金属离子的标定

1、金属离子的标定一、溶液配制1、pH5.8 的六次甲基四胺溶液：先配制20%的六次甲基四胺溶液，然后再酸度计上用6mol·L-1HCl调至pH5.8。2、0.2%二甲酚橙水溶液10mL。3、0.02mol·L-1EDTA溶液500mL。4、0.02 mol·L-1 Zn标准溶液：准确称取在8001000灼烧过（需20min）取适量ZnO于100mL烧杯中，用少量水润湿，然后逐滴加入1:1HCl，边加边搅拌至完全溶解为止。然后移入100mL容量瓶中稀释至刻度并摇匀。5、EDTA标准溶液的配制与标定：准确移取20.00mL自制的锌标准溶液于锥形瓶中，加入1-2滴0.2%

2、的二甲酚橙指示剂，滴加六次甲基四胺溶液使溶液呈紫红色后，再加入4mL，用EDTA溶液滴定，当溶液由紫红色变为亮黄色，即为终点。平行滴定三次，其体积差不超过0.04mL，取平均值，计算EDTA标准溶液的浓度。6、PbAc2溶液的配制与标定：称取适量醋酸铅置于烧杯中加水溶解后转移至100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20.00mL上述醋酸铅标准溶液于锥形瓶中，加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴加六次甲基四胺溶液使溶液呈紫红色后，再加入4mL，用EDTA溶液滴定，当溶液由紫红色变为亮黄色，即为终点。平行滴定三次，其体积差不超过0.04mL，取平均值，计算醋酸铅标准溶液的浓度。7、0.05M

3、 pH=8.2的Tris-HCl缓冲液。8、配合物中Ni含量的分析 称取一定量NiCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述配合物溶液于锥形瓶中，加入2滴1：1盐酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，加入过量的EDTA标准溶液，在室温下仍为紫红色，用80水浴加热至溶液由紫红色变为亮黄色后，再用锌标准液反滴至溶液呈玫瑰红色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，去平均值，计算金属离子的准确含量。9、配合物中Cu含量的分析 称取一定量CuCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容

4、量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述配合物溶液于锥形瓶中，加入2滴1：1盐酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，加入过量的EDTA标准溶液，溶液由紫红色变为亮黄色后，再用醋酸铅标准液反滴至溶液呈微红色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，去平均值，计算金属离子的准确含量。10、配合物中Zn含量的分析 称取一定量CuCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述配合物溶液于锥形瓶中，加入2滴1：1盐酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺

5、缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，用EDTA标准液滴定，溶液由紫红色变为亮黄色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，去平均值，计算金属离子的准确含量。11、配合物中Co含量的分析 称取一定量CoCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述溶液于锥形瓶中，加入10mL30%H2O2，加入2滴1：1盐酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，于80水浴中，用EDTA标准液滴定，溶液由紫红色变为亮黄色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，去平均值，计算金属离子的

6、准确含量。12、配合物中Mn含量的分析称取一定量MnCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述配合物溶液于锥形瓶中，加入2滴1：1盐酸水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，用EDTA标准液滴定，溶液由紫红色变为亮黄色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，去平均值，计算金属离子的准确含量。13、配合物中Fe含量的分析称取一定量FeCl2，用蒸馏水溶解后移入100mL容量瓶中，定容，摇匀。准确移取20mL上述配合物溶液于锥形瓶中，加入10mL30%H2O2，加入2滴1：1盐酸

7、水溶液，在加入1-2滴0.2%的二甲酚橙指示剂，滴定20%的六次甲基四胺缓冲液使溶液成紫红色后，再加入4mL，加入过量的EDTA标准溶液，溶液由紫红色变为亮黄色后，再用醋酸铅标准液反滴至溶液呈微红色，即为终点。平行滴定三份，其体积差不超过0.04mL，取平均值，计算金属离子的准确含量。抗氧化实验方案二、清除DPPH-自由基实验在1.95mL 56.0M DPPH中加入0.05mL不同浓度的样品乙醇溶液。在517nm下，每隔5s测一次吸光度AT，直到吸光度值不再下降为止。以1.95mLDPPH乙醇溶液+0.05mL乙醇为空白对照，吸光度Amax。以1.95mL乙醇+0.05mL样品的吸光度为A0

8、。以Vc为阳性对照。清除率%=1 (AT A0)/Amax1、计算IC50，2、DPPH与抗氧化物质化学当量数的确定确定不同组分与DPPH·反应的化学当量数n（molDPPH/g抗氧化物质），计算出每1g抗氧化物质中的活性氢供体数目：n×6.02×1023个分子。n=A/lcA为反应前和反应平衡时吸光度的差值；为DPPH乙醇溶液的摩尔消光系数（M-1cm-1），通过DPPH乙醇溶液浓度对517nm吸光度值曲线斜率求取；l为光程（cm）；c为抗氧化物质浓度（g/L或mol/L）。3、DPPH·清除速率常数的确定根据公式（3）回归一级反应动力学常数k1，根据

9、公式（5）绘制一级反应动力学常数与抗氧化物质浓度的曲线，回归二级速率常数k2=dk1/dt（g-1·L·s-1），根据斜率求取二级反应动力学常数k2。根据化学当量数n、二级速率常数k2，和公式（6）确定每个抗氧化物质分子与DPPH·结合的动力学常数k2=k2/n（mol-1·L·s-1），k2越大表明该分子越易与DPPH·结合，清除DPPH·，k2可以评价抗氧化物清除DPPH·的效率和速率快慢。一、清除O2-自由基实验（邻苯三酚法） 在试管中加入2.8 mL 0.05M pH=8.2的Tris-HCl缓冲液和0.1

10、mL乙醇，于25恒温水浴中放置20min，然后加入0.1mL 25预热的邻苯三酚溶液(60mmol/L 0.756g邻苯三酚溶于10mmol/L HCl溶液中制成)，总体积3.0mL，迅速摇匀，倒入比色皿中，在420nm处，每隔0.5min测一次吸光度，此吸光度值记为A1。同时以不加入邻苯三酚溶液测一次，记为A0。向2.8 mL 0.05M pH=8.2的Tris-HCl缓冲液中加入不同浓度的0.1mL样品溶液，于25恒温水浴中放置20min，然后加入0.1mL 25预热的邻苯三酚溶液，总体积3.0mL，迅速摇匀，倒入比色皿中，在420nm处，每隔0.5min测一次吸光度，此吸光度值记为A3。

11、同时以不加入邻苯三酚溶液测一次，记为A4。则：清除率%=1(A3 A4)/ (A1 A2)×100A1不含样品的吸光度值；A2不含样品和邻苯三酚的吸光度值；A3含有样品的吸光度值；A4含样品,但不含邻苯三酚的吸光度值。在总体积为5mL的溶液中加入2.5mL的KH2PO4-NaOH(pH=8.20)缓冲溶液中加入0.5mL不同浓度的配合物（或槲皮素或金属离子）溶液和1.8mL溶剂，在25电热恒温水浴放置20min，加入0.2mL预热过的邻苯三酚(60mmol/L 0.756g邻苯三酚溶于10mmol/L HCl溶液中制成)引发反应，准确地反应5min后（反应在25水浴中进行），加入60

12、µL的0.1mol/L Vit C 水溶液终止反应，以相应的Vit C为空白，于1小时内测定420nm处的吸光度值，其抗氧化能力用清除率表示，清除率越大，抗氧化能力越强，计算公式：清除率%=1(A3 A4)/ (A1 A2)×100A1不含样品的吸光度值;A2不含样品和邻苯三酚的吸光度值;A3含有样品的吸光度值;A4含样品,但不含邻苯三酚的吸光度值。三、清除·OH 的实验1、 水杨酸捕获法10 Nicholas Smirnoff, Quinton J Cumbes. Hydroxyl radical scavenging activity of compatibl

13、e solutesJ. Phytochemistry, 1989, 28(4): 1057-1060.体系中通过Fenton反应产生的·OH氧化水杨酸产生对510nm光有特征吸收的2,3-二羟基苯甲酸，通过测定水杨酸捕获·OH 所得到的产物确定·OH的清除率。3ml反应液中含0.15mmol/L FeSO4，6mmol/L H2O2以及不同浓度的样品溶液，最后加入H2O2 启动反应。37温浴1h 后测定510nm 处的吸光值。吸光值越低，清除·O H 的效果越好。计算·OH 的清除率：1 (Ai Aio)/ Ao × 100%其中，A

14、i 为含样品的吸光值，Aio 为不加水杨酸时样品溶液的本底值，Ao为对照，不加样品溶液。2、Phen-Cu-VC-H2O2 -DNA法邻啡罗啉(Phen)与金属Cu2+生成配合物Cu(Phen)22+，再被VC还原成Cu(Phen)2+，与H2O2反应生成·OH，生成的·OH 作用于DNA，产生3及5单磷酸酯末端的DNA片断，伴随DNA的氧化降解产生化学发光。当加入受试物后，若受试物具有清除·OH 功能，则可以使发光强度减弱或发光时间推迟，将这一发光变化用微弱发光测量仪检测并记录。四、R·清除实验浓乙醇在碱性有氧条件下，通过强紫外线照射产生自由基引发剂作

15、用于大豆植物油中多不饱和脂肪酸形成R·，产生丙二醛（MDA）。测定MDA的量就可以反映出R·的变化。其反应体系包括：50%乙醇，0.01%大豆油，0.1mol/L的FeSO4-EDTA，0.1mol/L的pH8.0 PB缓冲液以及不同浓度的样品溶液，对照为蒸馏水。紫外照射30分钟后加入1mL的20%TCA终止反应，加入1.5mL的0.67%TBA，沸水加热10分钟后，532nm处测定吸光度。五、抗脂质过氧化功能的测定采用亚油酸加速氧化法3测定样品抗脂质过氧化功能。将不同浓度的样品溶液1mL分别放入具塞试管中，加入5mL 2.5%亚油酸、4mL 0.05mol/L 混合磷酸盐缓冲液(PB pH=7.0)，置于(40±1)电热恒温培养箱中，定时取样用硫氰酸铁(FTC)法测定过氧化物生成量，以吸光值表示。对照用1mL 无水乙醇代替样品溶液，用BHT、Vc 作标准抗氧化剂。FTC 法：取(40±1)恒温培养液0.1mL，分别加入9.7mL 75%乙醇溶液和0.1mL 30%硫氰酸铵，然后再加入0.1mL 0.02mol/L 氯化亚铁/3.5%盐酸溶液，准确反应3min，用分光光度计测定500 nm 吸光度。同时作一试剂空白吸光值A0。按下式计算抑制率