春兰内生菌的分离及其在种苗生产上的应用

1、江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目申请表项目名称春兰内生菌的分离及其在种苗生产上的应用项目所属一级专业门农林牧渔项目所属二级专业类农业技术项目类型（） 个人项目 （） 团队项目项目实施时间起始时间： 2009年9月 完成时间： 2010年11 月申请人或申请团队姓名年级学校所在院系、专业联系电话E-mail主持人丁云三南通农业职业技术学院园艺/日语吴承东一南通农业职业技术学院植物保护成 员胡长婷二南通农业职业技术学院园林工程王文娟一南通农业职业技术学院植物保护成谊新一南通农业职业技术学院植物保护杨晓雪一南通农业职业技术学院植物保护导 师姓名吴雯雯，陈锦坤年龄26，44单位南通农业职业技术

2、学院行政职务/专业技术职务讲师，教授主要成果吴雯雯，2008年毕业于扬州大学农学院作物遗传育种专业，2008年-2009年参与学院植物组织培养技术项目课程的建设与实施，2008年指导的学生创新作品生态水生鸢尾苗获得南通市第二届职业教育创新大赛一等奖，并获得江苏省比赛二等奖。陈锦坤：1、近5年来承担的技术研发项目或技术服务及效果课 题 名 称来 源年限作用效果甲壳素及其衍生物在农业和环保上的应用南通市科技局1999-2002主持好牧草的引种与适应性研究南通市科技局1999-2003主持好专用高蛋白大豆的引进及其优质高产标准化南通市科技局2001-2004主持好2、在国内外公开发行刊物上发表的相关

3、论文论文、论著题目刊物名称发表时间署名次序NP配比对专用高蛋白大豆产量和品质的调节效应大豆科学2006年第2期第一作者播期对专用高蛋白大豆产量和品质的调节效应大豆科学2007年第1期第一作者“作物栽培环境”教材江苏科学技术出版社2007年2月主编3、获得的表彰/奖励或获得的专利奖项名称授予单位时间“外向型万亩蔬菜园区建设江苏省农林厅农业科技进步三等奖南通市农业科技推广三等奖”省农林厅市政府1999年一、申请理由（包括自身具备的知识条件、自己的特长、兴趣、已有的实践创新成果等）春兰以其色雅、味甜、形美、气清而深受人们的青睐，江浙等地已将此作为产业化发展和经济增长的重要支撑点。春兰一般散生或片生于

4、海拔600 -1800 m的自然林缘地带，也有生长在海拔300-600 m的山间溪谷，如浙江的四明山、杭州的五云山等低海拔山区均有名种产出，其中春兰皇后“绿云”就出于杭州的五云山。春兰所生长的局部环境往往要在散射光充足，湿度较大、遮光率40-50的沟边竹林或次生林丛种，而太阴或阳光直射的林地则少有生长。从春兰的数量和品质上来说，浙江、江苏为盛产区，而江苏尤以南通出名，现种植品种有70多个。据资料记载，我国1978年以前发现、培育的春兰有近300种，目前，在浙江杭州、绍兴、余姚、宁波等地，通过兰友引种、栽培和市场流通的春兰新种约有200多种。然而真正好的兰花由于数量的限制，一直是达官贵人们的玩物

5、，普通老百姓虽然喜爱兰花，面对高昂的价格，也只能望兰兴叹。随着现代科学技术的发展，运用科学栽培管理技术养兰花，提高了兰花的自然繁殖率，使得更多的人可以在家里欣赏到自己喜爱的兰花，尤其是现代生物技术的发展，兰花的组织培养获得成功，组培苗的商品化生产和推广，使名贵兰花走进寻常百姓家成为可能。春兰组培虽然能大量繁殖，但移栽后的组培苗成活率低，生长缓慢，开花延迟，花小甚至不开花。其原因是兰根中不形成菌根结构，菌根真菌不能为兰花的生长提供所需的营养物质。组培苗菌根化是促进春兰快速繁殖的重要技术，也是解决濒危兰花资源人工栽培的关键。因此，开展内生菌在春兰栽培上的应用，探索利用兰科内生菌根真菌促进地生兰生长

6、发育的方法，可提高春兰组培苗的成活率，为解决兰科珍贵花卉人工栽培提供理论依据，也使得本项研究具有一定的挑战性。我们研究小组由6人组成，都是生物工程系的学生，其中1人为双专科三年级的学生,1人为在校二年级学生，4人为在校一年级学生。6个人平时对搞小科研都比较感兴趣，跟老师接触也比较多，因而对有老师指导的科研活动比较喜欢，我们决心将这次科研活动搞好，圆满完成这次实践创新训练任务。二、项目方案（包括项目的训练目标、前期准备、组织实施、过程管理、实践环节、教师指导、项目结题等）本项研究我们准备分两步进行，第一步是春兰内生菌的分离筛选。这项工作的进行，首先通过对兰花根际及其土壤微生物的培养，分离出若干微

7、生物种类，然后将已分离出的微生物与春兰组培苗根系共生，筛选出适合于春兰根系共生的菌株。 第二步是内生菌在春兰栽培上的应用。我们通过对春兰根系共生菌进行生物学鉴定，确定该菌株的结构、生长、繁殖条件，并进行大量繁殖。然后系统研究组培苗接种内生菌对春兰生长发育的影响，内容包括内生菌对春兰养分、水分吸收、呼吸作用、干物质积累等方面的影响。三、学校提供条件（包括项目开展所需的实验实训情况、配套经费、相关扶持政策等）我们都是高等职业技术学院的学生，分别来自生物工程系的园艺和植保专业，其中4人为在校一年级的学生，1人为在校二年纪的学生，1人为双专科三年级的学生。我们的指导老师具有教授职称。大家对于科研都很有

8、热情，也经常帮助老师做实验，尤其对微生物和园艺类的试验很感兴趣，所以大家申报这次的科研课题。我们系的植物组织培养室有30多人可以同时操作的配制培养基的准备室、8台超净工作台16人同时操作的无菌操作室和年产30万苗的培养室。实验室中配备了全自动的和手提式的高压灭菌器、摇床、光温培养箱等先进设备。该实验室已成为南通市生物技术重点实验室以及江苏省教育厅园艺实训基地的重要组成部分。我们系的组培苗栽培基地拥有1000 m2的智能温室和7000 m2的连栋大棚，配置了全自动热风加温机、水帘、鼓风机、上喷系统和滴灌系统、施肥器、发芽车、种植床和运输工具等，能保证科研的正常进行。而且我们系自1998年以来已从

9、事组织培养技术研究10多年，已经成功培养过大花惠兰、非洲菊、水生鸢尾、金边丝兰、满天星等10多种植物的组培苗，技术力量完全可以承担本课题中的春兰组培苗的培养。在科技管理能力方面，本校5年前就专门设立了科技管理处。科技管理处负责课题信息的传达、课题的申报与审批、课题的实施管理、课题经费的管理、课题参加人员的协调等方面的工作，管理公开、规范，管理能力优秀。 四、预期成果我们想针对移栽后的组培苗成活率低、开花能力不强的根本原因是兰根中不形成菌根结构的这一特性，分离、筛选出对兰苗生长有促进作用的菌株至少1个，并进行大量繁殖，从而对春兰达到快速繁殖的目的， 获得示范栽培春兰组培苗50盆。五、经费预算能源材料0.4万；试剂消耗0.2万；其它费用0.4万，共计1万。六、导师推荐意见整个科研周期不是很长，满足学生在校期间基本能够完成课题任务。由于花费时间不是很多，对学生的业余时间也没有造成太大冲击，