气相色谱_质谱_GC_MS_联用技术对麝香的多成分含量分析

1、分析气相色谱/质谱(G C/MS 联用技术对麝香的多成分含量分析张皓冰1, 何昱2, 贾国惠2, 洪筱坤2, 王智华2, 叶愈青3(1. 中国疾病预防控制中心寄生虫预防控制所, 上海200025;2. 上海中医药大学中药学院, 上海200032;3. 雷允上药业有限公司, 上海200002关键词:气相色谱/质谱联用技术; 麝香摘要:目的:旨在探索气相色谱/GC/, 法。结果:采用GC/MS , 量, 。:/质谱联用技术是象麝香那样复, 。中图分类号:A文章编号:100121528(2002 1120868204Q uantitative analysis for multi 2Componen

2、ts of musk by gas chromatography/mass spectrometryZHAN G Hao 2bing , HE Yu , JA Guo 2hui , HON G Xiao 2kun , WAN G Zhi 2hua , YE Yu 2qing(1Instit ute f or Parasitic Diease Cont ral and Prevention , CC DC , S hanghai 200025, Chi na ; 2S hanghai U niversity of TCM , S hanghai 200032, Chi na ; 3Lei Y u

3、n S hang Pharmaceutical Co. , L t d. S hanghai 200002, Chi na K ey w ords :G as chromatography/mass spectrometry (GC/MS ; musk ; quantitative analysisAbstract :Objective :This study was designed to investigate the application of gas chromatography/mass spec 2trometry for analyzing the quality of mus

4、k. Methods :Standard curves with internal standard and G as chromato 2graphy/mass spectrometry (GC/MS were utilized. R esults :Muscone , androsterone and cholesterol in both natural and man 2made musk were analyzed quantitatively simultaneously by GC/MS , which was highly selective to the components

5、 to be determined by selecting the characteristic fragments. The study of analytical methodolo 2gy proved that the method above was practical and accurate. Conclusion :G as chromatography/mass spectrome 2try is a powerful arm to analyze the complex system such a musk , which has a promising perspect

6、ive in quality control of traditional Chinese medicinal materials.收稿日期:2002207216作者简介:张皓冰(1962 , 女, 博士, 副研究员, 药物室主任。电话:(021 6437700822603; Email :zhanghaobing麝香众多组分为低级性, 小分子量、具挥发性的物质, 含量测定多采用气相色谱法, 用量少, 方法灵敏。气相色谱定量一般为标准曲线法1和内标法。特别是内标法, 应用尤其广泛, 较多用正十四烷、正十七烷2、正十八烷3、正十九烷4、萘5等为内标。本研究采用GC/MS 联用法, 以睾丸酮为内标

7、, 实现了对多个天然麝香样品中多种成分的定性定量分析。1实验部分1. 1药品与仪器1. 1. 1样品与试剂天然麝香:1号5号样品(原麝麝香 ; 6号、7号样品(麝香仁 ;1号7号样品由雷允上中药研究所提供;8号样品:由四川药品检验所提供; 9号样品:购至青海;10号样品:购自医药公司;人工麝香:由四川药品检验所提供。麝香酮对照品:中国药品生物制品检定所; 雄甾酮对照品:E. Merck 公司; 胆甾醇:E. Merck 公司。1. 1. 2仪器8682002年11月第24卷第11期中成药Chinese Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol. 24

8、No. 11气相色谱2质谱联用仪:AgilentGC6890/AgilentMSD5973; 色谱柱:HP 21MS (19091S 2933 , 30m ×0. 25mm ×0. 25m ; G2613A 自动进样器。1. 2样品供试液制备分别精密称取各天然麝香, 人工麝香及麝香伪品100mg , 以乙醇超声提取3次(15min ×3 , 定容至5mL , 取上清液为供试液。1. 3实验条件1. 3. 1气相色谱仪进样口温度:250°C ; 载气; 氦气; mL min -1; ; :1升温速度(°C/(°C 维持时间(min 16

9、0222200102806总分析时间为44min 。1. 3. 2质谱仪接口温度:280 °C ; 质谱室温度:230°C ; 四极杆分析器温度:150°C 。1. 4标准溶液的配制精密称取麝香酮对照品20. 00mg , 雄甾酮3. 20mg 9. 10mg , 置于, 以无水乙。, , 其出峰时间在雄酮及胆固醇之间, 故选择睾丸酮为内标物。图1为加入内标物的9号样品总离子流图(total ionic chromatogram , TIC 。图1加入内标物睾丸酮(t R 34. 71min 的天麝香样品T LC 图精密称取20. 00mg 睾丸酮, 置于5mL

10、量瓶中,以无水乙醇定容至刻度。2方法学研究2. 1用于定量的质谱碎片的选择用于定量的质谱碎片应该满足:a.为特征碎片; b. 为稳定碎片;c. 有较高含量, 即丰度较大。各组分及内标物用于定量的质谱碎片见表1。表1用于定量的碎片质量标准品睾丸酮(内标 麝香酮雄甾酮胆固醇保留时间34. 74010. 41731. 47041. 304分子离子峰288. 20238. 30290. 30386. 40碎片峰246. 30223. 20275. 20268. 40203. 30209. 20257. 20301. 20124. 10125. 20246. 20275. 202. 2峰纯度的考察以9号

11、样品为例, 分别考察麝香酮、雄甾酮及胆固醇用于定量的各碎片质量色谱图(mass chro 2 matogram , MC 。图2图4为所测3个组分的各碎片质量色谱图。观察各质量碎片峰是否与其他峰重叠, 以此来判断峰纯度。以上3个组分的各质量色谱图表明, 各峰用于定量的质量碎片峰与其它峰均无重叠, 虽然由于雄性激素化合物结构上的相似性, 其它雄激素也有与雄酮相同的离子碎片, 但由于保留时间不同, 相互不重叠, 不影响定量的准确性。2. 3线性关系的考察精密吸取标准溶液稀释, 配制成如表所示浓度范围内的5个浓度水平的标准溶液。分析结果以各9682002年11月第24卷第11期中成药Chinese

12、Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol. 24No. 11 图3雄甾酮(t R 31. 47min 峰纯度考察图4胆固醇峰纯度考察标品量/睾丸酮量的X 轴, 各标品峰面积/睾丸酮面积为Y 轴作标准曲线。结果见表2。表2样品线性关系标准品线性范围线性方程确定系数(r2麝香酮12. 51500. 00(g/ml Y =0. 643X +0. 02080. 999雄甾酮20. 00240. 00(g/ml Y =1. 77X -0. 05980. 996胆固醇56. 9682. 5(g/ml Y =1. 16X +0. 01811. 0002. 4回收率

13、试验精密称取9号麝香样品50. 00mg4份, 其中一分加入0. 5mL 标准溶液(A , 与另一份(B 同时 按1. 2提取, 定容至5mL , 分别加入500L 内标溶液, 进样1L , 测定结果见表3。2. 5精密度试验取level3标准溶液, 连续进样5次, 进样量1L 。选择R TE 积分方式, 以组分峰面积计算天内精密度。每天3次进样, 连续进样3天, 以同样方法计算天间精密度。3各样品测定结果以上述方法测定1号10号天然麝香及人工麝香样品中3种组分的含量。结果见表5。4讨论4. 1本研究在原麝麝香中未检出麝香酮。4. 2本实验一次进样, 可同时测定天然麝香样品中3种组分的含量,

14、实验结果表明该法方便, 快速。在782002年11月第24卷第11期中成药Chinese Traditional Patent Medicine Nov. , 2002Vol. 24No. 11表3回收率试验(n =5组分基础值(g/ml 标准添加值实验值平均值RSD %回收率(% 麝香酮350. 64400. 00754. 10757. 24768. 52733. 72766. 25755. 971. 83100. 71雄甾酮34. 9464. 0098. 72102. 3399. 8895. 94103. 79100. 133. 07101. 20胆固醇157. 22182. 0328.

15、15327. 94333. 17335. 50333. 67331. 691. 0497. 78表4天然麝香精密度试验(n =5组分麝香酮雄甾酮胆固醇天内RSD %0. 01%2. 32%2. 60%天间RSD %1. 34%2. 55%2. 73%, 好, 说明该法的准确度较高。4. 3, 、色谱分, 能表5110(%样品345678910人工麝香麝香酮N. D. N. D. N. D. Below cal. 2. 892. 143. 552. 473. 20雄甾酮0. 1220. 1520. 1460. 21033(0. 080 0. 1090. 2030. 3500. 1920. 794

16、胆固醇0. 5630. 7430. 5890. 6050. 6070. 6700. 2951. 271. 541. 040. 0943N. D. 未检出, 33该峰质谱数据表明为52雄甾2172羟基232酮。4. 4对6号样品, 保留时间在31. 529min 的峰, 由于其保留时间与雄甾酮的保留时间相近, 故进行含量测定时, 仪器不加识别, 将其归为雄甾酮。但从质谱分析中可知,6号样品不含雄酮, 该组分为52雄甾2172羟基232酮。4. 5本研究对人工麝香中麝香酮、雄甾酮及胆固醇的含量也进行了测定, 人工麝香中, 仅含两种雄性激素。雄甾酮含量远远高于天然麝香, 而胆固醇含量远远低于天然麝香

17、。研究表明, 雄甾酮并非天然麝香中主要的性激素。4. 6本研究中, 首次将睾丸酮作为内标物, 无论对麝香酮或甾体成分的定量, 方法学研究均表明, 结果有很好的可靠性。参考文献:1李兆琳, 陈耀祖, 金文, 等. 直接蒸发气相色谱法微量分析中成药挥发性组分2中成药中冰片和麝香酮含量测定J.药物分析杂志,1988,8(1 :629.2马熙中, 于小兵, 陈建军, 等. 应用分析型超临界流体萃取测定苏合香丸中主要成分J.药学学报,1993,28(7 :5372542.3孙政, 汤新兰, 黄学中, 等. 片仔癀制剂研究组方中麝香酮含量测定J.中成药,1990,12(11 :425.4张正环, 乐佩芳.

18、 天然麝香中麝香酮的气相色谱法测定J.药学学报,1982,17(12 :9222927.5陈万宁, 黄桂如, 孙国安, 等. 小儿回春丸中冰片和麝香酮的含量测定J.中成药研究,1988, (6 :12.本刊刊登产品广告办法本刊广告以刊登全国各地生产的药品、保健食品、药酒类、化妆品以及中西药机械产品的广告为主。1. 刊登广告的要求:在中成药杂志上刊登产品广告, 应以中华人民共和国广告法及广告管理条例为准则, 刊户必须出具:营业执照以及其他生产、经营资格的证明文件; 产品批准文号;有关行政主管部门(广告审查机关 对广告内容进行审查的合格证明, 也即药品宣传准字号。2. 版面费用:见表。版次规格(收费标准黑白彩色封面18×154000元/次封二29×214000元/次封三29×213500元/次封底29×214500元/次内页24×17900元/次3000元/次3. 广告服务收费办法说明:封二、封三、封底用200克铜版纸, 内页黑白为80克书写纸, 内页彩色为200克铜版纸;内页中不满一页的黑白广告, 按所占版面整页900元/次比例折算;设计费另计,200元/次以内, 自行来稿或一般简单设计不收设计