Bradford法测蛋白质浓度

1、Bradford法测蛋白质浓度一、实验目的配制一组浓度分别为 ml , ml, ml , ml , ml ,0 mg/ml的牛血清蛋白（BSA） 溶液，测定这组溶液的吸光度，得到蛋白质浓度对吸光度的一条标准曲线。测定 未知蛋白质浓度样品的吸光度，根据标准曲线得到蛋白质的浓度。二、实验原理考马斯亮蓝（CBB）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色， 蛋白 质一色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正 比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反

2、应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为01 OOOygml，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。三、实验过程1 准备所需的药品和仪器。2 计算所需配制的溶液的量。先配制1 mg/ml的牛血清蛋白（BSA）母液，再往母液中加入磷酸缓冲溶液 （PBS）配制一组浓度分别为 ml , ml, ml , ml , ml的BSA溶液，再将这组 溶液稀释10倍，得到一组浓度分别为 ml , ml, ml , ml , ml的BSA溶液。 计算第一步稀释各组需要的BSA溶液及PBS溶液

3、的体积。BSA体积(ul)10080604020PBS体积(ul)900920940960980BSA浓度(mg/ml)3 具体操作过程。用天平称量1.00g牛血清蛋白（BSA），溶于去离子水中，配成100ml的溶 液，溶液的浓度为10mg/ml。用移液枪分别取100ul, 80ul, 60ul, 40ul, 20ul的 BSA溶液，置于的EP管中，再分别加入 900ul, 920ul, 940ul, 960ul, 980ul的 磷酸缓冲溶液（PBS）配成1ml的溶液，震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分 别为 ml , ml, ml , ml , ml 的 BSA 溶液。移液枪分别移取100u

4、l刚配好的一组BSA溶液，置于的EP管中，各加入900ul的PBS溶液，震荡使溶液混合均匀。得到一组浓度分别为mg/ml , ml,ml , ml , ml的BSA溶液。另外量取1ml的PBS溶液（BSA溶液浓度为0 mg/ml） 作对照试验。用移液枪分别移取50ul配好的一组BSA溶液，滴加到孔板中，再分别加入 200ul的考马斯亮蓝（CBB）。静置10min后，用酶标仪测得这组 BSA溶液的吸 光度。四、实验数据及处理测得的BSA溶液的吸光度如下:BSA浓度(mg/ml)0吸光度用orgin作出吸光度对BSA浓度的关系曲线y=3 09x0.6807R2=0.9541嗫惯11.0090.8-Q.7-fl ft_w V0 000.020.040.C60080.10mg/ml五、实验结果分析得到的吸光度对BSA浓度的关系曲线为y=+，R2=o可以看出吸光度一浓度 的关系曲线中R2值较小，即测得的吸