葡萄球菌属检验

1、 1.概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌, 包括金黄色葡萄球菌、 表皮葡萄球菌、 腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等 35个种, 17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病 葡萄球菌。2. 标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。3. 鉴定3.1 形态与染色 革兰阳性球菌,成单、双、短链或不规则葡萄状排列。3.2 培养特性 金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色, 周围有明显的 溶 血环, 部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。 在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。 表皮葡萄球 菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色,多数不溶血。3.3 生化反应 金黄色葡萄球菌触酶试验阳性,分解葡萄糖

2、、麦芽糖、蔗糖和甘露醇, 不分解棉子糖和水杨苷,明胶、血浆凝固酶和 DNA 酶试验阳性,七叶苷试验阴性。3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征 革兰阳性球菌,呈葡萄状排列,触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血 琼脂平板上菌落呈金黄色或白色, DNA 酶和血浆凝固酶试验均阳性,发酵苷露醇。3.4.2 与微球菌属的鉴别 葡萄球菌属葡萄糖 O/F试验为发酵型, 镜下以葡萄状排列为主, 菌体较小,而微球菌属为氧化型或无反应,镜下以四联排列为主,且菌体较大。3.4.3 与链球菌属的鉴别 葡萄球菌属 O/F试验为发酵型,触酶试验阳性,链球菌属葡 萄糖 O/F试验为氧化型,触酶试验阴性。3.4.4 凝固酶试验阳

3、性葡萄球菌的鉴别见下表 1。表 1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验菌名 凝固酶 触酶 溶血 硝酸盐 海藻糖 半乳糖 苷酶金黄色葡萄球菌金黄色亚种 + + + + + -金黄色葡萄球菌厌氧亚种 + - + - - -施氏葡萄球菌聚集亚种 + + + + - ND中间葡萄球菌 + + d + + +海豚葡萄球菌 + + + + - ND S.lutrae + + + + + +猪葡萄球菌 d + - + + -注:“ +” 为 90%以上菌株为阳性, “ -” 为 90%以上菌株为阴性, “ d ” 为 11%-89%阳性, “ ND ” 为无资料。3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色 观察

4、菌落特征,在血平板上挑取可疑菌落,涂片染色镜检。3.5.2 触酶试验 参见触酶试验标准操作规程 。3.5.3 凝固酶试验 参见凝固酶试验标准操作规程 。3.5.4 鉴定 从血琼脂平板上挑取纯菌落, 用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。4. 药敏参见药物敏感性试验标准操作规程及 CLSI M100-S20最新版本文件。5. 质量控制 参见质量管理程序 。6. 检验结果解释与分析6.1 由于葡萄球菌分布广泛,从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时,将其定为致病菌 时应慎重。 应根据凝固酶试验进一步确认。 对可疑菌株的鉴定, 最好利用商品化的鉴定系统 根据生化图谱进行确定。 表皮葡萄球菌分离自导管

5、相关血流感染时, 通常视为致病菌。 溶血 性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时, 尤其是细菌量较大或作为优势菌时, 通常被视为致 病菌。6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌(MRSA 对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。 如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和 -内酰胺药 /-内酰胺酶抑制剂类抗生素,对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若 葡萄球菌属对四环素敏感, 则对多西环素和米诺环素敏感。 某些菌对四环素中介或耐药, 而 对多西环素和米诺环素敏感。 临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗 3-4日后, 原来敏感 的葡萄球菌易产生耐药。 所以对这类葡萄球

6、菌需多次反复进行药敏试验。 大环内酯类耐药葡 萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“ D ”试验以检测克林霉素诱导性 耐药,根据“ D ”试验结果来报告克林霉素的耐药性。7. 临床意义葡萄球菌属在自然界分布很广。存在于空气、水、尘埃及皮肤上的葡萄球菌大多数无致 病性。金黄色葡萄球菌主要引起局部组织的化脓性感染(疖、痈和创伤感染 、菌血症、心 内膜炎等全身感染等,也可引起骨髓炎、 化脓性关节炎、 肺炎和深部脓肿等。腐生葡萄球菌 引起尿道感染、 前列腺炎、 外伤和菌血症等。 溶血葡萄球菌引起心内膜炎、 菌血症、 腹膜炎、 尿道感染、外伤、骨折和关节炎等。MRSA的治疗:轻度感染可选用 SMZ-TMP 和喹诺酮类,严重全身感染选用万古霉素或其他 糖肽类药物。8. 鉴定流程 参考文献1 中国合格评定国家认可委员会 .CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临 床微生物学检验领域的指南 .20082 周庭银编著 . 临床微生物学诊断与图解 . 第二版 . 上海:上海科学技术出版社, 2007 3 叶应妩,王毓三,申子瑜主编 . 全国临床检验操作规程 . 第 3版 . 南京:东南大学出版社, 20064 Murray