自体非神经组织移植修复面神经缺损的实验研究

1、    自体非神经组织移植修复面神经缺损 的实验研究*        摘要为探讨以自体非神经组织移植修复面神经缺损的可行法，采用自体变性骨骼肌和静脉修复兔面神经上颊支8 mm缺损，术后20周面神经缺损均获修复，再生神经形态和电传导功能与自体神经移植组比较差异无显著性。表明非神经组织可有效地引导神经再生并修复面神经缺损。提示该方法具有临床应用价值。关键词神经修复面神经缺损大白兔肌肉静脉 Facial nerve regeneration through autolog

2、ous non-nerve graftsHuang XiaowenHua QingquanTao Zezhanget al(Department of Otolaryngology,Head and Neck Surgery,the First AffiliatedHospital of Hubei Medical University,Wuhan 430060)AbstractThis study investigated the rabbits facial nevre regeneration over a 8 mm transectional gap of the bucal bran

3、ches through autologous degenerated skeletal muscle and autologous vein respectively.At 20 weeks following the implantation of the mentioned non-neural materials,all the nerve defects of the experimented animals were repaired.In the electrophysiologic indices and morphometeric analysis,the differenc

4、es between the respective experimental group and the nerve autografts group had no statistical significance.The results indicated that the non-neural tissues could guide facial nerve regenerating affectively,which suggested that they can be clinically practicable.Key wordsTransplantation nerveFacial

5、 nerve regenerationRabbitMuscle Vein自体神经移植是面神经缺损常用而又有效的修复方法。但自体神经修复面神经缺损有其缺点和局限性1，2，如可造成供区感觉障碍，供受体神经的直径不相匹配，供体神经来源有限或因术前放疗、外伤或肿瘤侵犯，而使供体神经无法利用，故其应用受到限制。新近，我们采用自体变性骨骼肌和静脉两种非神经组织修复兔面神经缺损，获得初步成功。报告如下。1材料与方法1.1材料选择择健康成年大耳白兔，体重23 kg，雌雄不拘。随机分为3组：A，B组动物各8只。A组以自体变性骨骼肌修复；B组以自体静脉修复。C组动物6只。行自体神经移植修复。1.2手术方法动物全麻

6、后，无菌条件下暴露左侧面神经上颊支，切除上颊支神经干6 mm，任其回缩造成8 mm缺损。A组先于胸锁乳突肌前缘顺肌纤维方向切取长约12 mm、直径4 mm之肌条，置液氮中冷冻5 min，取出后在生理盐水中常温下自然解冻2，再修剪成长约8 mm、直径2 mm肌移植体。将其置于上颊支神经缺损处，神经外膜与肌膜间以10/0丝线缝合固定46针。B组切取长约1.2 cm面静脉，清除血液及凝血后套接上颊支神经缺损，神经残端间距8 mm，静脉壁与神经外膜间同上法缝合固定。C组将切下之神经小段两端颠倒，回置于上颊支缺损处，神经外膜缝合固定。术后动物分笼喂养。1.3观察方法术后20周，循原切口切开，分离出上颊支

7、神经，进行有关检查。电生理检查：用日产MEM-3202型肌电仪，分别记录面肌复合动物电位(cAMP)，神经干动作电位(NAP)，跨移植段再生神经的神经传导速度(NCV)。测量cMAP，NAP振幅(峰峰值)，NAP经IBAS像处理系统处理得到振幅积分值(NAPA)。形态学观察：切取上颊支神经，以10%甲醛固定，Bielschowsky镀银染色，石蜡包埋，连续切片，HE复染，观察神经再生情况。部分标本作超薄切片，电镜(H 600型)观察再生神经超微结构。像处理：正常神经(右侧上颊支)及各组动物移植段再生神经各取10张切片，IBAS像处理系统测出切片内神经纤维总数。然后在ABC三组切片中，每组随机测

8、量20条有髓神经纤维的髓鞘厚度、纤维直径及轴突直径。统计数据资料以表示。2结果术后20周，各组动物均能记录到典型的NAP及cMAP形。A，B组各项指标与C组之间差异无统计学意义(表1)。表13组电生理测值比较组别例数NCV(m/s)NAP(V)NAPA(V,ms)cMAP(mV)A839.27±10.92386±89486±2793.82±1.87B740.33±8.93409±127537±1594.62±1.17C640.67±10.47556±158654±2724.64

9、7;1.16B组1只动物再生神经极度缩窄故未计入。F检验，A，B组与C组比较均P0.05 形态学观察：A组：再生神经直径与远、近侧段神经相当，无神经瘤形成。再生纤维多已成束，但形态不规则，部分轴突呈芽状，束间新生血管较少。再生纤维髓鞘发育稍差，但已能见到典型的髓鞘板层结构，轴浆内细胞器较少(1)。B组：再生神经肉眼观与C组相似，无神经瘤。多数切片见再生纤维成束，髓鞘发育较好，束间新生血管较多。神经纤维平滑通过远近两吻合处。再生纤维以有髓纤维为主，髓鞘板层明暗相间，结构清晰，轴浆内细胞器丰富(2)。像处理情况见表2，3。3讨论Ide等(1983)报道，雪旺细胞及其基底膜是神经再生微环境中的两大要

10、素，雪旺细胞基底膜对神经纤维的再生起引导作用。研究表2各组再生神经纤维数及恢复率比较(n=10)组别神经纤维(条)恢复率(%)A2214±83168.1±5.37B2559±168378.7±9.25C2658±129581.7±8.49F检验，组间比较均P0.05。本实验测量正常面神经上颊支神经纤维数为3 253±1 564条 表3各组再生神经纤维测值比较(n=20)m组别纤维直径轴突直径髓鞘厚度A4.01±0.882.18±0.670.51±0.25B4.90±0.772.89&#

11、177;0.430.82±0.28C4.53±0.722.59±0.410.79±0.17q检验，AB，AC均P0.05，BC则P0.05表明，骨骼肌基膜(the muscle basement membrane)在化学组成及基质定位上与雪旺细胞基底膜十分相似，具有引导神经再生的功能2。Glasby (1986)的研究进一步显示，带蒂的骨骼肌和新鲜游离的骨骼肌中活的肌细胞存在，可阻碍再生纤维通过，不利于神经再生。Glasby等2、Fawcett (1986)和Kenynes等(1984)先后采用经过变性处理的骨骼肌修复神经缺损，发现变性肌浆被吞噬清除后，

12、留下丰富的肌基膜能更好地促进再生纤维通过，再生轴突可以在基膜管中髓鞘化并沿神经远端生长。本实验采用冻融变性的自体骨骼肌移植修复兔面神经上颊支8 mm缺损，术后20周形态学及电生理检查结果显示神经结构与功能的部分恢复。部分再生神经组织象较神经移植组差，髓鞘成熟不良，可能是由于变性骨骼肌血供差并缺乏雪旺细胞之故；神经再生时间不够长，亦可导致观察到的结果不够理想。作为神经导管引导神经再生的生物膜管，具有与雪旺细胞基底膜相似的基底膜，并含有层粘连蛋白，纤维粘连蛋白及胶原等是能促进轴突再生的物质3。同时，生物膜管套接神经残端后，中间留下的三维空间类似于人工硅胶再生室，使近端神经能向远端同源神经选择性、定

13、向性再生。本实验采用自体面静脉套接修复面神经缺损，术后20周神经形态和功能恢复与神经移植对照组相似，结果与文献4报道基本一致，表明静脉管引导神经再生的效果确切、可靠。静脉壁在一定时期内可阻挡周围组织侵入新生神经，同时周围营养可透过静脉壁向内扩散；静脉管腔能容纳远端神经分泌产生的各种营养因子，三维管腔有利于神经的趋向再生；但静脉管壁易塌陷或撕裂，使管腔狭窄或破坏。国内有学者用在管内填塞少量骨骼肌纤维的静脉来桥接周围神经缺损，可解决管壁塌陷的问题。本文资料表明，自体非神经组织在面神经损伤修复中具有较好的效果，但将其应用于临床还有待进行更多的观察。 1A组再生神经超微结构2B组再生升经超微结构参考文献1Specter JG,Lee P,Peterein J,et al.Facial nerve regeneration through autologous nerve gafts.Laryngoscope,1991,101:5372Glasby MA,Mountain RE,Murray JAM.Repair of the facial nerve using freeze-thawed muscle autografts.Arch Otolaryngol Head Neck Surg,1993,