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1、全国执业兽医师考试微生物免疫学辅导教材自从宠物行业的兴起,越来越多的人想成为一名名副其实的兽医,但有一部分人并不是专业的兽医,只是参加了一个培训班,或者有些经验就可以当兽医,其实这都属于违法行医,农业部对这些行为都是严打到底。成为兽医的必要条件就是通过执业兽医资格考试,那参加考试有什么报名条件呢?其中一条是必须是畜牧兽医相关专业才可报考,因此如果大学不是兽医相关专业,那可以报名参加函授或网络教育取得大专以上文凭即可报名参加考试。本期考试辅导资料关于执业兽医-微生物学与免疫学辅导资料,希望对备考执业兽医师的考生有所帮助。第六篇:兽医微生物学与免疫学一 细菌的结构与生理【01】细菌形态:具有细胞壁
2、和核质的单细胞原核细胞型微生物。无成形的细胞核,无完整的细胞器。以微米为测量单位。在固体培养基上培养,肉眼可见菌体集落。【02】细菌结构(一)细胞壁:1、肽聚糖:为聚糖骨架;原核生物细胞特有。2、磷壁酸:G+菌特有;其抗原性较强:黏附宿主细胞。3、外膜: 外膜蛋白:脂蛋白、微孔蛋白。脂质双层:脂多糖:类脂A:内毒素成分。 核心多糖:具有属特异性。特异性多糖:具有种型特异性。4、 周浆间隙:外膜与细胞膜之间,可获得营养,解除病毒。 (二)细胞膜 :定义:为脂质双层,并镶嵌有特殊功能的载体蛋白酶类;不含胆固醇。 功能:物质交换、分泌胞外酶、产生与利用能量有关、细胞生物合成的场所。(三)细胞质:成分
3、:水、蛋白质、脂类、核酸、少量无机盐、核糖体、质粒。(为超微结构)核糖体:由RNA和蛋白质组成;是蛋白质合成场所。质粒:定义:细胞染色体外的遗传物质,为双股DNA分子。包括:F质粒:决定细菌的致育性。R质粒:决定耐药性。毒力质粒:决定致病性。(四)核体:染色体(裸露的双链DNA)【03】G+菌:革兰氏染色为紫色;G-菌:革兰氏染色为红色。【04】细胞壁的功能:维持固有形态、物质交换、携带有抗原决定簇与致病性有关。【05】细菌特殊结构:荚膜:为黏液样物质;为多糖或多肽或透明质酸奶;在营养品丰富时才形成;能抵抗吞噬;有特异性抗氧。鞭毛:细长波浪状物业;成分为蛋白质;能运行(沙门菌);有特异的H抗氧
4、; 与黏附有关。菌毛:普通菌毛:有黏附功能的;性菌毛:F菌毛。成分为菌毛蛋白(pillin);有良好的抗生素抗性。芽孢:定义:一定条件下胞质脱水浓缩形成;有多层膜包裹;通透性低;有完整核质和酶系统;代谢静止;不能分裂繁殖。是抵抗不良环境的特殊形成。灭活方法:160干热灭菌或高压蒸气灭菌。【06】细菌染色方法革兰氏染色法的程序:草酸铵结晶紫染色1min碘液染1min95醇脱色30s碳酸复红1min、意义:鉴别细菌、选择抗菌药物。瑞氏染色法:将细菌染成蓝色;组织细胞的细胞核染成蓝色;背景和细胞浆染成红色。抗酸染色法:常用于结核杆菌、副结核杆菌的染色(红色)。顺序是:碳酸复红微热35min3盐酸酒精
5、脱色碱性美兰复红1min、特殊染色法:包括抗酸染色法,芽孢、荚膜、鞭毛染色法。【07】细菌的生长条件:营养物质;酸碱度(最宜pH为7、2-7、6);温度(最适为3);气体(氧气、二氧化碳);渗透性。【08】世代时间:一个菌体以二分裂方式繁殖为两个菌体所需的时间。【09】细菌的生长曲线分为四个时期:迟缓期:菌体增大,代谢活跃;分裂迟缓,细菌数增加不显著。对数期:活菌数对数直线上升;生物活性典型;对抗生素敏感。稳定期:新繁殖的活菌数与死菌数平衡;产生芽孢,外毒素等。衰亡期:死菌数超过活菌数;菌体形态改变。【10】细菌新成代谢的能量由ATP供给。【11】细菌生物氧化的类型发酵:以有机物为受氢体。有氧
6、呼吸:以氧气为受氢体。厌氧呼吸:以无机物硝酸盐为受氢体。【12】细菌合成的代谢产物:致热源:(操作时严格注意无菌操作)。毒素:内毒素为G-菌死后释放,外毒素为G+菌分泌的蛋白质。侵袭性酶类:透明质酸酶(促使细菌扩散)。色素:铜绿假单胞菌产绿色色素。细菌素:仅对近缘菌株有抗菌作用的蛋白质,如:绿脓菌素。抗生素:多有放线菌和真菌产生。维生素:大肠杆菌能合成维生素B维生素K。【13】细菌的分解代谢试验:氧化发酵试验:大肠杆菌产酸产气;沙门菌产酸不产气。氧化酶试验:阳性者为什么紫色。(阳性菌有假单胞菌、气单胞菌;阴性菌有:肠科杆菌)过氧化氢酶试验:阳性者产生气泡。(阳性:葡萄球菌、微球菌。阴性:链球菌
7、。)硫化氢试验:产生黑色为阳性(阳性:变形杆菌;阴性:大肠杆菌)尿素酶试验:阳性者呈红紫色(阳性:变形杆菌;阴性:沙门菌)吲哚试验:阳性呈红色(阳性:大肝杆菌、变形杆菌)甲基红试验(MR):红色反应为阳性(阳性:大肠杆;阴性:产气杆)VP试验:阳性呈红色(阳性:产气杆菌;阴性:大肠杆菌)枸橼酸盐利用试验(C):培养基变深兰为阳性(阳性:产气杆菌;阴性:大肠杆菌)IMVC试验:大肠杆菌+-;产气杆菌-+【14】固体培养基中琼脂含义2;半固体培养基中琼脂含量0.5%。【15】基础培养基:常用普通肉汤培养基,含蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、水等;常用于糖发酵试验。【16】营养培养基:在基础培养基中加入
8、葡萄糖、血液、血清、酵母浸膏等;常用血琼脂平板(链球菌)。【17】选择培养基:麦康凯培养基抑制G+生长,利于用大肠杆菌、沙门菌生长。【18】鉴别培养基:另加入底物及指示剂,而鉴别细菌。【19】厌氧培养基:常用疱肉培养基;即在肉浸液中加入煮过的肉渣,用凡士林封口。【20】液体培养基生长现象:混浊生长(葡萄球菌);沉淀生长(链球菌);菌膜生长(枯草杆菌)。【21】半固体培养基中的生长现象:沿穿刺线生长或穿刺线向四周扩散呈放射状生长。【22】固体培养基中的生长现象:平板上划线后形成菌落;斜面上划线重叠形成菌苔。二 细菌的感染【01】正常菌体的分布:口腔:球菌、乳杆菌、棒状杆菌;胃:乳杆菌、幽门螺杆菌
9、;反刍前胃:无芽孢厌氧菌;大肠:双歧,拟杆菌,肠球菌,大肠杆菌,乳杆菌;鼻、咽:葡萄酒球菌;喉、扁桃体:甲型链球菌,卡他球菌;阴道:乳杆菌;尿道口:葡萄球菌,棒状杆菌;支气管、肺:无菌;【02】正常菌群的生理作用:生物颉颃作用,营养作用,免疫作用。【03】柯赫法则:是确定某种细菌是否有具有致病性的主要依据。特定的病原菌应在同一疾病中可见,在健康者不存在;此病原菌能被分离培养而得到纯种;此病原菌纯培养物接种易感动物能导致同样病症;自实验感染的动物体内能重新获得该病原菌的纯培养物。【04】细菌的毒力因子:侵袭力黏附因子F1菌毛:无特异性;F4菌毛K88:黏附猪小肠前段;F6菌毛987P:黏附猪小肠
10、后段。侵袭性酶透明质酸酶、链激酶:链球菌产生;胶原酶:梭菌、气单胞菌产生;血液凝固酶:致病葡萄菌产生。型分泌系统沙门氏菌、大肠杆菌等具有。干扰防御荚膜:抵抗吞噬;细菌表面蛋白:抗吞噬、避免抗体补体作用;蛋白酶;细胞内逃逸:如产生过氧化氢,中和吞噬细胞中的氧自由基。毒素外毒素由G+及少量G-(如产毒性大肠埃希氏菌)产生; 0、3%甲醛 刺激 机体外毒素类毒素产生抗毒素; 神经毒素:包括破伤风毒素,肉毒毒素。内毒素是G-菌细胞壁的脂多糖,当细菌死亡后才游离出来;产生症状:发热、毒血症、休克、内凝血、出血。【05】破伤风梭菌及其芽孢必须侵入缺氧的深部创口才能致病。【06】几种血症的区别菌血症:病原菌
11、侵入血统,但不繁殖。毒血症:病原菌不的入血,但其产生内毒素入血,引起症状。败血症:病原菌入血,并繁殖产生毒性物质,引起中毒症状(高热、皮肤黏膜淤斑、肝脾肿大)。脓毒血症:化脓性细菌入血并繁殖,产生新的化脓灶。【07】药敏试验结果判定标准:敏感:用常用剂量时,该抗菌药物治疗有效。中介:指被测菌株的MIC与该抗菌药物常用剂量所能达到的血清和组织浓度相近。耐药:指被测菌株不能被该抗菌药物常用剂量达到的血液浓度所抑制,临床治疗无效。三 细菌感染的诊断【01】采集样本的原则:严格无菌操作;根据不同疾病或同一疾病不同时期采集不同的标本;应在使用抗菌药前采集,且采集时不得使用消毒剂;样本须新鲜,尽快送检;多
12、数可冷藏运输,粪便样本常加入甘油缓冲盐水保存液;按规定包装、冷藏、专人递送;做好标记。【02】抗体检测:最好检测急性期和恢复双份血清样本,后者为前者4倍以上才具诊断价值。【03】聚合酶链式反应(PCR)的4种主要材料:DNA模板、引物、耐热DNA聚合酶、脱氧核苷酸。【04】核酸杂交技术的设计原理:DNA双螺旋分子的碱基互补原理。【05】利用生化反应对肠道杆菌进行鉴定是必不可少的。四 消毒与灭菌【01】消毒:指杀灭病原微生物,但不一定能杀死芽孢。【02】灭菌:指杀灭病原微生物、非病原微生物及其芽孢。【03】高压蒸汽灭菌法:应用最广、灭菌效果最好的方法。其条件为103、4kp、121、3、维持15
13、-30min、【04】煮沸法:100时5min可杀死细菌的繁殖体,1-3h杀死芽孢,加入2%碳酸钠则沸点升至少105【05】流通蒸汽法:100 30min杀死细菌的繁殖体,不可杀死芽孢。【06】巴氏消毒法:主要用于食品消毒,如下65维持30min、【07】热空气灭菌法:160,2h可杀死芽孢。用于玻璃器皿消毒。【08】紫外线灭菌:265nm波长的紫外线杀菌能力最强。用于实验室,养殖场入口的消毒室、手术室、种蛋等的空气消毒。【09】电离辐射灭菌:称“冷灭菌”,用于一次性医用塑料制品消毒。【10】滤过除菌法:所器具为滤菌器,其孔径为0、22-0、45um即细菌不能通过,但病毒、支原体可通过。【11
14、】紫外线消毒:有效距离不超过2-3m、【12】消毒剂作用机制:使菌体蛋白变性、凝固(醇、酚、醛);干扰细菌代谢(酚类);改变细胞膜通透性(新洁尔灭)。【13】能杀灭芽孢的消毒剂:氯制剂、过氧化化物、醛类。【14】影响消毒药作用的因素:浓度、性质、作用时间;温度和酸碱度;细菌种类、数量状态;有机物。五主要的动物病原菌1.G+菌:球菌.李氏杆菌.炭疽.芽孢杆菌.梭菌.分支杆菌。2.链球菌:a链球菌:条件致病菌;B溶血链球菌:致病力强;r溶血链球菌:无溶血环,不致病;其血液琼脂平板:灰白.光滑.边缘整齐小菌落;猪链球菌z型在绵羊血平板呈a溶血,马血平板为B溶血;无芽孢.无鞭毛;症.败血症.脑膜炎.关
15、节炎。3.蜂房球菌:即欧洲幼虫腐臭病原。厌氧培养:白色.边缘光滑.表面微突起的菌落。4.大肠杆菌:为G-菌,无芽孢.有菌毛.有鞭毛.兼性厌氧;琼脂平板:圆形.隆起.光滑.湿润.灰白色.中等大小菌落;肉汤中:均匀混浊.管底形成黏性沉淀;发酵乳糖可产酸产气;麦康凯琼脂板:形成红色菌落;伊红美兰琼脂:产生黑色带金属闪光的菌落;绵羊血平板:呈B溶血;其中产肠毒素大肠杆菌ETEC最常见;毒力因子:包括菌毛(黏附素).肠毒素.类脂A.K抗原.O特异多糖;诊断:取肝.脾.肾.小肠内容物.肠系膜淋巴结,分别在麦康凯和血平板上培养,再取典型菌落进行生化试验。5.沙门氏菌为G-菌,无芽孢,无荚膜,有鞭毛,兼性厌氧
16、;但鸡白痢与鸡伤寒沙门氏菌无鞭毛,无纤毛;普通肉汤中:均匀浑浊;不可分解乳糖;麦康凯琼脂培养:无色,透明,圆形,光滑,扁平小菌落;毒力因子:菌毛,内毒素,肠毒素;诊断:需分离培养,生化鉴定;鼠伤寒沙门氏菌:致各种畜禽的副伤寒及人类食物中毒。6.多杀性巴氏杆菌为G-菌,无鞭毛,无芽孢,两极着色,兼性厌氧;麦康凯培养:不生长;血琼脂平板:露滴样小菌落,不溶血;血清肉汤中:液面形成菌环,管底出现粘稠沉淀;可分解葡萄糖,产酸不产气;可发酵甘鲁醇,山梨醇,木糖;引起的疾病:牛出败,猪肺疫,禽霍乱,兔巴氏杆菌病;毒力因子:荚膜,内毒素;诊断:染色镜检发现两极着色的短杆菌;用血琼脂分离培养后来,再接种于三糖
17、铁培养基,使底部变黄;病料悬液皮下注射小鼠,多在哪里48h内死亡。7.鸭疫里氏杆菌为G-菌,有荚膜,无芽孢,无鞭毛,瑞氏染色两极着色;巧克力板和二氧化碳箱中:无色素,圆形,光滑,1-2mm的菌落;血清肉汤中:轻微浑浊,少量沉淀;不发酵葡萄糖(区别多杀巴氏杆菌);只氧化酶,触酶试验为阳性;其余为阴性;主要症状:2-3周龄鸭大批死亡;诊断:取病鸭脑,心血,用巧克力培养基分离,再进行生化鉴定。快速特异诊断方法:PCR,凝集试验。8.副猪嗜血杆菌为G-菌,短杆状,无鞭毛,无芽孢,美兰染色两极浓染。4,5型为优势菌型,兼性厌氧;巧克力平板:圆形,光滑,边缘整齐,灰白,半透明的菌落;诊断:分离培养要求高,
18、可用胰蛋白胨大豆琼脂。9.猪胸膜肺炎放线杆菌为G-菌,小球杆菌,两极染色,有荚膜,有鞭毛,兼性厌氧。绵羊血平板:产生稳定的B溶血;金黄色葡萄球菌可增强其溶血圈(即.CAMP试验阳性);毒力因子:毒素(为穿孔毒素),荚膜;鉴定:绵羊血琼脂培养CAMP试验测脲酶活性及甘露醇发酵能力用琼扩试验鉴定血清型。10.布鲁氏菌为G-菌,球杆状,无鞭毛,无芽孢,严格需氧气,二氧化碳;马血清培养基中:透明小菌落;感染症状:猪牛流产,睾丸炎,人感染为波浪热,关节炎;毒力因子:内毒素,荚膜,透明质酸酶;诊断:采取流产胎儿胃内容物,肺等,作革兰氏和柯兹洛夫斯基染色镜检红色球杆菌(可初诊);以试管凝集试验和补体结合试验
19、作为最后确诊;感染动物:先出现凝集反应,其次出现补体结合反应,最后出现变应。11.鼻疽伯氏菌为G-菌,即鼻疽杆菌,无芽孢,无荚膜,不运动,专性需氧;绵羊血平板:正常菌落为光滑型,异常菌落为粗糙型;氧化酶试验阳性:脲酶试验阴性;可使石蕊牛乳产酸,凝固,胨化;施特劳斯反应:雄性豚鼠腹腔感染后可引起典型的睾丸炎和睾丸周围炎,睾丸肿胀化脓后破溃;毒力因子:荚膜多糖;诊断:用鼻疽菌素3-4滴滴入一侧眼结膜囊内,其眼结膜红肿并排出脓性分泌物,为阳性。12.支气管败血波氏杆菌为G-菌,小杆菌,无芽孢,兼性厌氧,融酶阳性;牛血平板:0.5-1mm,圆形,光滑,边缘整齐的菌落;麦康凯平板:菌落为兰灰色,周边有红
20、色环,培养基为琥珀色;最有代表性的是:犬传染性气管支气管炎(幼犬窝咳),兔传染性鼻炎;毒力因子:黏附素,毒素;诊断猪萎鼻:用试管凝集试验,1:80以上为阳性。13.产单核细胞李氏杆菌为G+菌,无芽孢,4时可繁殖,是冷藏食品主要病原菌之一;短杆菌,无芽孢,无荚膜,兼性厌氧;血平板中:为露滴状小菌落,呈B溶血,45斜射光线下关察,可见淡兰绿色荧光,(与猪丹毒相区别);临诊症状:败血,神经症,流产;诊断:动物试验:菌株分离培养制成悬混液小鼠腹腔注射观察死亡情况。14.炭疽芽孢杆菌为G+菌,是菌体最大的细菌,菌体两端平切,呈竹节状长链排列,无鞭毛,不运动;在机体内形成荚膜,不易形成芽孢;在人工培养或外
21、界环境或尸体被剖解后,易形成芽孢;普通琼脂平板:灰白,干燥,无光泽,不透明,边缘不整齐的粗糙型菌落;血琼脂平板:轻微溶血;肉汤中:成团的沉淀生长,无菌膜;青霉素培养基中:菌体形成串珠;毒力因子:荚膜,炭疽毒素;15.拟幼虫芽孢杆菌为G+菌,是美洲幼虫腐臭病病原;菌落为乳白,半透明,稍凸起,略具光泽;能发酵葡萄糖,产酸,能还原NO3为NO2-细菌培养物中可见到螺旋形的“巨鞭”。(16)产气荚膜梭菌即魏氏梭菌或产气荚膜杆菌;为细菌,直杆状,无鞭毛;芽孢位于菌体中央;创伤组织中形荚膜。牛乳培养基中:形成汹涌发酵;血平板上:形成双层溶环;毒力因子:外毒素、侵袭性酶;鉴定要点:厌氧生长、菌落整体、生长快
22、、G+粗杆菌、不运动、双层溶血环、牛奶汹涌发酵 、鸽胸肌注射后死亡。(17)牛分支杆菌(结核病)为G+菌,短而粗,专性需氧;抗酸,染色为红色或从杆菌。低于30度,或高于42度不生长;罗杰二氏培养基:粗糙、隆起、不透明、连缘不整齐、颗粒状、乳白色菌落;为细胞内寄生菌;结核菌素试验:即注射后,牛颈部皮肤肿胀厚度差大于4mm为阳性;但不能证明目前是否处于活动感染期。诊断:检测特异性抗体可确诊,抗体阳性意味着病情恶化。(18)、牛副结核分支菌(副结核病)为G+菌,无鞭毛、无荚膜、无芽孢、抗酸染色为红色。为专性需氧菌;初次分离难;子牛最易感;为胞内生长菌;在体内先产生细胞免疫,再体液免疫。确诊:抗酸染色
23、发现红色成丝的两端钝圆的中小杆菌。抗体检测:可用补体结合反应 (采用冷感作法,被检血1:10稀释时“+”以上为阳性)。(19)、猪痢短螺旋体为G菌,菌体为24个弯曲,两端尖锐;严格厌氧;牛血清培养基:扁平、半透明、针尖状、强溶血性菌落;症状:出血性猪痢疾(814),大肠卡他,出血、坏死;确诊:新鲜粪便(粘)黏液,经姬姆萨氏染色;镜检每个高倍视野见23个蛇样运动的螺旋体;(20)、鸡毒支原体为G菌,为球形,细胞端有“小泡”极体;兼性厌氧;牛心浸出液培养基:0.20.3mm,圆形露滴样小菌落;又名禽败血支原体,可垂直传播;缕发感染大肠杆菌时的特征病变:肝包膜炎、心包炎、气囊炎;确诊:支原体抗体阳性
24、。(21)猪肺炎支原体为为G-菌,可通过0.3mm孔经滤膜;兼性厌氧;易引起幼猪的地方流行性肺炎;诊断:X线检查具有重要诊断价值。(22)牛支原体为G菌,引起牛传染性胸膜肺炎,即牛肺疫;菌落呈“荷包蛋状”;小菌落型SC:分离自牛;大菌落型LC:分离自山羊。(23)白僵菌为“家蚕白僵菌病”病原;为真菌;发育同期:分子孢子营养菌丝气生菌丝病蚕血液或尸体可见大量菱形结晶。(24)、蜜蜂球囊菌变种为蜜蜂白晋病病原;为真菌;阳性菌丝形成受精突;阴性菌丝形成产囊体。子囊孢子临近成熟时子囊壁消失,多个孢子被共同的外膜包围,集合成紧密的孢子球。六、病毒基本特征1.病毒:最小的微生物;最大的病毒为痘病毒;最小的病毒为圆环病毒.2.病毒结构病毒结构核衣壳(裸病毒)芯髓由核酸组成衣壳由蛋白组成;能保护核酸;具有抗原性;分为螺旋对称,20面体对称复合对称。囊膜从宿主获得;含蛋白质、磷脂、胆固醇;用脂溶剂乙醚可除去脂质,使病毒失活。纤突由糖蛋白组成,与病毒吸附细胞受体有关。3、实验动物、鸡胚、细胞可用于病
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