HIV测定ELISA法珠海丽珠第二人民医院

1、HIV 测定 ELISA 法珠海丽珠）1、检验目的应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）定性检测人血清、血浆标本中的HIV（1+2）型抗体的测定，用于HIV 感染的辅助诊断，抗HIV 药物治疗的效果的监测。2、原理采用夹心 ELISA 方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗体，预包被高纯度基因重组 HIV（1+2）型抗原，可与标本中的抗 -HIV 抗体反应，加入 HRP标记 HIV（1+2）型抗体抗原结合，形成抗原抗体酶标抗原复合物，然后加入 TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度（OD值），根据 OD值判断 HIV 抗体的存在与否。3、性能参数灵敏度高（ 0.

2、5ng/ml ）4、标本要求（1）标本类型：血清，血浆。（2）标本采集：见标本采集手册（3）标本储存和运输：室温放置不超过 8 小时，2- 8不超过 72 小时，- 20 可长期保存，应避免反复冻融（4）标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。5、容器和添加剂类型6、试剂（1）试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2) 型抗体诊断试剂盒。（2）试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司（3）包装规格： 96T/Kit（4）试剂盒组成：、 HIV 酶标板；、 HIV 酶标试剂；、 HIV（ 1+2）型阳性及阴性对照血清； 、显色剂 A液和 B 液；、此外还有浓缩洗涤液、 终止液、自

3、封袋、封板膜、说明书等。7、操作步骤、配液：将 50ml 浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25 倍稀释至 1000ml 备用。、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2 孔、阳性对照3孔，空白对照 2 孔。、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100 l ，用封板膜封板后置 37温育 60min。、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干。、加酶：每孔加酶结合物100l （空白对照孔除外），充分混匀，用封板膜封板后置 37温育 30min。、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5 次程序，洗板后在干净纱布上拍干。、显色：每孔加入底物缓冲液50 l ，

4、TMB 50l ，轻轻振荡混匀，封板后置 37避光显色 10min。、测定：每孔加终止液50l ，轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630 nm），空白调零，读取各孔OD值。、判断结果：计算临界值（cut-off）值。临界值 =阳性对照值 10%。（若阳性对照 OD值 2.5 按 2.5 计算）正常情况下，阴性对照孔的 OD值 0.08 。样品 OD值临界值者为 HIV 抗体阴性。若 1 孔阴性对照的 OD值 0.08 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阴性对照的OD值 0.08 ，应重复实验。正常情况下，阳性对照孔的 OD值 0.80 。样品 OD

5、值临界值者为 HIV 抗体阳性。若 1 孔阳性对照的 OD值 0.8 应舍弃，若有 2 孔或 2 孔以上阳性对照的OD值 0.8 ，应重复实验。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照全国 HIV 检测管理规范送 HIV 确证实验室进行确证试验。10、质量控制：每块板设阴阳性及空白对照， 并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔 OD值采用“即刻法”计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、 储藏温度、试验温度是否正常、 操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11、干扰和交叉反应12、生物参考区间正常人阴性。13、患者检验结果的可报告区间阳性表示 HIV 病毒感染。14、