重组蛋白表达与纯化服务(南京德泰生物2014版手册)

1、切注蛋白活件及抗体应用德泰生物Detai Biologies蛋白表达、纯化服务技术服务手册（2014 版） 德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案目录重组蛋白表达服务1原核蛋白表达服务1可溶保证型原核蛋白表达服务（ 不成功，零收费，基因免费 ）1原核上清保证型服务2重组蛋白表达鉴定服务 3蛋白复性服务3高密度发酵服务4哺乳动物蛋白定制服务 5瞬时转染蛋白表达服务 5稳定转染蛋白表达服务 6重组抗体制备服务 7昆虫细胞蛋白表达服务 8其他蛋白表达服务9蛋白纯化服务9密码子优化9内毒素控制及去除 10病毒包装服务11重组蛋白表达服务重组蛋白表达与纯化技术广泛应用于生物技术、生命科学

2、和医学等研究领域。用于重组蛋白表达的宿主细胞通常来源于原核细胞，哺乳动物细胞，杆状病毒-昆虫细胞和酵母等蛋白表达系统。近十年来，随着药物蛋白的快速发展与应用，高纯度活性蛋白的需求量也与日俱增。南京德泰生物凭借专业的蛋白表达技术，可提供毫克至克级高纯度活性蛋白定制服务。我们的成功率在95%以上，我们专注高质量的蛋白生产，有效地节约您的成本和科研时间。原核蛋白表达服务德泰生物公司的大肠杆菌原核重组蛋白表达系统，可提供纯度大于95%的纯化蛋白，服务成功率大于95%。所具有的上清蛋白表达技术为客户遇到的表达量低，包涵体等问题提供全面的解决方案。研发人员的丰富蛋白复性经验、内毒素控制去除技术也使我们的原

3、核蛋白表达服务平台广受青睐。在重组蛋白表达实验中，大肠杆菌凭借其易于培养、繁殖迅速以及遗传稳定等优势被广泛使用。但在实验中，研究人员也会碰到一些问题：1. 目标蛋白表现为不可溶，形成包涵体。2. 蛋白质不表达或表达量很低。3. 细胞周质内含有种类繁多的内毒素。德泰生物在大肠杆菌重组蛋白生产方面，有着数十年的研究经验。我们通过公司自有的技术对大肠杆菌表达系统进行优化，例如，表达载体与表达菌株的选择、表达条件优化、上清表达技术、蛋白质复性技术，内毒素检测控制去除技术等，可以有效解决蛋白质表达量低、目标蛋白不溶或难溶、免疫毒性等问题，蛋白成功交付率大于95%。可溶保证型原核蛋白表达服务（不成功，零收

4、费，基因免费）南京德泰生物的可溶蛋白表达服务是我们原核蛋白表达技术服务的重要类型，主要适合于重组蛋白表达量低，包涵体复性难的情况。南京德泰生物的可溶蛋白保证型套餐的交付成功率大于95%，自研密码子优化技术及复性技术保证了交付蛋白的可溶性及更高的天然折叠性。网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案原核上清保证型服务上清蛋白表达服务是我们原核蛋白服务的高级类型,主要适合于重组蛋白上清表达量低，包涵体复性出的重组蛋白无法正常折叠，客户对上清蛋白情有独钟的情况。南京德泰生物的上清蛋白表达保证型套餐会通过优化基因序列，选择优化载体，筛选优化表达条件等多种方式保证上清蛋白的表达量。(B

5、)Expiession CcndiLton MautxConSfULjiCE*r>StraiiriChapRron«I.InduGer刖TomporaturoAl*Cddco Oplim：注oikC) Cell LysateSontcation5678917 2541*48原核上清服务流程重组蛋白表达鉴定服务南京德泰生物的重组蛋白表达鉴定服务是原核重组蛋白定制服务的组成之一。主要适合于已知基因序列，但表达量较少或者表达为包涵体的情况。南京德泰生物会分析基因序列和相应的蛋白序列信息。针对表达条件进行优化，并为客户提供表达过程报告。网址：蛋白复性服务蛋白质复性是通过人工手段将蛋白质

6、从无活性形式转变成活性形式的过程。蛋白质复性是基因工程技术中的重要手段。在目的蛋白基因转入原核表达体系或真核表达体系进行表达时，由于表达系统的自身原因以及目的基因密码子的特异性，表达出的蛋白质很容易聚集成包涵体。南京德泰生物提供的包涵体复性服务可以使您从繁琐的复性方法尝试中解脱出来。我们的技术服务团队拥有多年的蛋白质复性经验，已经成功应用到已交付的客户蛋白。南京德泰生物的蛋白质复性服务会考虑到不同蛋白质包涵体的特定结构与理化特性，采用不同的变复性方法。 复性条件包括pH、温度、蛋白浓度、离子浓度等。复性辅助剂包括分子伴侣、氧化还原对等。包涵体蛋白复性过程19.6 psHel*css 1 And

7、 4 abgnmonti B.9 ps19.2 ps包涵体蛋白复性案例介绍1. 蛋白复性前：蛋白B201表达为包涵体，以单体的形式存在，没有活性2. 复性后，蛋白获得正确的折叠，并有关键二硫键形成，二聚体活性很高德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案网址：RS|德泰生物目 Mtai叭加活性蛋白整体方案高密度发酵服务南京德泰生物的重组蛋白大规模制备服务是原核重组蛋白定制服务的组成之一。我们拥有5升、50升、1000升的发酵罐，提供流程开发、细胞高密度发酵、发酵参数优化、重组蛋白大规模制备及纯化等多项服务。发酵流程图网址：德泰生

8、物Detai Biologies活性蛋白整体方案哺乳动物蛋白定制服务哺乳动物细胞凭借蛋白折叠和翻译后修饰的优点，使其蛋白更接近天然蛋白， 从而获得与天然蛋白相同的生物活性。由哺乳动物系统表达的重组蛋白通常应用于功能蛋白，抗体生产和临床疫苗等。德泰生物提供的哺乳动物细胞重组蛋白表达服务，主要包括目标基因生物信息学分析，瞬时表达，稳定细胞系的开发，以及重组抗体的生产。我们通常采用无血清悬浮细胞培养的方法，对HEK293 （人胚肾细胞系统）和 CHO（中国仓鼠卵巢细胞系统）等宿主细胞进行培养。凭借着公司数百平米的细胞房和多名专家提供的的技术支持，我们可以同时交付多个项目，并能够根据用户的要求生产出克

9、级重组蛋白。我们的哺乳动物细胞蛋白表达服务具有以下优势：自主研发高产率表达系统 proEM,产能表现卓越自主知识产权密码子优化技术，考虑到蛋白表达的诸多因素数百平方百级细胞房，可同时承担客户多个项目和多个中试项目全程服务：设计基因、瞬转、稳定细胞株、重组抗体生产、数据及报告整理。我们提供一站式服务及终生售后。瞬时转染蛋白表达服务瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,仅存在于游离的载体上，不整合到细胞的染色体上。哺乳动物瞬时转染表达需要在外源基因导入哺乳动物细胞后的1-4天后，收获细胞并对目的基因进行表达分析。网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案网址：德泰生物Detai B

10、iologies活性蛋白整体方案哺乳动物瞬时转染表达技术服务流程Purtficjni&ni900网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案稳定转染蛋白表达服务CHOffl胞是在稳定细胞系中应用最广泛的细胞。德泰生物针对proEM系统定向驯化的pro-CHO细胞，在重组蛋白生产过程中表现出很高的产能和细胞密度。pro-CHO 还可以根据客户特殊的培养基成分进行驯化。在蛋白表达过程中，pro-CHO展示卓越的生长代谢特征，不管是在摇瓶，还是在wave或细胞罐中，其强劲的生长曲线为蛋白高产奠定了坚实的基础。稳定转染是指外源基因进入受体细胞并整合到细胞的染色体上，使宿主细胞可

11、长期表达目的基因。 稳定转染表达需要在瞬时转染表达基础上根据不同表达质粒中所含有的抗性标记不同，选用相应的药物对靶细胞进行筛选，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。我们的优势：最新技术双压力proEM系统，全面提升高表达稳定细胞系成功率。严谨的细胞来源：细胞来源可追溯，商品化的培养基。宽广的表达对象：重组单抗、蛋白、抗体或蛋白片段稳定高产：重组单抗可达2g/L,1.8x10 7cell/ml周期短：从DNA到细胞株只需要3-4个月全程技术支持稳定转染表达技术服务流程德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案8« taction markerI Jk(optional)Ce

12、ll fait duracter izalion &Ptomm (fcinHicpfHBril网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案重组抗体制备服务南京德泰生物自主开发的proEM高表达系统，特别适合在 293或CHO细胞中，快速高效地建立重组单抗的稳定表达细胞系。在这些稳定转染的细胞系中，抗体基因被稳定重组在293或CHO细胞的基因组中，可以稳定高效地表达鼠兔或人等哺乳动物的单克隆抗体。南京德泰生物创新型的双压力筛选系统，可以高效的将稳定转染的细胞筛选出来，经过 ELISA和SDS-PAGE表达检测后，在无血清的培养基中进行表达优化，放大生产。稳定表达的细胞系要

13、比瞬时转染的细胞表达量高几倍至几十倍，为下游的抗体生产节省了大量成本。我们较好的一株稳定表达细胞，达到1.3g/L抗体表达量。 德泰最终会交付 3株表达最好的细胞株给客户。同时可以帮客户生产百克级的 重组单克隆抗体。自主研发的proEM高表达系统，最适合用于重组抗体高表达保证型，零风险，不成功，不付费高表达，高稳定性，可达 1.3g/L高表达无血清培养，无任何动物源污染宽广的表达对象包括：全长抗体、Fab、scFv等快速的交付周期：3个月重组抗体技术表达服务流网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案inns 2&#

14、187; otCHO-S Nm«tM0CFIB3I1H4 C«4I UlWScnwHingEjqprniiiefiIfiG AjilibMiyCoorn-aisioBlueIgG 黑migy ELtSA* NnwyCWielt.hrOwPriaABin GPurrflcjbDn网址：德泰生物Detai Biologies活性蛋白整体方案活性蛋白整体方案昆虫细胞蛋白表达服务通常应用于大规模重组蛋白的制备。昆虫细胞蛋白表达服务流程转化抗生素海选提取杆状DNA质輕愛组噬當斑测定敷价f德泰生物Detai Biologies供大规模BEVS蛋白生产，并根据客户需求进行纯化及生物活性测

15、试。BEVS还可以同时表达多个外源基因，在保证分泌蛋白生物活性的同时增加产量。因此德泰生物的杆状病毒一昆虫细胞蛋白表达服务包括病毒制备和大规模蛋白生产等项目。我们可以提供整套BEVS技术服务，对客户提供的基因序列分析测试，提供免费密码子优化，以提高蛋白表达量；同时，我们可以提网址：BEVS属于真核表达系统，通过 BEVS得到的重组病毒易于筛选、具有翻译后修饰功能、表达外源基因的效率较高BEVS 在科研和工业生产中杆状病毒表达载体系统（baculovirus expression vector system， BEVS是当今基因工程四大表达系统之一。网址：德泰生物Detai Biologies活

16、性蛋白整体方案其他蛋白表达服务蛋白纯化服务蛋白纯化的总体目标就是要在高效率、高产率的条件下获得高纯度、 高活性和完整的目标蛋白。目标蛋白不同、蛋白来源不同、蛋白研究目的不同，选择的蛋白质纯化方法也应有所差异。从原理上讲，蛋白质纯化主要基于蛋白 质在溶解性、电荷性、分子量大小或者亲和特异性等特性。从蛋白质纯化过程来说，一般需要经过蛋白质样品预处 理、分离提纯、精细提纯等步骤。德泰生物拥有先进的 AKTA纯化系统和全套预装的离子柱、分子筛、疏水柱和亲和柱。专业的蛋白质纯化团 队，可以根据目的蛋白的特点以及样品的来源，利用凝胶过滤、离子柱、分子筛、亲和柱、电泳、共价色谱等蛋白 纯化技术为您制定最适合

17、的蛋白纯化方案。初步获得的目标纯化蛋白， 再经过制备级的 HPLC可以获取超高纯度的蛋白，用于结晶等高级应用。蛋白质纯化案例介绍1 M 246810121416 IS 20 M 22”66 kD无标签蛋白多步纯化-目标蛋白 Protein V1 （14.7Kd）,杂蛋白（10Kd）Lane 1:初步纯化后的目标蛋白与杂蛋白，靠的很近Lane 2-15:经过离子柱，分子筛与疏水柱，多重纯化，目标蛋白被分离 该项目难点：无标签蛋白，杂带与目的蛋白靠的很近网址：fed德泰生物3 mtai Bi恥伽活性蛋白整体方案密码子优化密码子优化涉及的优化点可以从基因合成、载体构建、基因转录、mRNA翻译、翻译后

18、修饰等过程中提取,目的只有一个，就是便于相关过程的高效达成。以下内容将详细列举优化参数，并对关键参数进行概括描述。内毒素控制及去除内毒素(endotoxin )是革兰氏阴性细菌细胞壁中的一种成分，叫做脂多糖(LPS)。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。各种细菌的内毒素大致相同，可引起发热、微循环障碍、内毒素休克及播散性血管内凝血等。内毒素耐热而稳 定，160 C 2-4小时才可被破坏。一般环境中，如空气中微尘，普通水，未处理仪器和器皿，都有内毒素。涉及细 胞和动物实验时，一般对内毒素控制都有要求。南京德泰生物为您提供内毒素检测服务，包括半定量的凝胶法检测，和绝对定量的显色法，可以精确的检测出网址： 样品的内毒素水平，基于鲎试剂的显色法和凝胶法，是目前国际上最精准的检测方法，很多制药巨头如默克，Lonza ,都在优先使用该方法。内毒