高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠

1、高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠1原理 酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱 仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。2试剂2.1 甲醇:分析纯，经滤膜( HF 0.5 )过滤；2.2 无水乙醚：分析纯；2.3 无水乙醇：分析纯；2.4 6N 盐酸：取 3638%的盐酸 500ml，定容至 1000ml；2.5 4%氯化钠溶液：称取 40.0g氯化钠 ,定容至 1000ml；2.6 0.02M乙酸铵溶液： 1.54g乙酸铵定容至 1000ml,溶解后经滤膜 (HA 0.45)过滤；2.7 苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸 0.1000g加 2%碳酸氢钠溶液 1

2、ml,搅拌溶 解,加水定容到 100ml，苯甲酸浓度为 1mg/ml ；2.8 苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液 10ml，放入 100ml 容量瓶中， 定容至刻度，苯甲酸浓度为 0.1mg/ml。3高效液相色谱条件3.1Spectra-Physics高 效液相色谱仪；3.2色谱柱： Spherisorb ODS1 4.6mm 200mm；3.3检测器：紫外检测器，波长 230nm，灵敏度 0.2 AUFS3.4流动相：甲醇 :0.02M 乙酸铵（ 5： 95）；3.5流速： 1ml/min ；3.6进样量： 10 l ；3.7允许差：相对误差 10%。4操作方法：4.1 样品预处理：称取

3、均匀的酱油样品 5.0g放入 125ml的分液漏斗中，加 入6N盐酸 1ml 酸化，用 1510ml 无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入 125ml 分液漏斗中， 用 4%的氯化钠溶液约 10ml 分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入 80ml 蒸发皿 中，温水浴挥干，分别用 10ml 无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放入 100ml 容量 瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸馏水定容至刻 度，用 0.45 （ HA）滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。4.2 测定操作：开机预热 30min 并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测器 稳定后，用 25 l 微量进样器吸取供试液进样，绘图积分

4、，得供试样品的吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公式算出样品中苯甲酸的含量4.3 计算公式：C iA i Co 1= n Aom式中 Ci 样品中苯甲酸的含量 ; Ai 测定样品的吸收峰面积 ;Co 配制的标准苯甲酸溶液的浓度 Ao 标准苯甲酸溶液的吸收峰面积 n 测定样品的稀释倍数 ;m 测定样品的质量。5. 实验数据：5.1 实验操作过程的重现性测试：取均匀的金标生抽王样品，分装成五份，每份 5.0g，按上述的样品预处 理方法分别进行萃取操作(每次萃取操作尽可能完全一致)，得五个待测样 品，分别进样检测，用外标峰法确定苯甲酸的含量。五次萃取操作数据比较 如下表：表 1

5、实验操作重现性数据表样品编号12345苯甲酸标准(0.1mg/ml)样品质量 (g)5.005.005.005.005.00吸收A1129.2110.5111.098.3117.3峰面A2101.4112.191.1117.0490.7积(104)115.3111.3101.198.3117.2样品中苯甲酸含量( g/kg )0.4700.4540.4120.4010.478样品中苯甲酸 平均含量 (g/kg)0.443相对误差 (%)6.12.4-7.0-9.56.1结论：从表中可知，连续五次同样的萃取操作所得的结果都较为接近，相对误 差在允许范围 10%以内，完全符合标准要求，因此，从实验

6、操作过程的重现 性来分析，用该操作方法测定苯甲酸的含量是稳定可行且符合标准要求的。5.2 高效液相色谱仪进样的重复性 (稳定性)测试：取 0.1mg/ml 苯甲酸标准使用液，用 25 l 微量进样器进高效液相色谱 仪,绘图积分 ,测出苯甲酸的吸收峰面积 ,以同样的操作手法连续进样 6次,将各 次的吸收峰面积数据比较如下表：表 2高效液相色谱仪稳定性测试数据表：进样编号123456吸收峰 面 积 (104)452.0424.5452.4465.8450.6431.9平均吸收峰面 积 (104)446.2相对误差 (%)1.3-4.91.44.41.0-3.2结论：由上表数据可知，连续 6 次进样

7、所得的实验结果都十分接近，相对误差 在允许范围 10%以内，因此，从仪器稳定性方面考虑，本实验所用的高效液 相色谱仪作为测定苯甲酸含量是符合标准要求的。5.3 苯甲酸浓度 吸收峰面积的线性关系实验：分别配制 0.1mg/ml 、0.05mg/ml 、0.01mg/ml 、0.001mg/ml 的苯甲酸溶 液，分别进高效液相色谱仪测定吸收峰的面积，得数据如下表：表 3苯甲酸浓度 吸收峰面积关系表：苯甲酸的浓度 (mg/ml)0.0010.010.050.1吸收峰119.862.8294.3537.7面积 (104)220.069.0293.6541.0319.266.3286.0560.1吸收峰

8、平均 面 积 (104)19.766.1291.3546.30 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.10苯甲酸浓度 C 吸收峰面积 A 关系曲线结论：由上面所作的“苯甲酸浓度 吸收峰面积关系曲线”可以看出，在苯 甲酸浓度比较接近的范围内，样品的吸收峰面积与苯甲酸浓度成正比的线性 关系。5.4 乙醚萃取苯甲酸的回收率测试：样品 A (不加标准样)：取金标生抽王样品 5.00g，按照上述的样品预处 理方法得样品 A (不加标准样)。样品 B(加标准样) ：取金标生抽王样品 5.00g，加入 0.0100g 苯甲酸， 溶解后按样品预处理方法得

9、样品 B(加标准样 )。做两组相同的样品 A 和样品 B，分别测定回收率，数据如下表：表 4 乙醚萃取苯甲酸的回收率数据表：样品A1B1A2B2金标生抽样品 质量 (g)5.005.005.005.00加入苯甲酸的质量 (g)0.01000.0100吸收峰面积 (104)1144.3605.8118.0614.32123.5609.0117.0575.13149.6609.4117.3579.1平均吸收 峰面积 (104)139.1608.1117.5589.5苯甲酸标准吸收峰面积 (104)490.7490.7回收率()95.696.25.5 自来水空白萃取实验及最低检测量的测试：取 5.00g 自来水作为空白样品，按样品的预处理方法进行萃取操作，测 定其色谱吸收峰面积；取 5.00g 苯甲酸溶液 (1mg/1000ml)，按样品的预处理 方法进行操作，测定其色谱吸收峰面积，所得的实验数据如下表：表 5 自来水空白及最低检测量测试数据