口蹄疫疫苗的研究进展.docx

1、口蹄疫疫苗的研究进展赵文仕卜杨继生2肖建忠I和丽春3王向菊4李寿春4(1,云南省香格里拉县富牧兽医局饲料草山站674400；2,云南省香格里拉县育牧兽医局重大动物疫病办674400；3,云南省香格里拉县窗牧兽医局动物卫生监督检验所674400；4,云南省维西县白济讯乡农业综合服务站674603；5,云南省香格里拉县畜牧兽医局畜牧改良站674400)摘要：口蹄疫(Foot-and-mouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的一种高度烈姓接触桂传染病，主要危害猪、牛、羊、骆鸵等偶蹄动物。其特点是发病率高，死亡率低，传播速度快，能给盲牧业生产带来重大经济损失，因此，拱准各地区口

2、蹄疫病#流行血清型和越势，采取积极有效的免疫预防注射工作成为口玷疫防控的首要任务。本文结合目筑口玲疫疫苗的动态信息，对口玲疫疫苗研完进展进行了嫁述。关键词：口降疫；疫苗；研究进展；综述口瞄疫病毒(Foot-and-MouthDiseaseVims,FMDV)属于小RNA病毒科，口蹄疫病毒属。FMDV分为0、A、C、AsiakSAT1、SAT2和SAT3共7个血清型，型间无交叉免疫反应。根据不同国家的流行病学情况，FMDV疫苗常常包含不同血清型的疫苗毒株。南亚国家是三价疫苗，包含0、A、Asia1三种血清型，而南美国家使用0、A、C型三价病毒疫苗；在东南亚使用最普遍的疫苗是0型病毒的单价疫苗。中

3、东最常用的疫苗株是A22伊拉克A、伊朗1996和A伊朗1999,南美最好的疫苗株是A24巴西。SAT型疫苗主要是SAT1和SAT2二价苗或是SAT1、SAT2和SAT3三价苗，在非洲，人们很少使用SAT单价苗。目前，大多数流行口稀疫的国家采取以常规疫苗免疫为主的预防措施。随着现代分子生物学技术的发展，FMD疫苗的研制不断得到改进，在借鉴传统疫苗研究的基础上，新型疫苗得到进一步发展，为有效预防和控制FMD的发生奖定了坚实的技术支搽。1常规疫苗1.1弱毒疫苗FMD弱毒疫苗是把原始毒通过豚鼠(乳鼠)、鸡胚、细作者简介(*)：起文仕(1970年-),男，健健族，云南省普格里拉县人，大学本对，善反炸，主

4、要从事草电监剥、草原监理及盲牧北科技推广工作。但是并未排除体外的情况。比如子宫颈逼锁而胎儿死后因为它的组织上水分被子宫吸收从而变得体积缩小、表面干燥的干尸。像这种我们称作胎儿的干尸化。这一情况根据妊娠的现象逐渐消退，但是不发情，到了妊娠期也不分娩。3流产的预防预处理(1) 加强对母牛的饲养管理，按照严格的要求补给质量过关的饲料，应当做适当的运动，在运动期间不能太过剧烈，增强母牛的抵抗力和身体素质，从而减少母牛流产的现象。(2) 经常检查母牛的身体情况，确保在妊娠期间没有任何的病症。如有发现病症及时就医以确保胎儿的安全及安全的分娩。经常检查母牛全身以及生殖器官的状态、胎儿、胎衣、胎盘有没有异常的

5、现象。有必要的时候无菌采取胎衣的水肿也是必不可少的，方便能够及时做出有效地治疗和预防。(3)当胎儿干尸化时，可以肌肉注射前列烯即0.6mg,使子宫颈扩张，从而增强子宫收缩，然后再注射10mg垂体后叶素。在子宫颈开始扩张的时候，可以用手指把宫颈扩大，往里面注入温度适中的肥皂水，从而把胎儿取出来。奉考文敏：1 谢英.奶牛流产的原因分析以及防治方法少.养殖技术麻何.2012,12(3):118.2 刘忠缥，张翠牢，等.牛渔户的原因以及对策J.农民致富之友，2010,28(12):16-17.畜业技术页疏育繁胞连续传代驯化或人工诱变的途径获得人为的减本（致弱）毒株，经接种制苗材料，大量扩增病毒后感染组

6、织培养物，加入一定的保护剂和佐剂制成的病毒制剂。国外研究表明FMDV毒力可以被致弱。而我国在20世纪80年代培育出温度敏感毒株，并培育了0型OP4细胞培养弱毒疫苗。但病毒对一种动物的减莓并不能保证对其他动物减毒，且由于新的亚型不断出现及毒株致弱结果和致弱时间都不能确定。1964年欧洲口蹄疫防治委员会决定欧洲国家不用弱毒疫苗免疫，停止了弱毒疫苗的研究。目前世界许多国家和地区在FMD的防治中都采用灭活疫苗。1.2天活疫苗常规灭活疫苗是经一系列试驶动物选择的田间毒株经病毒培养系统大危扩增获得的病毒制备物，灭活剂处理后添加佐剂制成的-类生物制品。1925年Belin首次用甲醛灭活牛舌皮组织病料制成了灭

7、活疫苗；1966年Lapstich和Telling等应用乳仓就肾传代细胞（BHK.21）深层悬浮培养法制备门蹄疫疫苗，可大髭培养细胞、增殖病毒和制造疫苗。现在大多数口蹄疫灭活疫苗仍用BHK-21克隆13或IBRS-2细胞生产。目前广泛应用二乙烯亚胺（BE1）作为灭活剂。佐剂有氢级化铝胶、皂素、弗氏不完全佐剂、油包水乳剂等。有学者用分枝杆菌细胞壁的可溶性部分、合成硫辛酰胺、Avridine等作佐剂生产FMDV油佐剂灭活疫苗，可以降低抗原的用量，同时增强FMDV的细胞免疫应答。灭活疫苗的缺点是热稳定性差，需要低温保存，免疫持续期短，抗病毒潜有限，不能区分注射疫苗动物和自然感染动物，同时存在病毒灭活

8、不彻底而散毒的可能性。2新型疫苗2.1病毒栽体疫苗以病毒为载体的新型疫苗成为了基因T程的研究热点之一，病毒重组活栽体疫苗可被视为减毒活疫苗和亚单位蛋向质疫苗的结合，它既可以避免亚单位疫苗需要佐剂和多次接种注射的缺点，又可以诱导全面而持久的免疫反应。可作为减毒活疫苗的病毒载体有痘苗病密、腺病毒、杆状病密、脊便灰质炎病毒和单纯疱疹病毒等，目前已用于FMD疫苗研究的载体主要有痘病毒、腺病毒和杆状病盘载体等。（1）FMDV腺病毒重组活载体疫苗人腺病毒弱毒疫苗的安全有效使用，奠定了腺病毒作为载体研制的基础。第一代腺病毒栽体起于20世纪80年代初，至今腺病毒载体已经经历了4代发展。DuY等腺病毒载体构建了

9、VP1基因和VP1主要抗原表位分别与巨噬细胞集落剌激因子共表达的重组活载体疫rAd-GMCSF-VPe和rAd-GMCSF-VPl,研究结果表明两种疫苗均能诱导机体产生较高水平的FMDV特异性T淋巴细胞增殖反应、IFN-gamma和1L-4,而且rAd-GMCSF-VPe和rAd-GMCSF-VPl均能对猪和豚鼠产生攻涯保护。（2）FMDV痘病症近组活载体疫苗痘苗病毒载体是研究最早和最成功的病毒载体之-。痘苗病毒具有宿主范围广、增殖滴度高、稳定性好、基因组容址大、含多个非必需区等优点，有利于进行基因T程操作和适于插入多个外源基因旦抗原性稳定、免疫原性持久，能够同时诱发体液和细胞免疫，相对安全。

10、Berinstein以痘苗病毒为载体构建了表达FMDVC3Arg85株衣充蜀白前体P1基因的取组FMDV疫苗，免疫后凹检测到高水平的FMDV和痘苗病毒的中和抗体,类似于灭活疫苗免疫所产生的抗体水平。有人采用金丝雀痘病毒为载体表达FMDV的VP1,其表达效率要比以疔苗病毒为载体高出100倍，具有曲好的应用前景。此外，鸡痘病宓表达载体具有安全、高效、外源基因容量大，宿主范阐较小等优点，为疫苗的研究提供了可能，具有很好的发展前景C（3）FMDV伪狂犬病毒栽体改组活载体疫苗伪“犬病毒载体就是通过基因程技术使伪狂犬病毒载体中的毒力基因失活，使病毒的毒力减弱，但病毒粒子仍然保持良好的抗原性，能够有效地刺激

11、机体产生免疫应答。Ya。Q等用伪狂犬病毒载体构建了共表达0型FMDV的P12A3C基因的重组活载体疫苗，并与用P12A3C构建的DNA疫苗免疫效果进行了比较，结果表明，FMDV伪狂犬病毒收组活载体疫苗能诱导较高的抗体水平，对豚就的攻毒可完仝保护，而DNA疫苗抗体水平较低，对豚鼠的攻毒只能部分保护C2.2核酸疫苗DNA疫苗是指那些注入动物体内后能够诱导机体产生免疫反应的病毒保护性抗原基因表达质粒。BeardC等构建了两个不同的质粒，-个质粒pP12X3C携带有FMDV衣充蛋I前体基因P1和蛋闩酶3C基因，用基因枪将该质粒接种动物可检测到特异性的体液反应。第2个DNA质粒pWRMHX.携带有编码完

12、整病毒的基因组（但明除了其细胞结合位点），用该质粒接种猪后可以产生病毒样粒子并诱导产生中和抗体。比较两种质粒pP12X3C和pWRMHX接种猪后的效果结果显示，携带有夏制病毒基因组的质粒DNA可以产生较强的免疫力，应用pWRMHX经肌肉注射、鼻内接种和基因枪途径接种的猪均对强毒攻击产生部分保护力。ChanEW等构建pCEIM和pCEIS两个质粒，它们分别含有FMDV的VP1基因的主要抗原位点（貌基酸残基的第141位160位和200位213位套基酸）和鼠及猪的免疫球蛋月基因。用它们分别接种小W（腹部皮卜-）和猪（耳背部皮下），施者可剌激小鼠产生特异性的T淋巴细胞增生和中和抗体。后者两次免疫的猪也

13、出现T淋巴细胞增生（SI可达8.1）,并产生高效价的中和抗体。在攻毒实验中，应用pCEIS进行免疫的猪可百分之百的保护。MaMingxiao等在总结国内外学者研究的基础上，利用FMDV2A蛋白自身裂解性和双启动真核表达载体，构建了FMDVP1-2A、猪IL-18和FMDV3C共表达的核酸疫苗PVIR-P12A1L18-3C和不携带猪IL-18的核酸疫苗pVIR-P12A-3C,研究结果表明，两个核酸苗均对同源FMDV对猪的攻毒具有很好的保护性，且携带有猪IL-18基因的核酸苗免疫效果优于不携帝猪IL-18的核酸疫苗。2.3亚单位疫苗与合成肽疫苗FMDV的结构俄白主要由VP1、VP2、VP3和V

14、P4组成，其中VP1是诱导机体产生免疫反应的主要结构蛋白。Vasan-tha等用脂质体包裹0型和Asia1型FMDV的VP1制备亚单位疫苗，免疫豚鼠产生了高水平的中和抗体，小规模的田间试验也取得了比较好的效果。Kield等应用重组DNA技术首次在大肠埃希菌中表达了口蹄疫病毒主要保护性抗原VPloHuang等则用含有半乳精吾酶和一个完整的FMDVVP1蛋白主要抗原决定簇的重组融合蛋白接种豚鼠和猪，可以产生特异性的中和抗体，起到有效的保护作用。Bitlie根据口蹄疫病毒01型VP1氨基酸序列分析资料，化学合成了140-160段氮基酸与载体蛋白偶联，能诱导保护豚鼠的中和抗体。Di-marvh用合成的

15、01K病毒VP1的141-158段和200-213段基基酸组成40个氨基酸短肽，在其中间加上两个脯敏酸和一个丝氨酸使多肽拆成立体构型，大大提高了单段肽在豚鼠的应答水平，并提出了VPI殁基端氨基酸在提高保护应答中的重要性°这些亚单位疫苗与合成肽疫苗的免疫原性均基于它们能递呈VP1蛋白G-H环上的关健的抗原表位。Taboga等应用138头牛进行4种合成肽疫苗的效果检测。结果表明各免疫组虽可产生相应的免疫反应，甚至高水平的中和抗体，但它们对免疫动物的攻毒保护率没有一个在40%以上。2.4表位疫苗研究表明，。型FMDV衣壳表面至少有5个抗原位点，其中位于VP1140-160位氨基酸处的A位点

16、和位于VP1C端200-213位敏基酸C位点是两个B细胞表位能修诱导机体产生特异的FMDV中和抗体；Asial型FMDV抗原位点与0型FMDV相似；C型FMDV有4个抗原位点，A型FMDV抗原位点的命名和定位比较混乱，利用A10的单克隆抗体反应把A型FMDV的抗原位点分为4组。ZhangHong-ying等对FMDV5个主要抗原表位和VP1上的T细胞表位，通过不同组合构建5种DNA疫苗，通过对免疫原性研究表明，含有T细胞表位和抗原位点1,5的DNA疫苗免疫效果好于其他组合的DNA疫苗。另外，为了增强FMDVB细胞表位的免疫原性，Winther和YahongHuang等先后将B细胞表位与乙型肝炎

17、病毒（HBV）核蛋白融合表达，形成病毒样粒子，构建DNA疫苗或转染烟草构建了转基因植物多表位疫苗。Marchi等以钥孔虫戚血兰素作为骨架与B细胞表位融合表达，构建FMDV表位疫苗，通过对豚鼠、牛和猪的动物攻毒实验均表现出了良好的保护性。马鸣浦等人利用计算机软件模拟分析，对。型、A型和Asial型FMDV优势抗原表位进行了分子设计，先后构建了0型、A型和Asial型FMDV复合多表位DNA疫苗和鸡痘病毒重组活栽体疫苗。2.5空衣充亚单位疫苗Mayr等构建了表达A12型FMDV衣壳蛋白和3C蛋白酶的复制缺陷眼腺病毒载体Ad5-FMDVO免疫猪产生了特异性中和抗体，5/6免疫猪获得了攻毒保护，没有获

18、得保护的猪症状与对照组相比也比较轻。随后，Moraes等构建了表达A24型FMDV空衣壳粒子的重组腺病危，用比以前高10倍的免疫剂扯一次免疫猪，可诱导中和抗体产生，在免疫7d、144和42d后攻毒，所有免疫猪都可得到保护。卢曾军等构建了表达0型FMDV空衣壳的复制缺陷型重组腺病毒Ad-P12x3C,免疫豚鼠25d后，用同源病毒攻毒，所有豚鼠都获得保护；猪免疫28d后攻毒，3/4猪获得完全保护。综上所述，重组腺病毒载体疫苗能够在动物体内很好的表达FMDV的空衣壳结构，对猪的免疫效果要好于对牛的免疫效果，说明重组腺病毒在两种动物体内的作用方式不同。腺病毒载体疫苗还需要在提高空衣壳的表达量和延长表达的时间这两方面进行改进。也有用牛痕病毒、禽痘病毒、以及伪狂犬病毒为载体表达FMDV空衣壳的研究。但由于空衣壳的表达量太低，需要免疫23次才能产生FMDV特异性中和抗体，攻毒保护效果也不理想。李志勇等构建了含有Asial/HNK/CHA/05FMDVP1-2A和3C编码区的重组体家蚕杆状病毒