培养基(含测试试剂)质量控制规程03-506D模板

1、文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00培养基（含测试试剂）质量控制规程一、培养基制备要求培养基的一般性状：液体培养基应透明、清亮，颜色符合要求。固体培养基应表面湿润但无水汽、平整光滑，厚薄均匀，一般厚度在3mm（M-H 平板厚度不得 4mm）。斜面的长度不得超过试管长度的2/3) 。PH值应在规定值 0.2 的范围内。培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：1. 根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用

2、的试剂药品应进行质量检验。2. PH 测定及调节： PH 测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其 PH 有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基 PH 值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压灭菌可影响一些培养基的PH 降低或升高，故不宜灭菌压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完PH 后再加入。3. 培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤， 以除去沉淀物， 必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净凉干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明

3、度。4. 盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。5. 培养基的灭菌既要达到完全灭菌目的，又要注意不因加热而降编制人：王飞批准人：戴春阳第 1页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00低其营养价值，一般12115min 即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、 明胶等，则应采用低温灭菌或间歇法灭菌，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、抗菌素等，待基础琼脂高压灭菌后凉至 50左右再加入。6. 每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化

4、培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置 4冰箱存放。7. 目前各种干燥培养基较多， 每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用， 新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测 PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。8. 每批制备的培养基所用化学试剂、 灭菌情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。二、培养基的质量控制培养基的质量控制主要包括三方面的内容： pH 测试、无菌试验以及已知菌生长试验。如果使用商品化脱水培养基，严格按照说明操作，一般不必再进行 pH测试。如果使用基础

5、物质进行培养基制备， 在培养基冷却后须进行 pH 测试。如果 pH测得值与预期值相差 0.2 单位，则需要酸碱调节；无菌试验一般为随机抽样 3-5 ，在 35条件下培养 48h。如果抽样中每个培养基上出现 2 个以上菌落，证明本批培养基已被污染；已知菌生长试验的前提条件是实验室有足够的已知菌储备，其中包括标准菌株 ( 如 ATCC或 NCTC标准菌株 ) 及经过准确鉴定的临床分离菌。如果条件允许，提倡使用标准菌株。有关常用培养基的已知菌生长试验见表1。编制人：王飞批准人：戴春阳第 2页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程 文件编码：WHHD

6、SPJT/QM03-506D-00表 1 常用培养基已知菌生长试验培养基孵育条件已知菌株 (ATCC)预期结果血琼脂需氧或化脓性链球菌 19615生长并产生 a- 溶血C0， 24h肺炎链球菌 6305生长并产生 - 溶血2大肠埃希菌 25922生长巧克力琼脂CO 2，24-48h淋病奈瑟菌 43069生长流感嗜血杆菌 10211生长麦康凯琼脂需氧， 24h大肠埃希菌 25922生长，粉红色菌落( 不含结晶紫 )奇异变形杆菌 12453生长，无色菌落，迁徙现象受抑制鼠伤寒沙门菌 14028生长，无色菌落粪肠球菌 29212生长金黄色葡萄球菌 25923生长，粉红色菌落大肠埃希菌 25922生长

7、，粉红色菌落麦康凯琼脂需氧，24h奇异变形杆菌 12453生长，无色菌落，迁徙现象受抑制( 含结晶紫 )鼠伤寒沙门菌 14028生长，无色菌落粪肠球菌 29212抑制 ( 部分或完全 )编制人：王飞批准人：戴春阳第3 页共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00金黄色葡萄球菌 25923抑制 ( 部分或完全 )鼠伤寒沙门菌 14028生长福氏志贺菌 12022生长SS琼脂需氧， 24h粪肠球菌 29212抑制 ( 部分或完全 )大肠埃希菌 25922抑制 ( 部分或完全 )大肠埃希菌 25922生

8、长营养肉汤需氧， 24-48h金黄色葡萄球菌25923生长( 无添加物 )1、无菌试验 新制备的培养基要按批号随机抽取一定数量的标本作无菌试验。无细菌生长结果合格，有细菌生长，说明培养基已受杂菌污染，除了寻找原因外，应不再使用。对于分装后进行灭菌的培养基， 一般随机抽取 5%10%，置 35卵育24h。对无菌手续分装的培养基，则应对全部培养基 35卵育 24h。对选择性培养基，应取部分培养基加入 1020 倍无抑制性肉汤培养基如 TSB，稀释抑制物质，置 35卵育 24h。2、细菌生长试验要用已知标准菌株按照NCCLS推荐的方法测定培养基性能是否符合要求。保存避光 。避热。存放阴凉处，其保存期

9、限与所用储存的容器类型有关。常用的保存期为：编制人：王飞批准人：戴春阳第 4页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00用脱脂棉堵塞的试管，1 周；用软木塞堵的试管， 2 周；有旋盖的容器， 3 周；平皿培养基（放在密封的塑料袋中） ，41 周；平皿培养基，当天。表2 5种常用培养基的质量鉴定培养基名称质控菌株ATCC鉴定标准血平板金黄色葡萄球菌25923中度到大量生长化脓性链球菌19615生长，溶血肺炎链球菌6305生长，溶血大肠埃希菌25922生长巧克力平板流感嗜血标菌10211生长脑膜炎奈

10、瑟菌13090生长淋病奈瑟菌43096生长SS平板鼠伤寒沙门菌14028生长，无色菌落，有或无黑心福氏志贺菌12022生长，无色菌落粪肠球菌25912全部抑制大肠埃希菌25922部分或全部抑制TCBS平板霍乱弧菌9459生长，黄色菌落副溶血弧菌17802生长，蓝色菌落大肠埃希菌25922部分或全部抑制营养琼脂平板 福氏志贺菌12022中度到大量生长培养基空气卵育时间质控菌株（ ATCC 号）预期结果24h鼠伤寒沙菌（ 14028）传代生长肉汤需氧宋内氏志贺菌（9290）传代生长大肠埃希氏菌（25922）传代受抑制鼠伤寒沙菌（ 14028）生长，无色到琥珀色菌落EMB需氧24h粪肠球菌（ 929

11、0）（部分）大肠埃希氏菌（25922）生长，蓝黑色菌落编制人：王飞批准人：戴春阳第 5页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00鼠伤寒沙菌（ 14028）生长，蓝至蓝绿色菌落，有黑心HE需氧24h福氏志贺氏菌（12022）生长，绿至蓝绿色菌落大肠埃希氏菌（25922）抑制（部分至完全，黄色菌落）用冻存的质控菌种最多向下传三代， 就应更换质控菌种。 过多的传代会增加表型改变的机会。制备工作质控菌种，用冻存的质控菌种接种一个琼脂斜面或平板，卵育过夜或得到足够的量为止。 这些工作琼脂斜面或平板上的培

12、养物应贮存于 28，或者室温，可放 4 个星期。菌种再传代后应检查纯度和典型的菌落形态。厌氧菌的工作质控菌株应在庖肉培养基或其它适宜的厌氧肉汤培养基中保存，或冷冻保存菌种，不应使用琼脂斜面或平板。三、细菌染色的质量控制染色是细菌学检查最常使用的方法，根据染色部位及染色目的不同可分为革兰染色、抗酸染色、鞭毛染色、异染颗粒染色和荚膜染色等。其中革兰染色和抗酸染色使用频率最高。 现对这两种染色方法加以说明。1革兰染色1) 严格按照标本收集程序取样并涂片2) 对涂片进行严格编号或标识3) 在固定涂片时，避免玻片加热过度4) 染液放置处避免高温、干燥及灰尘5) 利用过滤的方法去除结晶紫的固体结晶6) 如

13、果卢戈氏碘染液褪色，应立即更新7) 利用标准菌株 ( 金黄色葡萄球菌 ATCC25923及大肠埃希菌 ATCC25922)或其他已知的革兰阳性菌及革兰阴性菌至少每周进行一次质量验证编制人：王飞批准人：戴春阳第 6页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-002妻一尼染色1) 严格按照标本收集程序取样并涂片2) 对涂片进行严格编号或标识3) 每次使用新玻片，不可重复使用4) 在固定涂片时，避免玻片加热过度5) 利用过滤的方法去除石炭酸复红染液中的沉淀6) 利用已知的抗酸杆菌 (AFB)阳性涂片每周或

14、在更新炭酸复红染液时至少进行一次质量验证7) 阳性涂片应置于专门器具专门地点保存以备复验8) 阴性涂片至少保存两周以备复验四、细菌鉴定或鉴别常用试验的质量控制细菌鉴定或鉴别主要依据细菌的形念特点、染色特点、培养特征、生化反应及血清学特征等。细菌这些生物表型特征或按固定组合的方式被用于细菌鉴定， 或以灵活组合的方式用于细菌鉴定、鉴别及补充试验。无论怎样，这些生物表型检测的准确与否直接影响细菌鉴定的准确性。下面将列举一些常用且较为关键的试验，并对其质量控制方法加以说明，见表 2。表 2常用细菌鉴定或鉴别试验的质量控制试验名称质控周期阳性质控阴性质控质控菌结果质控菌结果触酶试验每次使用时金黄色葡萄球

15、菌有气泡产生化脓性链球菌无变化编制人：王飞批准人：戴春阳第 7页 共9页文件类型：操作指导书第01版第 0次修改文件名称：培养基（含测试试剂）质量控制规程文件编码：WHHDSPJT/QM03-506D-00凝固酶试验每次使用时金黄色葡萄球菌与人、兔或猪血表皮葡萄球菌无凝固现象浆产生凝固现象氧化酶试验每次使用时铜绿假单胞菌根据方法学不同可大肠埃希菌无颜色改变产生粉红色或紫色奥普托欣敏感性试验每周肺炎链球菌纸片周围出现抑菌圈化脓性链球菌纸片周围细菌均一生长杆菌肽敏感性试验每周化脓性链球菌纸片周围出现抑菌圈无乳链球菌纸片周围细菌均一生长CAMP试验与被测试菌株同无乳链球菌质控菌生长条带在靠化脓性链球菌无溶血程度加重区出现步进行金黄色葡萄球菌区内出现溶血加强胆汁溶菌试验每批号 ( 在允许的储存肺炎链球菌菌落溶解缓症链球菌无菌落溶解现象条件和使用期限内 )胆汁七叶苷试验每批号 ( 在允许的储粪肠球菌使琼脂斜面变黑牛链球菌琼脂斜面无黑色出现存条件和使用期限内 )马尿酸盐试验每批号 ( 在允许的储无乳链球菌出现深紫色粪肠球菌无颜色改