槐米中芦丁的提取和精制实验报告

1、资料实验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（-）实验目的要求1 .制备芦丁，供药用。2 .通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物的提取分离的原理和操作。3 .熟悉重结晶技巧。4 了解和掌握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法。（-）实验的基本原理1 .芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法）。也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进 行提取二2 .芦丁的分离原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解 度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤

2、，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可 再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。3 .芦丁的鉴定原理（1）利用吸附薄层色谱的分离原理，芦丁与芦丁对照品在同一条件下进行展开，显色，以达到鉴定 芦丁的目的。（2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应），确定芦丁的成分类型（黄酮类）。（三）实验内容L用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁。2 .用酸沉法和冷却过饱和法分离芦丁。3 .溶剂重结晶精制芦丁。4 .薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁（四）实验药材仪器与试剂1,实验药材槐米20g。2 .仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、500ml烧杯，1000ml烧杯，50ml烧杯，2

3、50ml 园底烧瓶、500ml园底烧瓶、100ml量筒、50ml量筒、100ml锥形瓶、50ml锥形瓶、研钵、移液管、 减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等。3 .试剂：硼砂、氧化钙、HCI、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醒、丙酮、甲酸、滤纸、PH试纸等。（五）实验步骤1 .提取（水提取法）称取槐米粗粉20g,在研钵中研碎后放入500ml烧瓶中，加水200ml,用磁力加热搅拌器加热煮沸 30min,趁热过滤。残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤， 用少量蒸锚水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，计算得率。2 .精制（醇-水重结晶法）取粗制芦丁 1g,置于

4、250ml园底烧瓶中，加80W乙醇30ml加热回流15分钟，趁热抽滤。滤液置 250ml烧杯中，向滤液中加蒸储水(约34倍量)至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁。用 少量蒸镯水洗涤芦丁结晶，晾干，称重。(六)过程与现象记录Day 1 (2011-05-07)提取6称取研碎的粗槐米20.02g,组装仪器。原料放入500mL烧瓶中加水200mL (1-2),磁力搅拌加热。烧瓶中为咖啡色悬浮液,有甘苦气 味，沸腾前不断产生小气泡上,液体中有明显漩涡(1-3)。1O2C。沸腾,产生大量气泡,药渣翻滚,漩 涵被气泡遮盖(l-4)o加热过程中时常停止沸腾.续略升温23C。随着时间的延长,液体颜色加

5、深。 煮沸规程中应控制液量,过少难以提出药品,过多容易喷出瓶口。3最初用抽滤法分离残渣(1-5),但是溶液很稠且含糖分较多,难以流下(1-6),并且易阻塞和 冲破滤纸,还渐渐冷却。后改用离心法、5000r,l5min(l-7),效果略好,但是溶液还是冷却.溶解的提取 物较少。滤液为深黄色色、粘稠,气味浓厚甘甜。4再次将滤渣至于放入500mL烧瓶中加水200mL磁力搅拌加热30mg液体颜色略比笫一次深。将两次得到的浸液(约300mL)收集放入冰箱备用。Day 2 (2011-05-08)2 .精制1 .将粗提物抽滤(1-7) (1-8) (1-9),干燥得粗制芦丁 (1-10) o2 .取粗制芦

6、丁1.008g,置于250ml园底烧瓶中,加8徽乙醇30ml,加热回流15分钟(1-11),加 热前没有充分分散固体粗提物,趁热抽滤(1-12),得到黄色油状液体(1-13)。3 .另旋转蒸发粗提物的滤液(1-14),没有产物。Day 3 (2011-05-14)3 .鉴定(1)点滴显色反应 从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液(供试液)分别点在滤纸上,挥去溶 剂,紫外照射,光吸收明显(1-15),然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂型三氯化铝乙醉溶 液,显黄色(1-16),在紫外灯下入365rlm观察有明显亮斑(1-17) o(2)薄层色谱鉴定资料吸附剂:硅胶GF254薄层板(5.0cm

7、 X 10.0cm) o样品：自制芦丁(用甲醇溶解，浓度约对照品：芦丁对照品的甲醇溶液。展开剂：三氯甲烷-甲醇-甲酸(7 ： 3 ： 0.5)显 色：a光在可见光下观察,然后在紫外光下观察,有明显紫外吸收。(365nm紫外灯下观 剽b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂(1-18), 365nm紫外灯下观察,右侧有显色剂 至黄色,左侧有明显紫外吸收(1-19)。4 .注意事项(1)硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起保护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用。实脸证明， 提取时加入硼砂，产品的质量会好些。(2)石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，还可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂(形成钙 盐沉淀)，但PH不能过高和长时间煮沸，因为会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质 量和产率。(3) PH过低(酸性太强)会使芦丁形成洋盐而收率降低。(4)称量芦丁时，先将带滤纸的漏斗称重，再将盛样品的带滤纸的漏斗称重，差重即为样品的重量。 (七)结果计算及分析产率小漏斗+滤纸重29.69g抽滤后小漏斗+滤纸+样品重30.20g桂品净重0.51g产率二(0.51/1.008) x 100=50.60比移值 Rf=3/5.75=0.522分析：1、水提法不能充分溶解芦丁;2、精制时粗提物聚集成固体颗