三种中药水煎剂的体外抗菌试验研究新进展

1、第7卷第1期 总第69期二九年元月·己丑年4健品），例如药枕、元气袋等产品；化妆品是指以化妆品为载体，加入一些有活性作用的中药有效成分制备而成的各种产品。这些产品都应是专利保护的对象，可以申请专利。 7 方法发明专利的保护前文已提到过“方法发明”，这里要对其加以具体说明。无论上述何种中医药专利（制剂、单体、药材等），无不涉及到制作方法，因此对方法的发明必须加以重视，其专利的保护亦非常重要。如产品具有独特的生产工艺，或对已知产品的生产工艺加以改进，均可申请方法专利。作为药品的制备方法权利要求，其特征部分应包括原料和生产工艺，原料特征的内容与药物产品概论权利要求的内容基本相同，生产工艺特

2、征包括生产步骤和生产工艺条件，如温度、浓度、压力、时间等。常见有以下几种情况：产品的新的制备方法。例如一种从珍珠母贝中提珍珠液的方法，其发明点在于将现有技术中的“砂轮、人工的磨、盐酸水解”工艺改进为“用醋酸作剥离剂、硫酸水解”，并提高了产率。测定方法。例如有效成分含量的测定方法，印度就向中国提出了“使用色谱指纹图谱测定和鉴别植物或动物、天然或合成来源的提取物成分的方法”的专利申请。中药材的种植方法。中药材的加工、储存和保鲜方法。以上，我们对中医药专利保护的重要性、复杂性、权力要求，以及中药复方、中药单体和有效部位、中药材及中医药相关产品、制备方法等方面的发明专利保护问题都分别做了一些初探。希望

3、能引起相关各方面对中医药专利保护问题的更加重视，并对中医药专利权力要求，对中药复方、中药单体及有效部位、中药材及中医药相关产品、制备方法的专利保护作更多的了解，以提高相关专利保护的质量。 参考文献1 张韬.中医药知识产权保护的最佳途径.世界科学技术-中医药现代化,2001,3(5):762 李仕芬,等.我国药品知识产权保护的思考.中国医学伦理学,2001,76:473 王晓浒.我国药品的知识产权问题.中国新药杂志,2003,12(2):146 4 陈朝晖.19762003年美国中医药专利申请、授权情况分析.中国中医药信息杂志,2004,11(3):2765 陈建南,等.初探美国发明专利中的中药

4、复方.世界科学技术-中医药现代化,2004,6(1):96 周和平.外国医药企业在中国发明专利申请动向.中国新药杂志,1999,8(1):51作者简介：李戎，医学博士，执业中医师，教授，博士学位课程主讲教师，硕士研究生导师。TelE-mail：lr2269。（收稿日期：20080928）摘要：目的 评价黄连、黄芩、五倍子三种中药水煎剂对表皮葡萄球菌的体外抗菌作用。方法 采用M-H 琼脂稀释法对黄连等3种中药进行体外抗菌活性检测。结果 五倍子对表皮葡萄球菌的抗菌活性最好，其MIC为12560；其他2种中药对表皮葡萄球菌抗菌作用亦较好，MIC分别为1640和1320。结论

5、 五倍子对表皮葡萄球菌的抑菌效果好，可用于临床治疗由表皮葡萄球菌引起的感染。关键词：表皮葡萄球菌；抗感染药；黄连；黄芩；五倍子我国中药在保护劳动人民健康方面，在历史上发挥了巨大作用，尤其是在抗菌药物问世前,对感染性疾病的治疗主要是靠中草药1。为了研究中药的抗微生物活性，我们采用琼脂稀释法，用黄连等3种中药对112 株表皮葡萄球菌进行了体外抗菌实验研究。现将结果报告如下。 1 材料与方法1.1 菌株来源 表皮葡萄球菌分离自我院临床患者的血液、尿液、脓液、痰等标本，共112 株。 1.2 中药 黄连、黄芩、五倍子均购自河北省药材公司。将上述3种中药各50g，分别用文火煎后做成200 ml煎液备用。

6、1.3 仪器与培养基 微量多点接种仪由北京医科大学昆仑药物发展研究所生产；培养基为M-H琼脂，由美国BD公司生产。1.4 实验方法 采用M-H 琼脂稀释法，对黄连等进行定量抗菌实验。1.4.1 药液稀释 排列无菌试管10支，于210支管中加无菌蒸馏水10ml，取25%(14)黄连等水煎液20 ml，于第1管和第2管各加入10ml，第2管液混匀后取出10ml，加入第3管，再混匀后取10ml放入第4管，如此连续稀释至第9管取出10ml弃掉，第10管只有无菌蒸馏水作对照。这样，19管中含有不同浓度药液各10ml。1.4.2 含药平板制备 无菌操作下，将已溶化的无菌M-H琼脂900ml分装于10个瓶中

7、，每瓶90ml。将第7卷第1期 总第69期 二九年元月·己丑年5本研究为临床应用此类药物提供了可靠的科学实验依据。表皮葡萄球菌是凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 中的主要菌种2，为医院感染的重要病原菌，也是引起机会感染的主要致病菌。近年来3，由于滥用抗菌药物等原因，耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）在逐年增多。据报道在表皮葡萄球菌中，几乎有66%是MRSE。MRSE除对万古霉素敏感，对头孢哌酮耐药率为4%外，对其他抗菌药的耐药率均在10%100%之间。表皮葡萄球菌在临床标本中的分离率已占32.5%，由于其对大多数抗菌药耐药，对严重感染者，只能选择万古霉素、替考拉宁等进行治疗4。但目前又出

8、现了耐万古霉素的表皮葡萄球菌(VRSE)，同时万古霉素和替考拉宁有肾毒性，有肾功能损害者不宜应用5。本研究表明，黄连等中草药对表皮葡萄球菌有很好的抗菌作用。尤其是五倍子具有敛肺降火、涩肠止泻、收敛止汗、止血等功效，五倍子汤可用于胃和十二指肠溃疡，止痢方可用于治疗泻痢不止等。上述研究为表皮葡萄球菌引起的感染提供了中药治疗药效实验室依据，可望在不久的将来会开发出新的抗感染中药剂型。 参考文献1 唐中德.中药抗生力研究的综合报道J.中医杂志,2003,(7):30 2 邓文龙.清热解毒药药理作用研究的进展J.中草药通讯,2002,(8):42 3 陈奇.中药药理研究方法学M.北京:人民卫生出版社,2

9、001:259 4 李仲兴，王秀华，边占水，等.48株耐甲氧西林表皮葡萄球菌对7种头孢菌素的敏感性测定J.中国抗生素杂志,2000,18(3):1925 刘振声，金大鹏，陈增辉.医院感染管理学M.北京:军事科学出版社,2000:162（收稿日期：20081030）第1管(含10ml25%的黄连等)水煎液倾注于含90ml培养基的瓶中，混匀后倾注4个平板，每个平板含25ml含药琼脂；第2管以后的平板制备同第1 管，凝固后备用。第1组的琼脂平板实际含黄连等水煎液2.5%(140)，第2组为1.25%(180)，第3组为0.625%(1160)，以此类推计算含药培养基的药物浓度。因各药水煎剂干重不一，

10、不好比较，故暂仍按生药与水之比计算。1.4.3 菌液制备 将112株表皮葡萄球菌新鲜培养菌落分别制成菌悬液，浓度相当于0.5麦氏单位。 1.4.4 培养与观察 用多点接种仪分别吸取各种菌液点种于含不同药物浓度的琼脂平板上，于35培养1824h,如果对照菌全部生长，则观察最低抑菌浓度(MIC)，并统计出MIC 50和MIC 90的药物浓度和累积抑菌百分率。 2 结果黄连等对表皮葡萄球菌的抑菌作用见表1。对112株表皮葡萄球菌的累积抑菌率见表2。表1 黄连等3种中药对112株表皮葡萄球菌的抑菌作用中草药 MIC范围 MIC50 MIC90 MIC众数 黄连 黄芩 五倍子1：51201：40 1：2

11、560 1：320 1：2560 1：51201：40 1：320 1：160 1：320 1：51201：2560 1：5120 1：2560 1：2560表2 黄连等3种中药对112 株表皮葡萄球菌累积抑菌率比较( %) 中草药 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 黄连 100.00 100.00 100.00 99.11 83.93 62.50 59.89 34.82 黄芩 96.43 94.64 94.64 65.18 34.82 21.43 19.96 10.71 五倍子 100.00 100.00 100.00 100.

12、00 100.00 100.00 100.00 73.213 讨论黄连等中药对表皮葡萄球菌的抑菌实验，无论是定性，还是定量测定，其MIC值以前均未见报道。红安县中医院积极推进中医药适宜技术推广工作中医药适宜技术是中医药理论同临床实践相结合的经验总结和结晶，具有简便易学、取材方便、安全可靠、疗效确切和价格低廉的优势，深受群众欢迎。在农村大力推广应用中医药适宜技术，对于进一步完善城乡中医药服务体系，加快培养基层中医药人才，提高中医药服务能力，充分发挥中医药特色优势，解决人民群众看病难、看病贵等问题具有十分重要意义。为贯彻落实省卫生厅关于中医药适宜技术推广精神，红安县中医院作为全县中医药适宜技术推广应用的培训基地，制定了红安县中医药适宜技术推广实施方案，成立了领导小组和专家指导小组，积极组织专家编印了中医药适宜技术推广手册和培训教材700余份，已于2008年5月19日正式开班，至目前为止，分期分批共十一次组织了全县中医人员、村卫生室及乡村医生近600人进行培训学习。红安县中医院坚持以中医为主，中西医结合，积极加强内涵建设，大力发展中医专科，争创“三名”即“名医、名科、名院”，加快中医“三进”即“进农村、进社区、进家庭”工作，在中医药适宜技术推广应用中发挥“龙头”作用，加快了县、乡、村中医药服务体系建设，积极构建中医药适宜技术推广应用网络。该院非常重视中医药技术应用工作，将中医药应用