HPLC法测定盐酸普鲁卡因注射液中分解产物对氨基苯甲酸含量

1、    HPLC法测定盐酸普鲁卡因注射液中分解产物对氨基苯甲酸含量        摘要：目的：研究和测定盐酸普鲁卡因注射液中的降解产物对氨 基苯甲酸。方法：采用离子对HPLC法，固定相Luna 5 C18L-1ml-1范围，线性关系良好，回归方程为C=5.80 4 1×10-5A0.07829，r=0.999 9。回收率为100.2%，RSD=0.32%。结论：本测定方法简便快速，结果准确，可用于该制剂有关物质检查。关键词：盐酸普鲁卡因；对氨基苯甲酸；高效液相色谱法

2、中分类号：文献标识码：A文章编号:1008-9926(2000)06-323-03HPLC Determination of Decomposed Product p-amino Benzoic Acid in Proca ine Hydrochloride InjectionMIAO Hui-Zhu,LIU Yu-Bo,ZHANG Lei(Institute for Drug and Instrument Control Health Dept GLD of PLA,Beijing10007 1)ABSTRACT：Aim To study and determine the decompos

3、ed product p- amino benzoic acid in the procaine hydrochloride injection.Methods In the method, Luna 5 C18L-1ml-1,injected 10l,PABA had a good linearity.Average recovery of PABA was 100.2% with RSD of 0.32%(n=9 ).Conclusion The method is convenient,rapid and accurate,which may be used to assay PABA

4、in procaine hydrochloride injection.KEY WORDS:Procaine hydrochloride;P-Amino benzoic acid;HPLC盐酸普鲁卡因注射液在制备、储存过程中可发生水解反应，生成对 氨基苯甲酸(PABA)。中国药典1995年版规定用TLC法检查该降解产物PABA，限度为不得过1.2 %，其最低检出量0.01g。该检查法由于是以目视比较显色斑点的大小和颜色的深浅，因此 不易判断，尤其是在限度附近。本文采用离子对HPLC法，以峰面积计算PABA含量，使结果更 直观、准确可靠。1仪器与试药LC-6A高效液相色谱仪,C-R3A处理器,S

5、PD-6AV紫外可见分光光度检测器(日 本岛津制作所)。盐酸普鲁卡因对照品(南京制药厂，含量100.0)。对氨基苯甲酸，庚烷磺 酸钠(中国药品生物制品检定所)，超纯水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件2.1.1测定波长选择分别配制盐酸普鲁卡因对照品和PABA对照品的甲醇溶 液（10gml-1L-1磷酸二氢钾，pH 3.0，0.1%庚烷磺酸钠）-甲醇（77 23），检测波长287nm，盐酸普鲁卡因与PABA的分离度满意，按PABA峰计算，理论板数不少于2 000，这时PABA出峰时间约2.7min，普鲁卡因约10min ，PABA与普鲁卡因的分离度符合要求。2.2专属性试验ml-1

6、的对照品溶 液(溶液1)。2.2.2取对氨基苯甲酸对照品，加流动相配制成20g ml-1L-1盐酸溶液制成 20mgml-1ml -1L-1氢氧化钠溶液 制成20mgml-1的溶液，于80加热2h，取该溶液适量，加流动相制成浓度为0.25mg ml-1的溶液(溶液4)。2.2.5取盐酸普鲁卡因对照品，加水制成20mgml-1ml-1的溶 液(溶液5)。分别取上述溶液各10l，在上述色谱条件下注入液相色谱仪，记录色谱；结果表明，本 品主要降解产物为PABA，并与盐酸普鲁卡因得到较好分离(见13)。1盐酸普鲁卡因对照品与PABA对照品溶液HPLC色谱A 盐酸普鲁卡因对照品B PABA对照品L-1盐

7、酸溶液HPLC色谱L-1L-1氢氧化钠溶液B 盐酸普鲁卡因的光照 溶液2.3灵敏度试验ml -1），量取3l，在上述色谱条件下注入液相色谱仪，结果PABA的峰高约为噪音的3倍 (S/N3)，最低检出限为0.3ng，最小定量值约为1ng。2.4线性试验 ml-1ml-1范围内，进样呈为10l，与峰面 积线性关系良好。回归方程为：C=5.804 1×10-5A+0.078 29,r=0.999 92.5回收率试验精密量取PABA浓标准溶液（100gm l-1）1.0ml, 1.2ml及1.5ml各3份于9只10ml量瓶中，分别精密加入盐酸普鲁卡因对照 品溶液（10mgml-1）1.0ml

8、，加流动相至刻度，摇匀，即得PABA回收溶液；另精密 量取PABA浓标准溶液（100gml-1）1.2ml,加流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照 标准溶液。分别吸取以上溶液10l注入色谱仪，按以上色谱条件测定峰面积，计算回收率 ，结果见表2。表2PABA回收率试验结果序号相当测定量（）加入量（g ）测得量（g）回收率（）110021003100410012051001206100120712515081251509125150结果：相当测定量83%、100%、120%的9次回收试验，平均回收率为100.2%， RSD=0.32%。以上结果说明，本测定方法回收结果良好。2.6精密度试验同一PABA

9、溶液连续进样6次，测定峰面积，结果 RSD为0.10%。2.7溶液稳定性试验取浓度为12gml-1的PABA对照品 溶液于0、2、4、8h测定峰面积，结果峰面积基本不变，说明溶液在8h内基本稳定。2.8重复性试验同一批盐酸普鲁卡因注射液，加流动相使成1.0m gml-1浓度的溶液，按回收率测定法测定PABA峰面积，计算含量。结果6次测定含量 分别为3.15%、3.16%、3.19%、3.16%、3.15%和3.18%，平均含量为3.16%，RSD为0.52% 。2.9样品测定ml-1溶液，作为测定溶液；精密称定PABA对照品，加流动相配制成12gml -1的溶液，为对照溶液。分别精密量取以上溶

10、液10l，按上述色谱条件注入液相色 谱仪，测定峰面积，计算注射液中PABA含量。同时按中国药典(1995年版二部)方法（TL C法）测定PABA。结果见表3。 表3盐酸普鲁卡因注射液中PABA含量测定结果(%)批号厂家本法(HPLC法)药典法(TLC法)980930A990827B<1.2*990610B990716B990910B991112B<1.2*970531A970114A1.2*970526C1.2*3讨论 盐酸普鲁卡因注射液收载于美国药典24版及日本药局方 13版（英国药典1998年未收载），该两国药典均未规定测定PABA，原因是该两国药典 的含量测定方法较专属：US

11、P采用碱性氯仿提取后的对照品紫外分光光度法；日本药局方 采用HPLC法测定含量。该两种测定方法均不包括PABA含量；而中国药典采用芳伯氨基 永停滴定法，包括了PABA含量，因此中国药典采用TLC法控制PABA含量是需要的。中国药典采用TLC法检查有关物质PABA，由于TLC法受各种 因素影响较多，不易准确判断，尤其在限度附近，斑点大小，色斑深浅更不好判断。本法采 用HPLC法，直接以峰面积计算含量，结果稳定，直观，准确，重复性好，而且可以进一步研 究用HPLC法同时测定盐酸普鲁卡因和PABA含量，这样更具优越性。中国药典采用TLC法检查有关物质PABA，所用的展开剂为苯 -冰醋酸-丙酮-甲醇(14114),苯的