TNF-α基因多态性与分泌性中耳炎的关联

1、TNF-基因多态性与分泌性中耳炎的关联                                     作者：谭慧欢，黄海玲，解继胜，赵琼芝   【摘要】  目的 探讨TNF-基因启动子-238G/A多

2、态性与分泌性中耳炎（SOM）的相关关系。方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法（PCR-RFLP）检测125例SOM患者和130例健康对照者TNF-基因启动子-238G/A多态性。结果 TNF-238基因型GG、GA频率在对照组和SOM组分别为93.85%，6.15%和85.60%，14.40%；等位基因G、A频率在对照组和SOM组分别为96.92%，3.08%和92.80%，7.20%。两组差异均有显著性（P<0.05），携带GA基因型个体患SOM的风险约是GG基因型的2.565倍(OR=2.565，95%CI=1.0726.138)。结论 TNF-238基因多态性与SOM的发

3、病有相关性，A等位基因可能是SOM的遗传易感基因。 【关键词】  肿瘤坏死因子-；基因多态性；中耳炎，伴渗出液    Abstract:  Objective  To examine the association between polymorphism of tumor necrosis factor-alpha (TNF-alpha)-238 G/A promoter with secretory otitis media (SOM).  Methods  The polymorphism of TNF-al

4、pha was detected by polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) methods in 125 patients with SOM and 130 healthy controls.  Results  TNF-alpha genotype frequencies of GG, GA were 93.85%, 6.15% and 85.60%, 14.40% in SOM group and control group, respectively

5、. Allele frequencies of G, A were 96.92%, 3.08% and 92.80%, 7.20% in SOM group and control group, respectively. There was statistically significant difference in frequencies of allele and genotype in TNF-alpha polymorphism between SOM group and control group (P<0.05). The relative risk suffered f

6、rom SOM in patients with GA genotype was as 2.565 times as those with GG genotype (OR=2.565, 95%CI=1.0726.138).  Conclusion  TNF-alpha-238 polymorphism is positively associated with the genesis of SOM, and A allele maybe a risk factor for SOM.     Key words:  tumor necr

7、osis factor-alpha; gene polymorphism; otitis media with effusion分泌性中耳炎(secretory otitis media,SOM)是以中耳积液及听力下降为主要特征的中耳非化脓性炎性疾病，小儿的发病率比成人高，是引起小儿听力下降的重要原因之一。目前SOM发病确切机理尚未完全明了，近年国内外的研究1表明免疫反应与SOM的发病关系密切，其中肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor alpha,TNF-)在SOM免疫反应中的作用日益被耳科学者重视，已成为研究SOM发病机理的活跃领域。有研究证实2，TNF-基因多态性与多

8、种疾病相关，但TNF-基因多态性与SOM是否关联，目前尚不清楚，为此，我们采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法，探讨TNF-基因多态性与SOM的关系，为揭示SOM的发病机理提供一定的实验依据和新的视角。1  对象与方法1.1  研究对象 SOM组：经纯音测听、声导抗测试、鼓膜穿刺等检查确诊为SOM患儿(排除鼻咽部疾病者)125例，男68例，女57例，年龄316岁，平均9.8岁；病程116周。对照组：正常健康体检，无中耳炎病史、耳部正常儿童130例，男68例，女62例，平均10.4岁。1.2  方法参照文献3设计合成一对引物（北京

9、赛百盛有限公司合成），扩增TNF-基因启动子区的一段DNA序列。上游引物：5'-AGAAGACCCCCCTCGGAACC-3'，下游引物：5'-ATCTGGAGGAAGCGGTAGTG-3'。PCR反应体系包括5.0l基因组DNA，2.5l 10×PCR Buffer，2.0l 2.5mmol/L dNTPs, 1.5l 25mmol/L MgCl2，引物各20 pmol/l，Taq DNA聚合酶1.25u，所有试剂均为大连宝生物公司产品。PCR反应循环参数：95预变性反应3min；94变性50s，59退火1min，72延伸1min，33个循环；72延

10、伸5min，4保存，以上反应均在GeneAmp PCR System 2700型（美国PE公司）基因扩增仪上完成。取PCR扩增产物10l，用10u限制性内切酶（英国Biolabs公司提供）Msp I于37酶切1h。反应终止后，产物经8%聚丙烯酰胺凝胶电泳，EB染色，染色后以DNA片段长度标准物为参考，在紫外灯下判断结果，并拍照。1.3  统计学处理 用基因直接计数法计算TNF-的基因型及等位基因频率，疾病组和对照组间基因型及等位基因频率用2检验，均在SPSS11.0软件包上完成。2  结果2.1  TNF-基因型分析 TNF-基因238G/A多

11、态性，PCR扩增产物片段大小为152 bp，根据限制性内切酶Msp I酶切片段的情况，基因型有两种，GG型（133 bp、19 bp 2条带）、GA型（152 bp、133 bp、19 bp 3条带），在两组人群中均未检出AA基因型，见图1。2.2  SOM组与对照组TNF-基因多态性的比较 TNF- -238G/A位点基因型在两组中的分布差异有显著性（2=4.732，P<0.05）；等位基因频率在两组中差异有显著性（2=4.478，P<0.05）；SOM组TNF- GA基因型明显升高，关联分析结果显示，SOM组与TNF-基因多态性存在关联(2=4.732，P&

12、lt;0.05，OR=2.565，95%，CI=1.0726.138)，见表1。表1  两组TNF- -238基因型及等位基因频率分布的比较  (略)                             3  讨论    TNF是一种促炎细胞因子，主要由单

13、核或巨噬细胞分泌，包括TNF-和TNF-两种。它可诱导自身及IL-1、IL-6等其它细胞因子产生，增加白细胞相关抗原(HLA)-、类抗原表达，促进T、B淋巴细胞增殖及免疫球蛋白的合成，具有广泛的诱导炎症和调节免疫的功能。近年研究证实4，适量的TNF可调整机体的免疫及代谢作用，在维持机体内部环境的稳定状态及抵制各种致病因子具有重要意义，但是过量的TNF则会导致各种病理改变。    随着分子生物学和分子遗传学研究的不断深入，人们已经认识到基因的多态性可以造成某些疾病不同的易感性。人TNF基因位于第6号染色体短臂MHC 类基因区一段长7 kb的DNA序列内，其中TNF-

14、基因长4 kb，含4个外显子和3个内含子。有研究证实5TNF-基因启动子区域238位点存在G/A多态性，这种基因多态性的存在可能影响TNF基因转录和表达，进而影响TNF的生物学功能，可导致TNF的血清水平发生改变。    SOM发病确切的发病机理尚未明确，目前认为咽鼓管功能障碍、感染和免疫反应是三大致病原因，此外家族中有中耳炎患者为患病的危险遗传因素。大量研究表明，TNF-基因-238位点多态性与青春期单发关节炎6、慢性乙肝7和口腔鳞状细胞癌8等多种疾病存在密切相关性，但TNF-基因多态性与SOM是否存在关联性的研究很少。因此，我们检测了125例SOM患者TNF-

15、基因238位点多态性的分布，从遗传和免疫反应角度探讨SOM的发病机理。    实验结果发现，TNF- -238G/A位点基因型在两组中的分布差异有显著性（P<0.05）；等位基因频率在两组中的差异也存在显著性（P<0.05）；其中携带GA基因型个体患SOM的风险约是GG基因型的2.565倍(OR=2.565，95%，CI=1.0726.138)，提示A等位基因可能是SOM的遗传易感基因。综上所述，SOM是一种可严重影响小儿听力的常见病，除上述因素外，遗传因素在其中也起着重要的作用，通过我们的研究可以发现，TNF-基因238G/A位点多态性与SOM存在关

16、联，A等位基因可能是SOM的遗传易感基因。TNF-基因多态性与SOM的研究才刚起步，还有待进行大样本、多地域、多民族广泛深入的协同研究，将有可能为SOM的风险预测、及早预防和个性化治疗提供一条新的线索和途径。【参考文献】  1郭志强.肿瘤坏死因子及其受体与分泌性中耳炎的关系J.听力学及言语疾病杂志，2003，11(3)：221-223.2曹傅，高敏，周刚，等.肿瘤坏死因子基因多态性与溃疡性结肠炎相关性研究J.中华消化杂志，2006，26(7)：460-463.3Allen RA, Lee EM, Roberts DH, et al. Polymorphism in the TNF-a

17、lpha and TNF-receptor genes in patients with coronary artery disease J. Eur J Clin Invest,2001,31(10):843-851.4郝俊贵，秦波.肿瘤坏死因子及其基因多态性在乙型肝炎中的作用研究进展J.国外医学：流行病学传染病学分册，2005，32(3)：174-176.5王禹,张颖超,杜艳.原发性肝癌患者sIL-2R、IL-6 和TNF-测定及其临床意义J.中国普通外科杂志，2004，13（8）：622-623.6Zeggini E, Thomson W, Kwiatkowski D, et al. L

18、inkage and association studies of single-nucleotide polymorphism-tagged tumor necrosis factor haplotypes in juvenile oligoarthritis J. Arthritis Rheum，2002，46(12):3304-3311.7Cheong JY, Cho SW, Hwang IL, et al. Association between chronic hepatitis B virus infection and interleukin-10, tumor necrosis factor-alpha gene promoter polymorphisms J.