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文档简介
1、第二节第二节 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质第二讲第二讲 组成细胞的分子组成细胞的分子实验原理:实验原理:某些化学试剂能够使生物组织中的有关某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。有机化合物产生特定的颜色反应。还原糖还原糖 + 斐林试剂斐林试剂 砖红色沉淀砖红色沉淀脂肪脂肪 + 苏丹苏丹(或苏丹(或苏丹)染液)染液橘黄色(或红色)橘黄色(或红色) 蛋白质蛋白质 + 双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色淀粉淀粉 + 碘液碘液蓝色蓝色水浴加热水浴加热一、可溶性还原糖的检测:一、可溶性还原糖的检测:(1)原理:还原糖)原理:还原糖 + 斐林试剂斐
2、林试剂 砖红色沉淀。砖红色沉淀。(2)选材:含糖量较高,颜色为白色或近于白色的植)选材:含糖量较高,颜色为白色或近于白色的植物组织。如物组织。如苹果、梨苹果、梨等等(3)检测过程:)检测过程:水浴加热水浴加热振荡混匀振荡混匀5065水浴水浴加热加热2min2mL组织组织样液样液刚配制的斐刚配制的斐林试剂林试剂2mL呈现浅蓝色呈现浅蓝色变成砖红色(变成砖红色(Cu2O)还原糖:含有半缩醛羟基的糖类,主要是葡萄糖、果糖和还原糖:含有半缩醛羟基的糖类,主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。观察溶液颜色变化:浅蓝色观察溶液颜色变化:浅蓝色棕
3、色棕色砖红色砖红色二、脂肪的检测二、脂肪的检测(1)选材:经浸泡去种皮的花生种子。)选材:经浸泡去种皮的花生种子。(2)检测过程:)检测过程:制片制片选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央制成临时装片:滴制成临时装片:滴1 2滴蒸馏水,盖上盖玻片滴蒸馏水,盖上盖玻片染色:在薄片上滴加染色:在薄片上滴加2 3滴苏丹滴苏丹染液染液,染色,染色2 3min洗去浮色:用吸水纸吸去染液,滴加体积分数为洗去浮色:用吸水纸吸去染液,滴加体积分数为50%的酒精的酒精1 2滴滴镜检观察:镜检观察:在低倍镜下寻找到已着色的在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒,然后用高倍镜观察。圆形小颗
4、粒,然后用高倍镜观察。切片:切片:花生种子(浸泡花生种子(浸泡h),去皮,将子叶削成薄片。),去皮,将子叶削成薄片。视野中视野中有橘黄有橘黄色颗粒色颗粒橘黄色小圆颗粒橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒即为脂肪颗粒脂肪脂肪 + 苏丹苏丹(或苏丹(或苏丹)染液)染液 橘黄色(或红色)橘黄色(或红色)注意事项注意事项(1)若用花生种子作实验材料,必须提前浸泡若用花生种子作实验材料,必须提前浸泡34小时,浸小时,浸泡时间短了,不容易切片,浸泡时间过长,则组织太软,切泡时间短了,不容易切片,浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形,切片要尽可能的薄。下的薄片不易成形,切片要尽可能的薄。(2)染色后一定要用)
5、染色后一定要用50%的酒精溶液洗去浮色(酒精能溶解的酒精溶液洗去浮色(酒精能溶解苏丹苏丹),染色和洗浮色时间不宜过长。),染色和洗浮色时间不宜过长。三、蛋白质的检测:三、蛋白质的检测:(1)原理:蛋白质)原理:蛋白质 + 双缩脲试剂双缩脲试剂 紫色络合物紫色络合物(2)选材:黄豆、鸡蛋清(稀释)、牛奶、豆浆)选材:黄豆、鸡蛋清(稀释)、牛奶、豆浆(3)检测过程:)检测过程:2 ml组织样液组织样液1 ml双缩脲试剂双缩脲试剂A液,摇匀液,摇匀3-4滴双缩脲试剂滴双缩脲试剂B液,摇匀液,摇匀观察颜色变化观察颜色变化紫色紫色无色无色紫色紫色(创造碱性条件)(创造碱性条件)(提供(提供Cu2+)双缩
6、脲试双缩脲试剂剂B 3-4滴滴双缩脲试双缩脲试剂剂A 1mL2mL组织组织样液样液在碱性条件(在碱性条件(NaOH)下,蛋白质中的肽键)下,蛋白质中的肽键与与Cu2作用生生紫色络合物。因此,操作时,应先加作用生生紫色络合物。因此,操作时,应先加A再加再加B,且且A多多B少,如果少,如果B过量,过量, Cu2的蓝色就会遮盖生成的紫色。的蓝色就会遮盖生成的紫色。蛋白质的检测结果蛋白质的检测结果注意事项注意事项(1)如果用鸡蛋清作为材料,则必须进行充分稀释,否则反应)如果用鸡蛋清作为材料,则必须进行充分稀释,否则反应后的产物会粘固在试管内壁上,使反应不彻底,且试管不易洗后的产物会粘固在试管内壁上,使
7、反应不彻底,且试管不易洗刷干净。刷干净。 (2)【双缩脲试剂双缩脲试剂】:A液液:0.1g/mL NaOH,B液:液:0.01g/mL CuSO4。先加。先加A液后加液后加B液,且液,且B不能过量,不需要加热。不能过量,不需要加热。(3)过量的双缩脲试剂)过量的双缩脲试剂B会与试剂会与试剂A反应,使溶液呈蓝色,而反应,使溶液呈蓝色,而掩盖生成的紫色。掩盖生成的紫色。(4)先加入)先加入A液液2ml,摇匀;再加入,摇匀;再加入B液液3-4滴,摇匀。滴,摇匀。四、淀粉的检测:四、淀粉的检测:(2)选材:马铃薯匀浆)选材:马铃薯匀浆(1)原理:淀粉)原理:淀粉 + 碘碘 液液 蓝色蓝色(3)检测过程:)检测过程:2 ml组织样液组织样液2滴碘液滴碘液观察颜色变化观察颜色变化蓝色蓝色苹果、梨、白萝卜苹果、梨、白萝卜斐林试剂斐林试剂砖红色沉淀砖红色沉淀花生种子花生种子苏丹苏丹染液染液苏丹苏丹染液染液橘黄色橘黄色红色红色豆浆、牛奶、鸡蛋清豆浆、牛奶、鸡蛋清双缩脲试剂双缩脲试剂紫色紫色面粉、马铃薯匀浆液面粉、马铃薯匀浆液碘液碘液蓝色蓝色注:鉴定还原糖需加热;脂肪的鉴定不一定要用显注:鉴定还原糖需加热;脂肪的鉴定不一定要用显微镜,要观察脂肪颗粒,则必须用显微镜。微镜,要观察脂肪颗粒,则必须用显微镜。斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂与双缩脲试剂的比较斐林试剂用的是甲液
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