快速液相色谱法与常规高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯及有关物

1、快速液相色谱法与常规高效液相色谱法测定克林霉素磷酸酯及有关物         作者：张斗胜 李进 许明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤 【摘要】 目的 比较分析快速液相色谱法(UFLC)与常规液相色谱法(HPLC)测定克林霉素磷酸酯含量及有关物质。 方法 UFLC法色谱柱采用Waters C18杂化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，流速1.5ml/min；HPLC法色谱柱采用Apollo C18         &

2、#160;              作者：张斗胜 李进 许明哲 王晨 姚蕾 相秉仁 胡昌勤【摘要】  目的 比较分析快速液相色谱法(UFLC)与常规液相色谱法(HPLC)测定克林霉素磷酸酯含量及有关物质。 方法 UFLC法色谱柱采用Waters C18杂化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，流速1.5ml/min；HPLC法色谱柱采用Apollo C18(250mm×4.6mm，5m)，流速1.0ml/min。两方法均以0.1mol

3、/L磷酸二氢钾(85%的磷酸调pH3.5)乙腈甲醇(700150150)为流动相，检测波长210nm。结果 在UFLC法中，克林霉素磷酸酯在0.011.5mg/ml呈良好线性，r=0.9999；最低检测限为20ng；最低定量限为60ng；精密度RSD为0.41%。与HPLC法相比，该法测定克林霉素磷酸酯含量快速、准确、灵敏度高；但测定有关物质，其专属性、准确性不如HPLC法，杂质检出数目少且部分杂质分离不完全。结论 UFLC法可准确、快速、高效测定克林霉素磷酸酯含量，适合在工作量较大的检测项目如制剂含量、含量均匀度及溶出度中应用；但经简单方法转换建立的UFLC方法通常难以胜任对药物复杂体系如有

4、关物质的分析。 【关键词】  快速液相色谱法； 高效液相色谱法； 克林霉素磷酸酯； 有关物质    ABSTRACT  Objective  To compare and analyze the UFLC and HPLC method for determination of the content of clindamycin phosphate and its related substances.  Methods  UFLC: a Waters C18 hybrid column was used, th

5、e flow rate was 1.5ml/min; HPLC: a Apollo C18 Column was applied, the flow rate was 1.0ml/min; 0.1mol/L potassium dihydrogen phosphate (pH was adjusted to 3.5 by 85% phosphoric acid)acetonitrilemethanol (700150150, V/V) as mobile phase; the detective wavelength was 210nm. Results  The linear ra

6、nge of clindamycin phosphate was 0.01 1.5 mg/ml, r=0.9999; the LOD was 20ng and the LOQ was 60ng, and RSD was 0.41%. The accuracy of UFLC method in determination the content of clindamycin phosphate was good, and it was more sensitive and rapid than HPLC, but in determination of related substances,

7、it had a poor performance.  Conclusion  The UFLC method was proved to be simple, accurate, rapid and high efficient, so it could be applied to rapid analysis of the content of clindamycin phosphate in preparations that need detect the test items such as content, uniformity of dosage units,

8、 dissolution and so on, however this UFLC method was not suitable for determination of the related substances in the components.    KEY WORDS  Ultrafast liquid chromatography method;  HPLC;  Clindamycin phosphate;  Related Substances  快速液相色谱(ultrafast liquid c

9、hromatography，UFLC)是一种新的快速分析技术，它与超高效液相色谱(ultraperformence liquid chromatography，UPLC)的最大区别是其不需要系统超高压(485830bar)，在略高于普通液相色谱压力极限(345bar)下即可实现高流速、高分辨率分析，适用于要求高通量、高效率的分析工作，在药物分析领域前景广阔1，2。目前，国内外已有UFLC分析药物的报道24。本文以克林霉素磷酸酯注射液为研究对象，借鉴药品标准中收载的HPLC法5，6，建立了克林霉素磷酸酯UFLC分析方法，并与常规HPLC法分析克林霉素磷酸酯含量及有关物质的情况进行了比较。结果表明

10、：UFLC法能准确测定克林霉素磷酸酯含量，适用于工作量较大的检测项目如制剂含量、含量均匀度及溶出度等的快速测定；但对有关物质的分析，经简单方法转换建立的UFLC方法，杂质分离的数目少，部分杂质间的分离度变差，其分离特性不如常规的HPLC法。    1  仪器与试药    岛津液相色谱仪(LC20AT泵，SIL20AC自动进样器，SPDM20A检测器经改装适应快速分离，LC Solution色谱工作站)与Waters Alliance色谱分离单元(2690泵，996PDA监测器，Millinium 2.3色谱工作站)。克林霉素

11、磷酸酯对照品(批号130486200502，含量79.0%)，克林霉素对照品(批号130422200402，含量86.5%)，林可霉素对照品(批号130432200407，含量86.2%)；克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯化钠注射液均由中国药品生物制品检定所提供。磷酸二氢钾、磷酸均为分析纯，水为双蒸水，乙腈、甲醇为色谱纯。    2  方法与结果    2.1  供试品溶液与对照品溶液的制备    (1)供试品溶液  取克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液和克林霉素磷酸酯氯

12、化钠注射液用流动相稀释成0.3mg/ml的溶液，分别称为溶液(A)和溶液(B)。另取上述两供试品溶液同法稀释成3.0mg/ml的溶液，作有关物质分析供试液。    (2)对照品溶液  分别取克林霉素磷酸酯、克林霉素和林可霉素对照品适量，精密称定；加流动相溶解定量稀释制成含上述三种对照品各约0.3mg/ml的混合溶液。    2.2  实验方法    参考文献5，6。UFLC分析采用Waters XTerraTM MS C18杂化柱(50mm×4.6mm，2.5m)，常规HPL

13、C分析采用Apollo C18(250mm×4.6mm，5m)色谱柱。流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾缓冲盐(85%磷酸调pH3.5)乙腈甲醇(700150150)(需用0.22m滤膜过滤)；检测波长210nm；流速分别为1.5ml/min(UFLC)和1.0ml/min(常规HPLC)；柱温25；供试品浓度0.3mg/ml(含测)，3.0mg/ml(有关物质)；进样体积分别为2l(UFLC)和10l(常规HPLC)。    2.3  结果    (1)色谱行为  取供试品溶液(A)，分别用UFLC法和

14、常规HPLC法进行测定，其典型的色谱图见图1。    从图1可知，克林霉素磷酸酯在UFLC测定中的保留时间(tR)约4.3min，56min即可完成分析；在常规HPLC法中，主峰的tR约14.8min。UFLC法在测定时间上较HPLC法快4倍多，且主峰峰型对称，理论板数达7000左右，高于常规HPLC理论板数(约3000)。    (2)方法学验证    线性范围和最低检测限  精密称取克林霉素磷酸酯对照品约30mg，置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀；精密吸取适量，用流动相稀释成0.1、0.3