6苛养菌分离鉴定与药敏周庭银

1、第二军医大学长征医院第二军医大学长征医院 周庭银周庭银 乏氧菌属乏氧菌属颗粒链菌属颗粒链菌属心杆菌属心杆菌属放线杆菌属放线杆菌属弗朗菌属弗朗菌属二氧化碳嗜纤维菌二氧化碳嗜纤维菌嗜血杆菌属嗜血杆菌属布鲁菌属布鲁菌属 什么叫苛养菌？ 营养要求高、生长缓慢（数日甚至数周） 苛养菌包括哪些？ “HACEK”细菌群及其它 “H”嗜血杆菌属 （Haemophilus）、“A”凝聚杆菌属（Aggregatibacter）、“C”心杆菌属（Cardiobacterium）、“E”艾肯菌属（Eikenella）、“K”金氏杆菌属（Kimgella） 其它：布鲁菌属 、巴斯德菌属 、西丝菌属 、阿菲波菌属 、鲍特

2、菌属 、加特纳菌属 、军团菌属 、巴尔通体属 、链杆菌属、萨顿菌属等。一 如何发现血培养中的苛养菌株如何发现血培养中的苛养菌株（一）仪器报警：（一）仪器报警：1.涂片查见细菌，平板不生长。2.革兰染色涂片未查见细菌，转种平板，24h不生长,认为是假阳性？3.涂片查见细菌，平板生长，常规法不能鉴定。1. 1. 血培养瓶涂片查见细菌，平板不生长。血培养瓶涂片查见细菌，平板不生长。2. 2. 为为什么什么？ 怎么办怎么办？ 添加营养成分和特殊生长因子 血培养瓶内？多种成分血培养瓶内？多种成分 血平板只有？种成分血平板只有？种成分 某些细菌生长需要的高营养和特殊生长因子某些细菌生长需要的高营养和特殊生

3、长因子 因此？因此？需要特殊生长因子 革兰阳性球菌 维生素B6、半胱氨酸及营养成分 卫星试验 （一）仪器报警（一）仪器报警（一）仪器报警（一）仪器报警营养要求高营养要求高以上方法还不能培养出细菌以上方法还不能培养出细菌革兰阳性球菌、阴性杆菌未使用过血培养瓶肉汤XXml,琼脂粉， 加入1ml羊血或人血 ？ 制成平板 血流感染实验诊断与临床诊治第三版2014.5P173(三)血培养瓶阳性报警革兰染色涂片找不到细菌，为什么？血培养瓶阳性报警革兰染色涂片找不到细菌，为什么？怎么办？怎么办？ 阳性报警，涂片阳性报警，涂片革兰染色？革兰染色？未查见细菌，转种未查见细菌，转种平板（平板（2424、4848、

4、72h72h不生长），是否不生长），是否假阳性假阳性（一）仪器报警（一）仪器报警 因为某些细菌与细胞残渣因为某些细菌与细胞残渣？混在一起，不易辨别，混在一起，不易辨别， 如果血培养阳性报警（如果血培养阳性报警（两张两张）革兰染色未查见细菌，）革兰染色未查见细菌，用瑞氏染色用瑞氏染色？血流感染实验诊断与临床诊治第三血流感染实验诊断与临床诊治第三版版2014.52014.5P117P117（一）仪器报警（一）仪器报警二、几种苛养菌的鉴定二、几种苛养菌的鉴定 涂片革兰染色，镜下可见革兰阳性球菌第一种菌第一种菌接种在血琼脂平板和巧克力平板上5%CO2，1824h不生长 48h仍不生长怎么办再用无菌注射

5、器从培养瓶取培养物23滴在血琼脂平板上四区划线，然后用金葡菌点种，5%CO2，35孵育1824h 上机鉴定上机鉴定？菌？菌MALDI-TOF MALDI-TOF 毗邻颗粒链菌毗邻颗粒链菌金葡菌周围细菌传代后，24h24h不需金葡点种，生长良好上机鉴定上机鉴定 毗邻颗粒链菌毗邻颗粒链菌 毗邻颗粒链菌属毗邻颗粒链菌属 毗邻颗粒链菌细长颗粒链菌副毗邻颗粒链菌豹鲸颗粒链菌1.与流感嗜血杆菌的鉴别 两者都有卫星现象”，可区别于其他触酶阴性、革兰阳性球菌。流感是革兰阴性球杆菌2.血培养瓶阳性报警后涂片见到革兰阳性球菌，？但转种血琼脂平板和巧克力平板未见细菌生长，应首先考虑乏养菌属和颗粒链菌属的感染。3.与

6、其他链球菌的鉴别某些毗邻颗粒链菌在未添加吡哆醛的普通血琼脂平板上仍然生长或不出现卫星现象，很容易被鉴定为其他链球菌,应引起注意毗邻颗粒链菌毗邻颗粒链菌小结毗邻颗粒链菌毗邻颗粒链菌 需要卫星试验不需要卫星试验 金葡菌周围的菌落24h传代后不需要金葡点种也生长良好第二种菌第二种菌血平板上的菌落特征： 5 CO2环境35培养1824h，菌落呈细小，甚至看不见24日后逐渐长大，可嵌入琼脂，有较弱的溶血环。有的菌落黏附于琼脂培养基(咬琼脂现象)。血琼脂平板上的菌落通常为灰白色、粉红色或黄色。麦康凯琼脂上不生长。48小时菌落革兰阴性、细长的杆菌？ 生化特性氧化酶试验阴性，分解葡萄糖和蔗糖，分解乳糖不定，不

7、分解木糖和蜜二糖；水解淀粉，ONPG、七叶苷阳性；硝酸盐、触酶、吲哚、赖氨酸脱羧酶和精氨酸双水解酶试验均为阴性 上机鉴定 二氧化碳嗜纤维菌属？ MALDI-TOF： 生痰二氧化碳嗜纤维菌 测序： 生痰二氧化碳嗜纤维菌 二氧化碳嗜纤维菌属二氧化碳嗜纤维菌属黄褐二氧化碳嗜纤维菌 生痰二氧化碳嗜纤维菌 牙龈二氧化碳嗜纤维菌颗粒二氧化碳嗜纤维菌溶血二氧化碳嗜纤维菌狗咬二氧化碳嗜纤维菌犬咬二氧化碳嗜纤维菌小结小结革兰阴性杆菌细长，与梭杆菌十分相似？厌氧瓶？阳性瓶涂片革兰染色不太容易找到细菌，瑞氏 在血平板上1824小时培养见不到菌落？48h属于革兰阴性苛养菌？，血平板生长，麦康凯上不生长氧化酶试验阴性，

8、分解葡萄糖，乳糖不定病例讨论：病例讨论： 杨某，女，45岁，2011.11中旬发热，体温40.5 C。11.22就诊于上海某大医院，以“发热待查”收入感染科。 血常规血常规WBCWBC：3.903.90* *109/L E109/L E：0.0% Hb:101g/L;；ESR：24mm/h；CRPCRP：22.2mg/L 22.2mg/L ； 多次血培养：未见细菌生长。脾脏明显增大脾脏明显增大,诊断为“伤寒”，静脉滴注左氧氟沙星（可乐必妥）500mg qd，1周后体温降至正常。于12月6日出院后继续口服左氧氟沙星（可乐必妥）500mg qd数日停药。讨论：讨论：1.多次血培养：未见细菌生长。

9、静滴左氧氟沙星一周后体温正常,能否确诊为”伤寒”?2.CRP:22.2mg/L,白细胞低,体温升高至40.5 C,无感冒症状,脾脏明显增大脾脏明显增大，疑似何种疾病?需要进一步做哪些检查？第三种菌第三种菌病例续病例续 ： 患者于2012.2上旬再次出现发热再次出现发热，体温41.0 C，伴大汗浸湿衣被。2.11出现右侧髋关节疼痛伴活动障碍，2.15感右上臂疼痛，可触及一包块。 2012.2.21来长征医院住院，体温体温39.239.2。WBC:5.7WBC:5.7* *109/L 109/L N：68.3% M：8.8% E：0.2%；ESR：73mm/h；CRPCRP：70.10mg/L70

10、.10mg/L。当日上午行血培养。2.25血培养仪器报警（4 4日后）日后），涂片革兰染色见图： 外院 多次血培养：未见细菌生长同时转种血平板，革兰染色。24小时未见细菌生长该如何处理？是否排除感染？是假阳性？瑞氏染色：培养48h48h后针尖样菌落，72h72h后渐增大VITEK 2 Compact微生物鉴定仪鉴定为布氏杆菌。2月27日抽血送上海市疾控中心查抗布氏杆菌抗体阳性(1:400)。给予利福平450mg+多西环素100mg 1/日，一星期后体温正常。一周后体温正常能否判断治愈？据了解该病人是上海某公司女总经理，为什么会患上布氏杆菌病？该病人最喜爱吃涮羊肉，且越嫩越生才过瘾。第四种菌第四

11、种菌外院的标本外院的标本上机鉴定为甲基杆菌（t=0.996）接种血平板，麦康凯麦康凯不长血平板用GN板条上机鉴定为甲基杆菌（t=0.996）？这个鉴定结果可信度如何？涂片形态发现与甲基杆菌不符，加做巧克力平板，生长较快。，加做巧克力平板，生长较快。24h24h培养后培养后出现很像？补做卫星现象出现很像？补做卫星现象麦康凯不长血平板用NH板条:流感嗜血杆菌MALDI-TOF鉴定:流感嗜血杆菌流感嗜血杆菌误报为甲基杆菌，为什么？由于检验人员缺乏经验，在镜下查见革兰阴性小球杆菌，没有怀疑流感嗜血杆菌、布鲁菌等细菌，仅接种血琼脂平板和麦康凯琼脂平板。（板条？（板条？NHNH） 鉴定为甲基杆菌后，没有及

12、时与临床沟通（甲基杆菌引起血流感染十分罕见）。少见菌检出后，一定要重复检验，不能完全相信机器。流感嗜血杆菌也有在血平板生长（罕见）阳性报警 规范规范 血琼脂平板、普通巧克力、麦康凯琼脂平板徐元宏 教授主任 安徽医科大学第一附属医院罗燕萍 教授主任 解放军总医院刘文恩 教授主任 中南大学湘雅医院吴文娟 教授主任 上海同济大学东方医院南院赵建宏 教授主任 河北医科大学附属二院，河北省临检中心主任魏莲花 教授主任 甘肃省人民医院张莉萍 教授主任 重庆医科大学附属第一医院赵玲莉 教授主任 青海大学附属医院徐修礼 主任技师 第四军医大学西京医院周铁丽 教授主任 温州医科大学附属第一医院医学检验中心侯铁英 主任医师 主任 广东省人民医院 刘小平 主任技师 副主任 北京大学深圳医院赵旺胜 主任技师