丹参药材水溶性成分含量的HPLC法浅析

1、丹参药材水溶性成分含量的HPLC法浅析         There is more trouble in having nothing to do than in having much to do.             作者：李曼玲,冯伟红,康 琛,梁日欣,杨洪军,何希荣,黄璐琦We are here to add what we can to life, not to

2、get what we can from it.  【摘要】  目的 建立丹参药材水溶性成分中丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定,色谱柱为Kromosil C18(4.6 mm×250 mm,5 m)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(3010159),流动相：甲醇-冰醋酸-水(20180)；流速：1.0 mL/min；检测波长分别为286、280 nm；柱温35 。结果 测定了10个不同产地的丹参药材,丹酚酸B含量在0.0

3、9%6.81%之间,平均回收率为99.64%,RSD1.09%；丹参素的含量在0.16%0.68%之间,平均回收率为98.94%,RSD1.49%；原儿茶醛的含量在0.01%0.09%之间,平均回收率为98.96%, RSD1.66%。结论 本法简便、准确、重复性好,可作为丹参药材的含量测定标准()。 【关键词】  丹参；丹酚酸B；丹参素；原儿茶醛；高效液相色谱法Key words：Salvia miltiorrhiza Bge.；Salvianolic acid B；Danshensu；Pro

4、tocatechuic aldehyde；HPLCCall no man happy until he dies.      丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根茎,味苦,性微寒,归心、肝经,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的作用。用于月经不调,经闭通经,癥瘕积聚,胸腹刺痛,热痹疼痛,疮疡肿痛,心绞痛等。丹参的主要药效成分之一是丹参中的水溶性成分,主要是酚酸类化合物丹酚酸B、丹参素和原儿茶醛。我们采用HPLC法建立了这3种成分的含量测定方法,可用于丹参及其饮片和制剂的研究

5、及质量控制等。1  仪器与试药If you run after two heares, you will ca.      高效液相色谱仪：HP1100高效液相色谱仪,G1315A DAD检测器,G1311A四元泵,G1313A自动进样器,G1316A柱温箱,G1322A在线脱气机,Agilent ChemStation色谱工作站。丹酚酸B对照品(批号200201)、丹参素钠对照品(批号855-200102)、原儿茶醛对照品(批号0801-9402)均为供含量测定用,购于中国药品生物制品检定所。乙腈：色谱

6、纯,美国；甲醇：色谱纯,北京化工厂；高纯水：自制；其他试剂均为分析纯(医药学/药学论文 )。丹参药材由本所生药室提供。2  方法与结果A thing is bigger for being shared.  2.1  丹酚酸B的含量测定2.1.1  色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm, 5 m)；流动相：甲醇-乙腈-甲酸-水(3010159)；流速：1 mL/min；柱温：35 ；检测波长s286&#

7、160;nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于4 000。在此条件下丹酚酸 B与其他组分达到良好分离(见图1)。2.1.2  供试品溶液的制备取本品粉末(过3号筛)0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入75%甲醇50 mL,密塞,称定重量,加热回流1 h,取出,放冷,再称定重量,用75%甲醇补足减失的重量,摇匀,用微孔滤膜(0.45 m)滤过,取续滤液,即得。2.1.3  对照品溶液的制备取丹酚酸B对照品适量,加75%甲醇溶解并制成每1 mL含0.14 mg的溶液,即

8、得。2.1.4  标准曲线的绘制  分别精密吸取对照品溶液(0.14 mg/mL) 4、8、12、16、20 L,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹酚酸B的进样量为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线,并计算回归方程：Y-0.153 6895.6X,r0.999 6,结果表明,丹酚酸B在0.562.8 g范围内呈线性关系。2.1.5  精密度试验 It is a small flock that has not a black.  取供试品溶液

9、1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5 L,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD0.28%。2.1.6  重复性试验 平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5 L,测定丹酚酸B含量,经计算, RSD2.24%。The wise hand doth not all that the fool.  2.1.7  稳定性试验  取供试品溶液1份,上述色谱条件下,分别于样品制备后第0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹酚酸B含量,经计算,RSD1.

10、76%。2.1.8  加样回收率试验 One ploughs, another sow; who will reap  取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹酚酸B对照品,按上述色谱条件测定,计算回收率,丹酚酸B为99.64%,RSD1.09%。见表1。表1  丹酚酸B回收率试验结果（略） 2.1.9  含量测定按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材丹酚酸B的含量进行测定。结果见表2。表2  不同产地丹参药材丹酚酸B的含量测定结果（略） 免费论文下载中心

11、60; 2.2  丹参素和原儿茶醛的含量测定Deeds are fruits; words are but leaves.  2.2.1  色谱条件 色谱柱：Kromasil C18(4.6 mm×250 mm,5 m)；流动相：甲醇-冰醋酸-水(20180)；流速：1 mL/min；柱温：35 ；检测波长s280 nm。理论板数按丹参素峰计算应不低于4 000。在此条件下,丹参素、原儿茶醛与其他组分达到良好分离(见图2)。2.2.2 

12、 供试品溶液的制备 取丹参药材粉末(过3号筛)约0.2 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水25 mL,密塞,称定重量,超声提取1 h,取出,再加热回流4 h,取出,密塞,再称定重量,用水补足减失的重量,摇匀,滤过。取续滤液,即得。2.2.3  对照品溶液的制备 精密称取丹参素钠、原儿茶醛对照品适量,分别加甲醇溶解,并制成每1 mL分别含丹参素钠0.08 mg(相当于丹参素0.07 mg)、原儿茶醛0.012 mg的溶液,即得。Deeds are fruits;

13、 words are but leaves.  2.2.4  标准曲线的绘制 分别精密吸取丹参素钠对照品溶液(0.08 mg/mL)和原儿茶醛对照品溶液(0.012 mg/mL)各3、6、9、12、15 L,注入高效液相色谱仪,测定峰面积。以丹参素钠和原儿茶醛的进样量(g)为横坐标,以峰面积的积分值为纵坐标,绘制标准曲线并计算回归方程。丹参素钠Y-7.147 2406.353X,r0.999 1；原儿茶醛Y-0.772 7 4 943.475X,r0.999 2。结

14、果表明,丹参素钠在0.241.2 g范围内呈线性关系；原儿茶醛在0.0360.18 g范围内呈线性关系。2.2.5  精密度试验 取供试品溶液1份,在上述色谱条件下连续进样5次,每次进样5 L,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD1.26%,原儿茶醛的RSD0.86%,二者之和的RSD1.13%。  2.2.6  重复性试验 平行制备5份供试品溶液,分别在上述同一色谱条件下,分别进样5 L,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD2.60%,原儿茶醛的RSD0.66

15、%,二者之和的RSD2.20%。Deeds are fruits; words are but leaves.  2.2.7  稳定性试验  取供试品溶液1份,在上述色谱条件下,分别于样品制备后0、1、2、4、8、16、24 h进行测定,测定丹参素、原儿茶醛含量,经计算,丹参素的RSD0.58%,原儿茶醛的RSD1.47%,二者之和的RSD0.58%。Quality is better than quantity.  2.2.8  加样回收率试验 取已知含量的丹参药材粉末,分别加入等量的丹参素钠、原儿茶醛对照品,按上述色谱条件测定,二者回收率分别为98.94%和98.96%,RSD分别为1.49%和1.66%(见表3、表4)。表3  丹参素钠回收率试验结果（略）表4  原儿茶醛回收率试验结果（略）2.2.9  含量测定 按供试品溶液制备方法,分别对10个不同来源丹参药材中的丹参素、原儿茶醛的含量进行测定。结果见表5。表5  不同来源丹参药材中丹参素、原儿茶醛的含量测定结果（略）3 &