水稻蛋白质组学研究进展与展望

1、综 述收稿日期:2011-05-19作者简介:刘忠奇(1984-,男,湖南郴州人;硕士研究生,主要从事水稻蛋白质组研究。通讯作者:张海清,博士,教授,主要从事种子科学研究;E mail:hunan水稻蛋白质组学研究进展与展望刘忠奇, 邓晓娟, 肖 晓, 张海清(湖南农业大学农学院, 长沙410128Research Progress and Prediction in Rice ProteomicsLIU Zhong qi,DENG Xiao juan,XIAO Xiao,ZHANG Hai q ing摘要:综述了国内外学者对水稻组织器官发育的蛋白质组学、水稻亚细胞水平结构的蛋白质组学、水稻环

2、境胁迫应答过程的比较蛋白质组学、水稻突变体的蛋白质组学、激素诱导的蛋白质组学和水稻蛋白质组学的生物信息学研究的成果,并对水稻蛋白质组学研究进行了展望,以期为进一步开展水稻蛋白质组学研究提供参考。关键词: 水稻;蛋白质组学;双向电泳;生物信息学中图分类号: S 511 文献标志码: A 文章编号: 1001 4705(201110 0045 0620世纪90年代兴起的基因组大规模测序计划标志着遗传学进入基因组水平。随着人类基因组和10余种模式生物基因组全序列测定的完成,基因组计划的重心已逐渐由结构基因组研究转移到功能基因组研究,生命科学随之开始了一个新的纪元 后基因组时代,蛋白质组研究则应运而生

3、1。蛋白质组(proteome是指一个基因组、一种细胞或一种生物所表达的全套蛋白质2。它是一个动态的概念,不仅在同一个机体的不同组织和细胞中不同,在同一机体的不同发育阶段、直至消亡的全过程中也不断变化;机体处于不同生理状态下不同,在不同外界环境下也是不同的。这一术语一经提出,很快得到国际生物学界的广泛关注。生命科学的研究重点已转向了一个新的研究对象 蛋白质组,而生命科学也随之出现了一个以蛋白质组为研究对象的崭新的研究领域 蛋白质组学。蛋白质组学是在基因组学的研究成就和高通量的蛋白质分析技术取得突破的背景下产生的新兴学科,基因组研究的发展是蛋白质组学产生的重要前提。水稻是人类的主要粮食作物,同时

4、也是极好的分子生物学和遗传学研究的模式植物,水稻基因组序列草图的完成加速了蛋白质组学的研究3。蛋白质组学技术将基因组序列信息和在特定组织、细胞或细胞器中执行生命功能的蛋白质有机地联系起来,并能全面检测不同组织器官所表达的蛋白质及在不同发育阶段、不同条件下蛋白质表达的差异。最初的水稻蛋白质组学研究多以一些具体的组织器官的蛋白质组成为研究对象,并得到相关材料的蛋白质参考图谱及数据,如今则主要着眼于由环境因素触发的基因组表达的变化,获得不同条件下的蛋白质差异图谱,并对差异蛋白质进行深入研究。目前,水稻蛋白质组学虽然主要集中在对水稻各个组织器官及亚细胞基本表达模式的研究,但是水稻环境胁迫应答过程的比较

5、蛋白质组学和水稻突变体、激素的蛋白质组学研究也在逐步地深入4。1 水稻组织器官发育的蛋白质组学研究水稻蛋白质组的早期工作集中在对各个器官组织进行蛋白质表达谱的研究,确定一些基因在水稻不同组织、器官和发育阶段表达的特异性。近年来,随着水稻基因组测序完成,用蛋白质组学方法快速、大量、系统、全面地研究水稻的生长发育过程及其调控。Akira 等5对水稻9种组织和一个器官的蛋白质进行了双向电泳分离,并对分离后的蛋白质斑点根据其等电点、分子和N 端测序作了定性。Komatsu 等6比较光照和黑暗条件下,水稻中的一些蛋白质差异,鉴定了一些与光合作用相关的蛋白质。Komatsu 等7对水稻种子、胚乳、胚芽、根

6、、绿色秧苗、温室的白化秧、黄化秧、叶鞘、叶片等的蛋白质组进行了研究,得到10种不同条件下胶上10589个蛋白质点。对其中633个蛋白质点用原位酶解、质谱的方法进行了鉴定,完善和补充了水稻蛋白质数据库,找到了一些与水稻生长发育有关的蛋白质。谢锦云等8采用固相pH 梯度 SDS 聚丙烯酰胺双向凝胶电泳对温敏核不育水稻96 4 2S 可育与不育条件下减数分裂期花药总蛋白进行了分离,发现在不育变化为可育的过程中,明显表达上调的45蛋白质点包括几丁质酶、酸性磷酸酶、胞浆激酶、谷蛋白前体以及ESTSC7261蛋白,明显下调的蛋白质包括 e xpansin前体、谷氨酸氨甲酰转移酶和1种未知功能的蛋白质。邵彩

7、虹等9从蛋白质组学角度对水稻生育后期的叶片蛋白质组变化进行了研究,利用Imagemaster2D Elite5.0软件对所得到的双向电泳图谱进行分析比较,以揭示水稻叶片蛋白质组的表达差异。经图谱分析共得到差异蛋白质点47个,其中孕穗期及抽穗期新增蛋白质点6个,21个随生育进程表达丰度增加,6个蛋白质点表达丰度逐渐减弱,其它14个蛋白质点呈无规则变化,多表现为在某个生育时期具有峰值;蛋白质是细胞功能执行者,受细胞功能或细胞环境变化的影响,因此,上述蛋白质发生变化的原因可能与水稻后期的发育转变有关系。梁海鹰等10为找寻光温敏核不育水稻幼穗与育性调控有关的蛋白质,采用固相pH梯度 S DS聚丙烯酰胺

8、双向凝胶电泳对光温敏核不育水稻培矮64S育性转换期(减数分裂期幼穗总蛋白进行了分离,获取凝胶图像并进行重复性分析,通过微量测序 Edman降解方法和原位酶解及MALDI TOF质谱的方法鉴定了60个蛋白质点,37个蛋白质点得到了准确的鉴定结果,其中16个是差异蛋白质点。在不育变化为可育的过程中,明显表达上调的蛋白质点包括几丁质酶、丙酮酸脱氢酶等;明显下调的蛋白质包括超氧化物歧化酶、硝酸还原酶脱辅基酶蛋白等;金属硫蛋白Rim只在可育中存在。邢俊杰等11对不同温度条件下处理的培矮64S 及两优培九自交后得到的F2群体的幼穗为材料采用双向电泳,所得每张电泳图约2000个蛋白点,通过重复实验图片比对,

9、在PS(不育亲本、PF(可育亲本的差异表达蛋白点与F2S、F2F的差异表达点之间,找到6个比较明显的共同差异点,这些差异点都是表达量的差异,且差异变化在PS、PF之间与F2S、F2F之间也不相同(即上升表达或下降表达的差异,后经质谱分析鉴定发现6个共同差异蛋白点,其中第14蛋白点功能依次为腺苷酸激酶、肌动蛋白、肌动蛋白和尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶,第5、6蛋白点功能未知。萧小鹃等12采用双向凝胶电泳对温敏核不育水稻株1S 和其矮秆突变体SV14的茎(穗颈下第1节和第2节蛋白进行了分离,通过银染显色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。选取了26个蛋白质点采用MAL D I T OF M S

10、进行肽质谱指纹图分析,最终有12个蛋白质点得到了可靠鉴定。其中在SV14中相对于株1S上调的仅有OSJNBa0039C07.13蛋白,其它蛋白均表现为下调。许丽璇等13通过采用IEF S DS P AGE双向电泳技术,对金稻1号水稻种子未萌发和萌发14d胚进行蛋白质分离。结果发现,金稻1号水稻种子未萌发和萌发14d胚在PDQuest图像分析软件可识别的蛋白质点约215、201、187、162、132个,其中表达量变化2.5倍以上的蛋白质点有22个。选取表达量变化2.5倍以上的12个差异蛋白质点进行胶内酶解,并进行肽质量指纹图谱及其生物信息分析,初步鉴定出6个蛋白质,分别为硫氧还蛋白、热休克蛋白

11、、ATP合酶、LEA蛋白12、核苷二磷酸激酶、乙二醛酶。2 水稻亚细胞水平结构的蛋白质组学研究目前水稻蛋白质组学研究也已经深入到亚细胞水平,即研究在一个细胞器内表达的蛋白质组。Tsugita 等5首先对水稻叶绿体进行了蛋白组分析。经2D胶分离检测出276蛋白点,对16个蛋白进行了N 端序列分析,并对13个蛋白测序分析。这是首次对水稻叶绿体蛋白组分析的报道,提供了水稻叶绿体蛋白的概况。王玉忠等14从全叶蛋白比较入手,研究了温敏失绿突变体水稻1103s失绿前、后的变化,并结合该突变体在不同温度处理和遗传背景下叶片全蛋白的变化特征,分析了变温诱导与失绿的关系。结果表明,诱导后1103s的叶片上失绿部

12、分的组织中没有出现冷胁迫的迹象,其Rubisco的大、小亚基表现正常。一个51kD (PI4.5的特异蛋白P1在失绿部分的组织中消失,而在叶片绿色部分的组织中检测到了P1蛋白,但量有所减少,说明在失绿叶片上突变基因的表达存在组织差异性。P1蛋白在常温下生长的1103s叶片中为一大量蛋白,是水稻叶片中的一个与叶绿素的代谢过程密切相关的重要功能蛋白。Mikami等15分离了水稻高尔基体,并通过植物凝集素和一些特异抗体分析,鉴定了水稻高尔基体组织特异性蛋白。Mikami等16用2DE技术来分离水稻细胞器官的膜蛋白,对胞质和膜结合蛋白经2D PAGE 和NEPHGE P AGE(非平衡PH梯度电泳两种

13、技术分离比较,结果显示,NEPHGE P AGE对于水稻膜结合蛋白的蛋白组分析相当有效,而2D P AGE对于水稻胞质成分的分辩率更高。Heazlewood等17用2D P AGE、Blue native PAGE和反相高效液相质谱(LC/MS的方法对纯化的水稻线粒体蛋白进行分离,再用胰蛋白酶消化,然后进行串联质谱分析(MS/MS。通过查找水稻基因组的开放阅读框架译码和表达序列标签(EST, Expressing sequence tags译码,与质谱分析所得数据进行比对,鉴定了其中149个蛋白点(91个非冗余基46因的产物,包括亲水/疏水蛋白、强酸/碱性蛋白和大分子蛋白(分子量为6.72.5

14、2kD的序列,确定了85个蛋白的功能,包括线粒体的许多主要的功能蛋白。Tanaka等18从水稻幼苗中分离纯化线粒体蛋白,经双向电泳分离后共检测出蛋白点672个,用Edaman降解法和质谱技术2种方法共鉴定了283个蛋白点,分别代表146种不同的蛋白。3 水稻逆境胁迫蛋白质组学研究3.1 非生物胁迫下水稻蛋白质组学研究一些非生物因子胁迫,如干旱、盐渍、寒害、臭氧、缺氧、机械损伤等,对水稻的生长发育和生存产生严重影响。这些胁迫能引起大量蛋白质在种类和表达量上的变化。蛋白质组学分析有助于详细了解非生物胁迫的伤害机制以及水稻的适应机制。Ramani和Apte19用放射性同位素自显影双向电泳法研究水稻幼

15、苗盐胁迫下多基因的瞬时表达,发现至少有35个蛋白质被盐胁迫诱导和17个蛋白质被抑制,包括20个在这之前未曾报道的低丰度蛋白。这些发现对寻找渗透压应答新基因,尤其是那些在水稻盐耐性获得中起瞬时调节作用的基因十分重要。Agrawal等20用2D PAGE、氨基酸测序和免疫杂交法,首次检测了臭氧对水稻幼苗蛋白的影响。臭氧对水稻的影响表现在叶片强烈的可见坏死伤害和随之而来的抗坏血酸过氧化物酶蛋白的增加,反映在2D电泳胶上蛋白质点分布的变化。检测的56个蛋白中,6个蛋白是N 端阻断,14个蛋白的序列无法测定,36个蛋白的N 端序列和一个蛋白的内部序列被测定。研究发现臭氧造成叶片光合蛋白的剧烈减少,包括核

16、酮糖 1, 5 磷酸羧化酶/加氧酶(RuBisCO和各种防御、胁迫相关蛋白的诱导表达。Salekdeh等21采用蛋白质组学技术分析了水稻植株对干旱胁迫以及恢复灌溉后的叶片蛋白质变化的反应。在干旱胁迫条件下对1000多种蛋白质作了精细的定量分析,研究发现其中42种蛋白质在含量方面有显著的上浮或下调,胁迫和复水情况下蛋白质的表达恰好相反。在叶蛋白中最明显的变化是肌动蛋白解聚因子S l ike RNA酶同系物LD6蛋白。Shen等22应用蛋白质组学方法研究水稻叶鞘伤害反应相关蛋白,首次揭示了水稻叶鞘伤害信号应答过程中蛋白质的变化。比较伤害前后蛋白质表达谱,发现伤害后至少有10个蛋白被诱导或上调,19

17、个蛋白被抑制或表达量下降。Cui等23将水稻幼苗进行渐进性低温处理,研究了渐进低温对水稻叶片蛋白质组的影响,发现了60个受诱导的蛋白,质谱鉴定了41个,其中很大一部分蛋白定位于细胞内的质体中。Yan等24研究了低温胁迫下水稻叶片蛋白质组变化,用双向电泳共检测到1000多个叶片可溶性蛋白,发现66个蛋白被上调,31个蛋白被下调。大部分蛋白在温度恢复正常后,表达水平也基本恢复到处理前的水平。质谱分析共鉴定出85个差异表达蛋白,包括已知的和新的低温胁迫响应蛋白,其中多个蛋白在冷胁迫下被降解。Makoto Hashimoto等25对2周龄的水稻幼苗5 处理48h后,通过2 DE分离叶片、叶鞘和根蛋白质

18、组,每个器官检测出250400个点,低温下有39个蛋白点的丰度发生变化,19个上调,20个下调。在叶片中发现了4个受低温新诱导出的蛋白质,蛋白质表达量增加,而与防卫反应相关的蛋白质表达量下降。温福平等26研究了盐胁迫对粳稻种子萌发的抑制作用和赤霉素(GA对盐胁迫的缓解作用,利用2 DE和MALDI TOF M S技术分析了水稻蛋白质组的变化。在盐胁迫条件下,发现有4个蛋白点表现出显著的变化,在GA与盐共处理时,这4个蛋白质点的表达均有不同程度的恢复。经MALDI TOF MS分析,其中2个蛋白分别被鉴定为isoflavone reductase l ike蛋白与葡萄糖磷酸变位酶,这些蛋白可能与

19、GA提高水稻耐盐性途径相关。Chen等27用蓝绿胶及双向电泳对盐胁迫诱导水稻根尖细胞凋亡的线粒体进行了比较蛋白质组研究,发现了8个与细胞凋亡有关的蛋白,其中糖基水解酶、线粒体热休克蛋白HSP70、20S蛋白酶体亚基、超氧化物歧化酶上调表达;ATP合成酶 亚基、细胞色素C亚基6b、腺苷蛋氨酸合成酶2、转录启动因子eIF 3下调表达。3.2 生物胁迫下水稻蛋白质组学研究水稻在生长发育过程中也会受到各种生物因子的影响,当水稻受到植物害虫、病菌等侵害时,将改变体内蛋白质的表达和酶类的活性等来完成这些信号的感应、传递以及生物学效应的实现。如植物在病虫危害时局部坏死或诱导产生一些抗病抗虫蛋白。目前对生物胁

20、迫下水稻蛋白质组学研究主要集中在病害方面,包括水稻黄斑病毒、稻瘟病及白叶枯病等。Ventelon等28利用双向电泳加质谱鉴定的方法对两种水稻(感性品种IR64和部分抗性品种Azucena的悬浮细胞系经水稻黄斑病毒(RYMV感染后的蛋白表达模式进行了研究。在感性和抗性品种中分别发现40个和24个差异表达的蛋白,各有19个和13个蛋白得到了鉴定。这些蛋白质可以分为3类:代谢相关蛋白质、逆境及翻译相关蛋白质。SalT、SOD和47热激蛋白的表达受到非生物胁迫和生物胁迫的调节,但有些蛋白(如脱水蛋白和一些参与糖酵解的蛋白只受水稻黄斑驳病毒的调节。Kim等29用稻瘟病菌(M.grisea和激发子处理水稻

21、悬浮培养细胞,双向电泳差异比较发现21个差异蛋白质,这些蛋白质大多数与防御有关,如9个几丁质酶、2个Germin A/xalate氧化酶,5个未知功能域26 (DUF26分泌蛋白和 expansin。一系列蛋白质的表达在稻瘟病处理24h和48h后发生了变化,OsPR10、异黄酮还原酶类似蛋白、B 葡萄糖苷酶、受体蛋白激酶等蛋白质受到诱导表达。噻菌灵诱导蛋白(PBZ1、盐诱导蛋白(SalT等则为稻瘟病上调蛋白质,这些蛋白质在水稻中的表达也受JA(茉莉酸、SA(水杨酸、H2O2等信号分子的上调控制。Chen等30研究发现,采用改进的质膜蛋白制备方法,并以PM(质膜结合绿色荧光蛋白融合蛋白作为可见的

22、标记,进行了水稻悬浮细胞表达抗病基因Xa21质膜蛋白质组分析,以鉴定参与抗水稻白叶枯病(X.oryzae pv.Oryzae早期防御反应的质膜蛋白成分。在接种病原菌12h和24h的2 D E胶上发现20个调节蛋白,其中一些在由Xa21介导的非亲合性与亲合性互作中表现不同。水稻在接种该病菌后与能量(30%、代谢(20%以及防御(20%相关的蛋白表现出差异,引起RuBisCO大亚基的降解,Thaumatin like 蛋白和噻菌灵诱导蛋白(PBZ表达上调。同时表达上调的两种蛋白也受茉莉酸的调节,这些结果表明水稻抵抗白叶枯病的防御途径是通过JA刺激的thaumatin like蛋白和PBZ蛋白合成实

23、现的。利用表达抗白叶枯病基因Xa21的水稻悬浮细胞进行质谱分析确定11个与植物防御相关的蛋白,包括质膜质ATPase、蛋白磷酸酶、OsHIR1S、OsPHB2、锌指蛋白、C2结构域蛋白、普遍胁迫蛋白(USP和HSP。关于水稻应答环境胁迫的蛋白组学研究涉及叶片、叶鞘、穗、根、质膜以及萌发种子,发现了许多胁迫响应蛋白,并且这些蛋白与胁迫耐受机制有关,都涉及抗氧化防御蛋白的上调。有些蛋白的表达在生物胁迫和非生物胁迫下都会发生变化。根特异表达的PR10蛋白(RSOs PR10不仅在盐胁迫和干旱胁迫下增加表达,也受稻瘟病菌、茉莉酸(JA和噻菌灵的诱导。但是低温、ABA和水杨酸(SA却不能诱导其表达31。

24、4 水稻激素诱导蛋白质组学研究激素对植物的生长发育起着重要的调控作用,水稻的蛋白质组学研究可以为研究激素的信号传导和作用机制打下基础。Moons等32鉴定了水稻根中3个受ABA诱导的蛋白质,其氨基酸序列测定确定其中2个属于胚胎后期丰富蛋白(LEA的2组和3组,第三个未知。用ABA处理水稻根并提取mRNA构建cDNA文库,然后用由氨基酸序列推导出的寡核苷酸做探针进行筛选,分离到了相关的cDNA,但在cDNA数据库中找不到与之相同的序列。通过在基因组DNA文库中筛选及免疫杂交分析,表明这是一个新的基因家族,编码高度亲水具有双重结构域的蛋白质,没有已知的蛋白质与之相同。5 水稻突变体蛋白质组学研究应

25、用蛋白质组学方法对基因突变引起的蛋白质表达变化进行研究可以揭示植物生理生态过程,得到植物遗传学的重要数据,对表型突变的内在生化过程进行研究。当已知突变的基因时,可用蛋白质组学技术研究受此基因控制的有关信息。Komatsu等6比较了水稻绿苗和白化苗的蛋白质2 DE图谱,结果显示了在绿苗中参与光合作用的蛋白质,而白化苗中仅有此蛋白质前体。而抗坏血酸过氧化物酶只在白化苗中存在,说明抗氧化酶在白化苗中起细胞保护功能。模拟病斑突变体(Lesion Mimic Mu tant通常能在无病原物存在的情况下产生系统性过敏性坏死斑,并表现出对多种病原物抗性的提高。Tsunezuka34等对一种cdr2突变体的3

26、个病斑形成阶段用2 D E分离,与野生型相比,有37个蛋白点差异表达,其中28个点在突变体中表达上调,9个点表达量下调,通过质谱鉴定,差异表达的蛋白点与防御作用相关。此外有27个蛋白为代谢酶类,暗示该突变体发生的细胞程序化死亡与活跃的代谢有关。Chen等35用蓝绿胶和2D P AGE的方法分离水稻黄绿突变体中叶绿体类囊体膜上的蛋白复合物,共鉴定52个蛋白点。欧立军36对温敏核不育水稻淡黄叶突变体安农标810S的叶绿体蛋白研究发现,突变48体的叶绿体蛋白约为对照安农810S的55%,并初步鉴定出与光合作用相关的差异蛋白点13个,其中4个缺失蛋白,包括1个RuBP大亚基缺失。6 水稻蛋白质组学的生

27、物信息学研究生物信息学(bioinformatics是生物与计算机科学以及应用数学学科相互交叉而形成的一门新兴学科,是蛋白质组学研究中的一个重要研究手段,它通过对实验数据的获取、加工、储存、检索与分析,达到解释数据所蕴含的生物学意义的目的。基因组学与蛋白质学的发展大大地促进生物信息学迅速发展。基因组和蛋白质组研究提供了生物学上史无前例的大量数据,这就要求必须有高度自动化的信息处理技术,包括数据的输入、存储、加工、索取以及数据库之间的联系。通过各种特殊设计的软件来实现数据的各种处理和分析,可达到对已知或未知基因产物的全面功能分析。例如用质谱结合数据库的搜索鉴定蛋白质已成为蛋白质组研究的一种主要方

28、法。蛋白质样品首先经过双向电泳分离,然后用特异性的酶(通常用胰蛋白酶进行胶内酶解,然后再用质谱仪测定各个肽段的分子量,得到肽质指纹图谱印(eptidemassfingerprint,pMF,便可以根据PMF信息并通过特定的软件进行数据库的搜索来鉴定蛋白质。7 展 望水稻蛋白质组研究虽然已经从各个不同的层面系统地开展了一系列研究,并且已取得一定的研究成果,但是由于蛋白质组学依托双向电泳技术与质谱分析关键技术,且双向电泳技术在实践操作过程中还存在一些不足,对于低丰度蛋白质的检测精确度不高,因此,需要进一步探讨与优化水稻蛋白质组学的分离与鉴定研究技术,同时加强蛋白质组学与生物信息学的研究,以作为现有

29、基因组功能研究的鉴定和补充,甚至可以独立地完成基因组功能注释以及表达调控规律,使生命科学与农业科学研究的手段更加先进。目前水稻蛋白质组学已经从组织器官、亚细胞层次、逆境胁迫、激素诱导、突变体等方面进行了研究,蛋白组学研究的重点将从蛋白表达转向蛋白功能研究,但学者们所得出的研究结论还未形成一个完整的系统。完整的水稻蛋白组学还要深入研究蛋白质翻译后修饰(PTMs,以及蛋白质之间相互作用复杂的网络关系,这是蛋白质组学研究的一项艰巨任务。蛋白质组学技术为探明光温敏核不育水稻育性转换机理提供了可能,通过选择生产上有代表性的水稻光温敏核不育系,在其育性转换敏感期采用低温胁迫处理,研究其幼穗蛋白质动态变化,

30、寻找与育性转换相关的差异蛋白,并对其功能进行鉴定,利用质谱分析与生物信息学的方法揭示出育性转换及分子调控机理,可望最终确定并克隆出育性转换基因。参考文献:1贺福初.蛋白质组研究 后基因组时代的生力军J.科学通报,1999,44(2:113-122.2Wilkins M R,Williams K L,Appel R D,et al.Proteome Research:New Frontiers in Functional GenomicsM.Berlin: Springer press,1997:135-140.3李雪梅,李明莹,马莲菊,等.逆境胁迫下水稻蛋白质组学研究进展J.沈阳师范大学学报:

31、自然科学版,2009,27(3: 257-263.4王琳.水稻蛋白质组学研究进展J.安徽农业科学,2009,37(35:17419-17422.5Akira Tsugit,Takao Kawakami,Yotaro Uchiyama.separationand characterization of rice ProteinsJ.Electrophoresis, 1994,15:708-720.6Komatsu S,Muhammad A,Rakwal R.separation and characterization of Proteins from green and etiolated s

32、hoots of rice:to wards a rice ProteomeJ.Electrophoresis,1999,20(3: 630-636.7Komatsu S,Kojima K,Suzuki K,et al.Rice Proteome Databasebased On two dimensional Polyacrylamide gel Electrophoresis: its status in2003J.Nucleic Acids Research,2004,32:388-392.8谢锦云,李小兰,陈平,等.温敏核不育水稻花药蛋白质组初步分析J.中国生物化学与分子生物学报,20

33、03,19(2: 215-221.9邵彩虹,林文雄.水稻生育后期蛋白质组差异表达的图谱分析J.中国农学通报,2005,23(9:139-143.49第 30 卷 第 10 期 2011 年 10 月 种 子 ( Seed Vol. 30 No. 10 Oct. 2011 10 梁海鹰, 谢锦云, 陈平, 等. 光温 敏核不 育水稻 幼穗育 性转 换期蛋白质组的初步 分析 J . 广东海 洋大 学学 报, 2007, 27( 3 : 117 - 122. 11 邢俊杰, 李莉, 李磊, 等. 水稻光 温敏核 不育基 因表达 产物 初步研究 J . 生命科学研究, 2008, 12( 2 : 12

34、6 - 130. 12 萧小鹃, 杨 远柱, 林建 中, 等. 温敏核 不育 系水 稻株 1 S 及 其矮秆突变体 SV 14 茎的蛋 白质 组学比 较 J . 高等 学校 化学学报, 2008, 29( 2 : 41 - 45. 13 许丽璇, 蔡建秀. 水稻 种子萌 发过程中 胚蛋白 质差异 表达 分析 J . 中 国农学通报, 2010, 26( 6 : 10 - 16. 14 王玉 忠, 邵继荣, 刘永 胜, 等. 温 敏失绿 突变体 水稻 1103 s 在失绿过 程 中全 叶 蛋 白 的变 化 J . 植 物学 报, 1999, 41 ( 5 : 519 - 523. 15 Mika

35、mi S, Hori H, Mitsui T . Separation of distinct compart ments of rice Golgi complex by sucrose density gradient cen trifugation J . Plant Science , 2001,161: 665 - 675. 16 Mikami S, Kishimoto T, Hori H, et al. Technical improvement to 2 D PAGE of rice organelle membrane proteins J . Biosci ence, Bio

36、technology, and Biochemistry , 2002, 66: 1 170 - 1 173. 17 Heazlewood J L, Howell KA, Whelan J, et al. Towards an a nalysis of the rice mitochondrial proteome J . Plant Physiolo gy , 2003, 132: 230 - 242. 18 Tanaka N, Fujita M, Handa H. , et al. Proteomics of the rice cell: systematic idenfication o

37、f the protein population in sub cellular compartments J . MoI Gen Genom, 2004, 271: 566 - 576. 19 Ramani S, Apte K. Transient expression of multiple genes in salinity stressed young seedlings of rice J . Biochemical and Biophysical Research Communications, 1997, 233( 3 : 663 667. 20 Agrawal, G. K, R

38、. Rakwal, M. Yonekura, A. Kubo & H. Saji. Proteome analysis of diferentilaly displayed proteins as a tool for investigating ozone stress J . Proteomics, 2002, 2: 947 - 959. 21 Salekdeh G H, Siopongco J, Wade L J, et al. Proteomic analy sis of rice leaves during drought stress and recovery J . Pr

39、o teomics, 2002, 2( 9 : 1 131 - 1 145. 22 Shen S, Jing Y, Kuang T. Proteomics approach to identify wound response related proteins from rice leaf sheath J . Proteomics, 2002, 3( 4 : 527 - 535. 23 Cui S, Huang F, Wang J, et al. A proteomic analysis of cold stress responses in rice seedlings J . Prote

40、omics, 2005( 5 : 13 162 - 3 172. 24 Yan S P, Zhang Q Y, Tang Z C, et al. Comparative proteomic analysis provides new insights into chilling stress responses in rice J . Mol Cell Proteomics, 2006( 5 : 484 - 496. 25 MaKoto Hash1 Moto, Setsuko Komatsu Proteomics analysis of rice seedlings during cold s

41、tress J . Proteomics, 2007 ( 7 : 1 293 - 1 302. 26 温福平, 张檀, 张朝晖, 等. 赤霉 素对盐 胁迫抑 制水稻 种子 萌发的缓解作用的蛋白 质组分 折 J . 作物 学报, 2009, 35 ( 3 : 483 - 489. 27 Chen X, Wang Y, Li JY, et al. Mitochondrial proteome during salt stress induced programmed cell death in rice J . Plant Physical Bioch, 2009, 47( 5 : 407 - 4

42、15. 28 Ventelon Debout M, Delalande F, Brizard J, et al. Proteome a nalysis of cultivar specific deregulations of Oryza sativa indica and O. sativa japonica cellular suspensions undergoing rice yellow mottle virus infection J . Proteomics, 2003, 4 ( 1 : 216 - 225. 29 Kim S T, Cho K S, Yu S, et al. Proteomic analysis of differenti ally expressed proteomics induce