第十章 甾体激素类药物的分析

1、基本结构：环戊烷骈多氢菲基本结构：环戊烷骈多氢菲C20C21ABCD12345678910111213141516171819分类：分类：甾体激素甾体激素肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素性激素性激素雄性激素及蛋雄性激素及蛋白同化激素白同化激素孕激素孕激素雌激素雌激素OHOOHOCH2OHHHH肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素氢化可的松氢化可的松OHOOHOHFHOCH3OHCH3肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素醋酸地塞米松醋酸地塞米松OOHHHHOCH3雄性激素雄性激素丙酸睾酮丙酸睾酮OOHHHHO蛋白同化激素蛋白同化激素苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙COHHHCH3O孕激素孕激素黄体酮黄体酮CHOHHHOHCH雌

2、激素雌激素炔雌醇炔雌醇一、结构与性质一、结构与性质 1. 肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应 C17 醇酮醇酮基基还还 原原 性性2. 雄性激素及蛋白同化激素雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基、与羰基试剂反应试剂反应 C17 羟基羟基可成酯可成酯3. 孕激素孕激素主要活性基团主要活性基团性性 质质4 3 酮酮UV、与羰基试、与羰基试剂反应剂反应C17 甲酮基甲酮基与亚硝基铁氰与亚硝基铁氰化纳反应化纳反应C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应4. 雌激素雌激素主要活性基团

3、主要活性基团性性 质质A环为环为3OH 苯环苯环UV、与重氮苯、与重氮苯磺酸盐反应磺酸盐反应C17 乙炔基乙炔基与与AgNO3反应反应C17 羟基羟基可成酯可成酯二、鉴别试验二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应（一）与强酸的呈色反应甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl（母核）（母核）(二二) 官能团的反应官能团的反应肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物呈色呈色四氮唑盐四氮唑盐OH1 C17 醇酮基醇酮基还原性还原性A. 呈色反应呈色反应肾上肾上腺皮腺皮质激质激素药素药物物Cu2O橙红色橙红色碱性碱性酒石酸铜酒石酸铜B. 沉淀反应沉淀反应Ag黑色黑色氨制硝

4、酸银氨制硝酸银甾酮类甾酮类激素药激素药物物呈色呈色羰基试剂羰基试剂2. C3酮基和酮基和C20酮基酮基常用的羰基试剂：常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼OOHNCONHNH2HClCONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）睾酮睾酮OCCH3O2NCONHNH2HCl黄体酮黄体酮CONHNCCH3NHNOCNN异烟双腙（黄色）异烟双腙（黄色）具有甲酮具有甲酮基或活泼基或活泼亚甲基的亚甲基的甾体激素甾体激素类药物类药物呈色呈色亚硝基铁氰化纳亚硝基铁氰化纳间二硝基酚间二硝基酚芳香醛芳香醛3. 甲酮基甲酮基黄体酮黄体酮蓝紫色蓝紫色亚硝基铁亚硝基铁 氰化纳

5、氰化纳其他甾体其他甾体淡橙色淡橙色不显色不显色COCH3O黄体酮黄体酮 NOCNFe OHH2O2+-4Fe5CNNOCHCOO有机氟有机氟F有机破坏有机破坏有机氯有机氯Cl4. 有机卤素有机卤素茜素氟蓝茜素氟蓝 硝酸亚铈硝酸亚铈硝酸硝酸硝酸银硝酸银AgCl 呈色呈色 OOOHOHCH2NCH2COOHCH2COOH茜素氟蓝茜素氟蓝OOOHOCH2NCH2COOCeCH2COOFOHF- Ce雌激素雌激素类药物类药物红色偶红色偶 氮染料氮染料重氮苯磺酸重氮苯磺酸5. 酚羟基酚羟基含炔基含炔基的甾体的甾体激素激素银盐沉淀银盐沉淀硝酸银硝酸银6. 乙炔基乙炔基RCCHAgNO3RCCAg炔雌醇炔雌

6、醇OHCCHHOOHCCAgHO白白3AgNO 黄黄体体酮酮双双酮酮肟肟黄黄体体酮酮盐盐酸酸羟羟胺胺 .p .m 苯苯甲甲酸酸酯酯炔炔雌雌醇醇苯苯甲甲酰酰氯氯KOH .p .m (三三) 制备衍生物测定制备衍生物测定m.p. .p .m 睾睾丸丸素素丙丙酸酸睾睾酮酮醇醇制制KOH盐盐酸酸氨氨基基脲脲苯苯丙丙酸酸诺诺龙龙 分解分解约约.p .m缩氨基脲衍生物缩氨基脲衍生物 KOHOCOCHR醇制醇制 OCOCHCHCH SOHOHHC （四）水解产物的反应（四）水解产物的反应 戊戊酸酸戊戊酸酸雌雌二二醇醇醇醇制制NaOH H己己酸酸己己酸酸羟羟孕孕酮酮醇醇制制 OH H-3-酮酮 240nm苯环

7、苯环 280nmOCCC CCCCCC （五）（五） UV法法CH 33003000cm-1HC 30002700cm-1OC 19001650cm-1CC 16501450cm-11000650cm-1CH （六）（六） IR法法37503300cm-1OH 醋酸可的松醋酸可的松COOOOHCH2OCOCH3结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OHC20 酮基、酮基、 C11 酮基、醋酸酯酮基、醋酸酯结构特征：结构特征：43酮、酮、C17 OH C17乙炔基乙炔基炔诺酮炔诺酮OOHCCH结构特征：酚羟基结构特征：酚羟基、C17 OH C17 乙炔基乙炔基炔雌醇炔雌醇OHCCHHO（七）（

8、七） TLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别制剂的鉴别 方法：对照品法方法：对照品法 要求供试品溶液所显主斑要求供试品溶液所显主斑点的点的颜色颜色和和位置位置与对照品溶液与对照品溶液的主斑点相同。的主斑点相同。（八）（八） HPLC法法 主要用于甾体激素类药物主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）德软膏、醋酸氟轻松软膏） 方法：对照品法方法：对照品法 要求在含量测定项下记录要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的的色谱图中，供试品峰的tR与与对照品峰的对照品峰的tR一致。一致。三、三、 杂质检查杂质检查

9、（一）其他甾体（一）其他甾体1.定义定义 与标示药物结构不同的甾与标示药物结构不同的甾体化合物都称为体化合物都称为“其他甾体其他甾体”OHH3COOHH3COOHOLi/NH3 C2H5OH弱酸弱酸雌二醇雌二醇3甲醚甲醚苯丙酸诺龙苯丙酸诺龙的合成路线的合成路线IIIOHOOCO(CH2)2-C6H5O强酸强酸苯丙酰氯苯丙酰氯HClIII3. 特点特点 （1）可能存在多个甾体杂质）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似）结构类似2. 来源来源 原料、中间体、异构体、原料、中间体、异构体、降解产物降解产物4. 方法（具有一定分离能力）方法（具有一定分离能力） TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对

10、比法） HPLC法（类似高低浓度对比法）法（类似高低浓度对比法）（1）TLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质斑点数目规定杂质斑点数目v 规定杂质斑点颜色规定杂质斑点颜色特点：特点： （1）简便易行，不需特殊的仪器；）简便易行，不需特殊的仪器； （2）不需对照品；）不需对照品； （3）只能控制单个杂质的限量；）只能控制单个杂质的限量； （4）要求杂质与主成分的显色灵）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。敏度接近。（2）HPLC法（高低浓度对比法）法（高低浓度对比法） 判定方法：判定方法：v 规定杂质峰数目规定杂质峰数目v 规定杂质峰面积规定杂质峰面积（二）

11、游离磷酸（二）游离磷酸地塞米松磷酸钠地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法对照品法原理：原理： OnHMoOPHPOHPOMoOH还原还原钼蓝钼蓝对照液对照液供试液供试液对对样样还原还原钼酸铵钼酸铵AAnm 方法：方法： POKHPOH%.%.L %. （三）甲醇和丙酮（三）甲醇和丙酮（灵敏度法）（灵敏度法）甲醇甲醇 不得出峰不得出峰 检测限检测限= 3.1ng丙酮丙酮 5.0% 内标法内标法 + 校正因子校正因子GC法法OHO雌雌酮酮OHCCHHO炔雌醇炔雌醇OOH3CHO二酮二酮烯烯羟基雄甾羟基雄甾 ,乙炔化乙炔化

12、（四）雌酮（四）雌酮原理原理 Zimmermann反应反应紫红色紫红色间二硝基苯间二硝基苯碱性碱性KOH乙醇乙醇OCCH2高纯度高纯度OHONO2NO2硒硒四、四、来源来源 合成中用二氧化硒合成中用二氧化硒(SeO(SeO2 2) )脱氢脱氢原理原理nmA 环环己己烷烷苯并苯硒二唑苯并苯硒二唑二氨基萘二氨基萘 ,Se, .pH SeSe盐酸羟胺盐酸羟胺氧瓶燃烧氧瓶燃烧方法方法四、含量测定四、含量测定（一）（一）UV法法-3-酮酮 240nm（）肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素孕激素 苯环苯环 280nm（）雌激素雌激素（二）反应分光光度法（二）反应

13、分光光度法1. 适用于非分光光度活性药物适用于非分光光度活性药物2. 使待测组分光谱位移，避免干扰使待测组分光谱位移，避免干扰3. 增加测定灵敏度增加测定灵敏度4. 增加选择性增加选择性弱、非分弱、非分光光度活光光度活性药物性药物强分光强分光光度活光度活性药物性药物化学反应化学反应 肾上腺皮质激素类肾上腺皮质激素类C17 -醇酮基醇酮基强还原性强还原性1. 原理原理有有色色甲甲瓒瓒四四氮氮唑唑盐盐醇醇酮酮基基 COH -还原还原四氮唑比色法四氮唑比色法醛醛基基酮酮甾甾基基甲甲酸酸衍衍生生物物醇醇酮酮基基 eO羧羧酸酸衍衍生生物物羟羟基基 OH-分子重排分子重排OOHHOHCOHOCOHCl-+

14、CNNNNOCH3+-ClCNNNNOCH3蓝四氮唑蓝四氮唑（BT） OHe4 HCNNNNOCH3HCNNNNOCH3双甲瓒（暗蓝）双甲瓒（暗蓝）nmmax525 2. 方法方法ChP TTC（RT） BP TTC（RT）USP BT对照品法对照品法 氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵对照液对照液供试液供试液ATTC4045暗暗3. 讨论讨论（1） 基团对反应速度的影响基团对反应速度的影响C11= O C11OHC21OH C21-酯酯C16无论何种取代基无论何种取代基（2） 溶剂、水分的影响溶剂、水分的影响含水量含水量5%含水含水10%A10%含水含水30%几无反应几无反应 无醛无水乙醇无醛无水

15、乙醇醛醛 A 无水乙醇无水乙醇（3） O2与光线的影响与光线的影响反应过程反应过程反应产物反应产物怕光怕光避光、快速避光、快速O2影响影响颜色强颜色强度和稳度和稳定性定性隔绝空气、隔绝空气、 快速、充快速、充N2（4）碱的种类及加入顺序）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行条件下进行以以氢氧化四甲基铵氢氧化四甲基铵的结果最佳的结果最佳碱碱试试液液四四氮氮唑唑盐盐皮皮质质激激素素溶溶液液加入顺序：加入顺序：（5） 温度与时间温度与时间t甲瓒分解甲瓒分解%ChP 25 4045BP 30 1h4. 特点：特点： 缺点缺点 影响因素太多影响因素太多 优点优点

16、测定结果能指示药品测定结果能指示药品 的稳定性（氧化及降的稳定性（氧化及降 解产物无此反应）解产物无此反应）肾上腺皮质激素、肾上腺皮质激素、 雄性激素和蛋白同雄性激素和蛋白同化激素、孕激素化激素、孕激素C3酮基酮基1. 原理原理异异烟烟腙腙（黄黄）酮酮基基异异烟烟肼肼 CHCl（缩合）（缩合）异烟肼比色法异烟肼比色法CONHNOHN异烟腙（黄色）异烟腙（黄色）2. 方法方法 异烟肼异烟肼挥去乙醇挥去乙醇对照液对照液供试液供试液A CHCl暗暗45对照品法对照品法3.讨论讨论反应速度反应速度（1）C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反应不反应反应专属性反应专属性 C3酮基酮基（2）溶剂的选择）溶剂的选择异烟肼盐酸盐异烟肼盐酸盐甲醇、乙醇甲