注射剂质量控制最终灭菌注射剂质量控制 编辑课件2污染微生物的来源污染微生物的来源内源性的影响因素内源性的影响因素l空气净化系统空气净化系统l水水l工艺过程工艺过程l物料物料 外源性的影响因素外源性的影响因素l人员人员 编辑课件3芽孢是关键控制点芽孢是关键控制点G+G-微生物无处不在微生物无处不在气源性微生物革兰氏阳性菌较多它气源性微生物革兰氏阳性菌较多它们可形成芽孢，难以杀灭们可形成芽孢，难以杀灭因此，药品生产需要因此，药品生产需要HVAC水源性则革兰氏阴性菌居多水源性则革兰氏阴性菌居多不会生成孢子不会生成孢子但会形成细菌内毒素但会形成细菌内毒素编辑课件4一、什么是芽孢？当

2、某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的体眠体，该体眠体即称芽孢（Spore）或孢子。由于其对不良环境的耐受性远高于生长态细胞，常被用于挑战灭菌工艺，以确认被灭菌物品无菌的可靠性。编辑课件5芽孢的特性主要产生于Gram+ 细菌的两个属l芽孢杆菌属 Bacillusl梭菌属 Clostridium能抵御各种恶劣环境，可存活上百万年，因为它l有厚的皮层结构l仅含核酸及少量萌发必需物l含水量极低休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只产生一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，不具上述特性。编辑课件6细菌芽胞（孢）的形成及其特性成熟芽孢孢子壁母细胞孢子壁的形成生长态细胞编辑课

3、件7热对活细胞的作用q有一种可引发克雅氏综合症 (Creutzfekldt- Jakob）的普里昴 ( prion）病原体，在132下加 一小时才可完全杀灭（克雅氏综合症：俗称人体疯牛病）q需氧菌中的芽孢杆菌属(Bacillus)和厌氧菌中的梭状芽孢杆菌属(Clostridium)，耐热性较强q它们能产生内源性孢子/芽孢，或胞间休眠体，对热、干燥及化学消毒剂的耐受性大大增强q这类芽孢的干热灭菌温度一般在100 170，湿热灭菌的温度则在80 129之间。编辑课件8从从“欣弗欣弗”事件谈灭菌工艺事件谈灭菌工艺欣弗事件的发生欣弗事件的发生l20062006年年7 7月月l安徽华源l克林霉素磷酸酯葡

4、萄糖注射液l不良事件报告81例，涉及10个省份编辑课件9欣弗到底怎么了？欣弗到底怎么了？编辑课件10克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯氯化钠注射克林霉素磷酸酯氯化钠注射（100ml:0.6g100ml:0.6g）l采用半无菌工艺生产采用半无菌工艺生产l灭菌条件灭菌条件100100、7 7分钟分钟l贮存条件贮存条件阴凉阴凉l有效期有效期1 1年年l有些企业的处方中含有有些企业的处方中含有苯甲醇苯甲醇l稳定性考察稳定性考察有一批留样的有关物质为有一批留样的有关物质为7.9l有关物质有关物质总杂不得过总杂不得过8.0 单杂不得过单杂不得过5.0编辑课件11克林

5、霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯注射剂产品的调查克林霉素磷酸酯注射液克林霉素磷酸酯注射液（2ml:0.3g2ml:0.3g）l灭菌条件灭菌条件100100、3 31010分钟分钟l贮存条件贮存条件遮光、密闭保存遮光、密闭保存l有效期有效期2 2年年l处方中含有苯甲醇处方中含有苯甲醇l有关物质有关物质总杂不得过总杂不得过6.06.0（20042004年底改年底改为为8.08.0）单杂不得过单杂不得过4.04.0编辑课件12从上述调查从上述调查看国内灭菌注射剂生产的缺陷看国内灭菌注射剂生产的缺陷对灭菌的认识不正确对灭菌的认识不正确产品研发未考虑灭菌产品研发未考虑灭菌工艺的可行性工艺的可行性

6、忽视工艺的可行性，忽视工艺的可行性，盲目跟风报批盲目跟风报批注射剂用原料药的杂注射剂用原料药的杂质控制不严质控制不严忽视产品的安全性忽视产品的安全性编辑课件13中国医药报中国医药报 2007年年1月月4日日 A6版版编辑课件14无菌药品常用灭菌工艺的比较无菌药品常用灭菌工艺的比较类别类别Fo值值微生物存活概率微生物存活概率要点说明要点说明过度过度杀灭法杀灭法Fo1210-6热稳定性产品热稳定性产品以杀灭微生物作为实现无菌的手段以杀灭微生物作为实现无菌的手段残存残存概率法概率法8Fo710-3不能加热的产品不能加热的产品不能除去病毒、支原体等微生物不能除去病毒、支原体等微生物LRV=log re

7、duction value 过滤对数下降值一过滤对数下降值一般上游为般上游为107下游为下游为1，则，则LRV=7由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水由于操作较多，最终产品达到的无菌保证水平远低于除菌过滤的水平平远低于除菌过滤的水平编辑课件15影响湿热灭菌效果的因素影响湿热灭菌效果的因素待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品中含有微生物的种类和数量待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的包装形式待灭菌产品的装载方式和装载数量待灭菌产品的装载方式和装载数量湿热灭菌工艺条件湿热灭菌工艺条件湿热灭菌设备湿热灭菌设备编辑课件16无菌保证水平无菌保证水平SAL无菌保证水平无菌保证水平（Sterility

8、 Assurance Sterility Assurance LevelLevel）l表示物品被灭菌后的无菌状态表示物品被灭菌后的无菌状态l按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低按国际标准，湿热灭菌法的无菌保证值不得低于于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。百万分之一。编辑课件17灭菌工艺验证的必要性灭菌工艺验证的必要性灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品灭菌产品的无菌保证不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的合格的灭菌工艺、严格的GMPGMP管理和良好管理和良好的无

9、菌保证体系的无菌保证体系灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺的验证是无菌保证的必要条件灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产灭菌工艺经过验证后，方可正式用于生产编辑课件18国内企业灭菌工艺验证常见缺陷国内企业灭菌工艺验证常见缺陷无包装规格无包装规格无装载方式无装载方式未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方未对每一种产品每一种包装规格的每一种装载方式进行验证式进行验证采用留点温度计监测温度采用留点温度计监测温度无温度探头校准记录无温度探头校准记录验证的灭菌工艺与实际工艺不一致验证的灭菌工艺与实际工艺不一致未验证最差灭菌条件未验证最差灭菌条件设定的验证合格标准达不到无菌保证水平（设定的验证

10、合格标准达不到无菌保证水平（SAL）10-6生物指示剂使用不规范生物指示剂使用不规范编辑课件19灭菌工艺检查要点灭菌工艺检查要点生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数生产环境和待灭菌产品中含有微生物的种类和数量研究和监控量研究和监控待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量待灭菌产品的包装形式、装载方式和装载数量灭菌工艺条件灭菌工艺条件灭菌设备灭菌设备l关键控制参数的控制和记录仪表的校准关键控制参数的控制和记录仪表的校准l设备维护和维修设备维护和维修灭菌的记录灭菌的记录灭菌工艺的验证灭菌工艺的验证l选用的生物指示剂选用的生物指示剂l热分布试验，找出最冷点位置热分布试验，找出最冷点位置无菌检验

11、样品的取样无菌检验样品的取样编辑课件20无菌检查无菌检查编辑课件21无菌检查的局限性无菌检查的局限性无菌的定义无菌的定义l理论上：无菌没有任何活的微生物理论上：无菌没有任何活的微生物l实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在无法对整批产品进行无法对整批产品进行100%100%检验检验l无菌检验的结果只是一个基于无菌检验的结果只是一个基于“可能性可能性”的判断的判断无菌检验用培养基有其局限性无菌检验用培养基有其局限性l只进行细菌和真菌的检验只进行细菌和真菌的检验l对实验结果的判定是基于对实验结果的判定是基于“是否在培养基中生长是否在培养基中生长”l培养

12、条件（如温度和时间）是有限的培养条件（如温度和时间）是有限的我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态我们的工作环境及操作是在相对无菌的状态编辑课件22美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果美国非肠道药物学会注射剂无菌测试结果试验目的：不合格的可能性试验目的：不合格的可能性(%)试验批量：试验批量：60,000支支试验方法：按美国药典无菌测试方法试验方法：按美国药典无菌测试方法真实的不合格率真实的不合格率测试测试20支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性测试测试40支样品支样品不合格的可能性不合格的可能性118.2%33.1%564.2%87.2%1596.1%99.8%3099.9%100.0%

13、编辑课件23上述无菌测试结果的启示上述无菌测试结果的启示含有少量微生物污染产含有少量微生物污染产品的批次也有可能品的批次也有可能“通通过过”无菌检验无菌检验一批产品的染菌率越低，一批产品的染菌率越低，根据无菌检验的结果来根据无菌检验的结果来判定整批产品的无菌，判定整批产品的无菌，其风险就越大其风险就越大编辑课件24如何用无菌检验来证明整批产品无菌如何用无菌检验来证明整批产品无菌要求有一个取样计要求有一个取样计划来涵盖整个批号划来涵盖整个批号有足够的取样量和有足够的取样量和检验量检验量选择适用的培养基选择适用的培养基采用经验证的无菌采用经验证的无菌检验方法检验方法良好的环境监控良好的环境监控编辑

14、课件25检验标准制定依据检验标准制定依据2003验证指南验证指南 QC-751E注射剂药液过滤前含菌量测定注射剂药液过滤前含菌量测定M-00 061A 注射剂灭菌前药液污染水注射剂灭菌前药液污染水平及耐热性检查平及耐热性检查编辑课件26大容量注射剂举例大容量注射剂举例灭菌前药液的含微生物的计算过程：灭菌前药液的含微生物的计算过程：根据根据2003版药品上产验证指南版药品上产验证指南 lgP=lgN-F0/D121P:灭菌后产品内微生物存活概率灭菌后产品内微生物存活概率 N:灭菌前药液的含耐热孢子的量灭菌前药液的含耐热孢子的量 D121:微生物耐热参数，系指一定温度下将微生物杀灭微生物耐热参数，

15、系指一定温度下将微生物杀灭90%或使之下降一个对数单位所需的时间（分）或使之下降一个对数单位所需的时间（分）lgN = lgP+F0/D121= lgP+FT/DT(N值与值与FT成成正比，与正比，与DT成反比成反比)该产品（葡萄糖）采用该产品（葡萄糖）采用115灭菌灭菌32min,产品灭菌的产品灭菌的F08,为更严格的控制灭菌前产品的生物负载，为更严格的控制灭菌前产品的生物负载，F0取取8计计算。算。编辑课件27大容量注射剂举例大容量注射剂举例DT与生产环境，以及过滤截留得到的微生与生产环境，以及过滤截留得到的微生物有关，需要确认污染微生物的耐热性，物有关，需要确认污染微生物的耐热性，在未检

16、测到耐热微生物时，在未检测到耐热微生物时，DT通常按通常按1计算。为更严格的控制灭菌前产品的生物计算。为更严格的控制灭菌前产品的生物负载，负载， 取取DT 为为1计算。计算。lgN =lg10-6 +8/1 N=100CFU/袋（产品规格为袋（产品规格为250ml）N=40CFU/100ml编辑课件28检测重点检测重点污染水平污染水平微生物耐热性微生物耐热性编辑课件29取样取样 灭菌前药液直接取样，每个样品取样大灭菌前药液直接取样，每个样品取样大容量注射剂（两个最小包装，最少各容量注射剂（两个最小包装，最少各 100mL）。小容量注射剂两份，最少各）。小容量注射剂两份，最少各100mL。灭菌后

17、取样大容量注射剂各约灭菌后取样大容量注射剂各约50mL。编辑课件30检测方法检测方法污染水平检查污染水平检查l先用灭菌的含先用灭菌的含5吐温吐温80的的pH7.0氯氯化钠蛋白胨润湿化钠蛋白胨润湿0.45m滤膜，然后过滤膜，然后过滤滤100mL灭菌前药液，有抑菌性的药灭菌前药液，有抑菌性的药液需用已验证量的缓冲液冲洗滤膜，以液需用已验证量的缓冲液冲洗滤膜，以消除药液的抑菌性），再以无菌方式将消除药液的抑菌性），再以无菌方式将滤膜菌面朝上贴于准备好的胰酪胨大豆滤膜菌面朝上贴于准备好的胰酪胨大豆琼脂培养基（琼脂培养基（TSA）上，同时做）上，同时做1个阴个阴性对照。胰酪胨大豆琼脂培养基在性对照。胰酪胨大豆琼脂培养基在