流式细胞仪基本原理和临床应用

1、流式细胞仪基本原理和临床应用流式细胞仪基本原理和临床应用2 流式细胞仪就是进行流式细胞分析的仪器，它集电子技术、计算机技术、激光技术、流体理论于一体，是一种非常先进的检测仪器。流式细胞仪基本原理和临床应用3流式细胞仪基本原理和临床应用4流式细胞仪的原理流式细胞仪的应用流式细胞仪的数据处理流式细胞仪基本原理和临床应用5流式细胞仪的工作原理流式细胞仪基本原理和临床应用6工作原理工作原理流式细胞仪基本原理和临床应用7流式细胞仪基本原理和临床应用8Injector TipSheath fluid流式细胞仪基本原理和临床应用9 细胞被戴上特殊的标记。所用的标记细细胞被戴上特殊的标记。所用的标记细胞的探针

2、是能够同待分选细胞表面特征性胞的探针是能够同待分选细胞表面特征性蛋白蛋白(抗原抗原)结合的抗体，而这种抗体又能结合的抗体，而这种抗体又能够同某种荧光染料结合。被结合的细胞带够同某种荧光染料结合。被结合的细胞带上了荧光标记。当稀释的细胞进入超声波上了荧光标记。当稀释的细胞进入超声波振荡器时，极稀的细胞悬浮液形成很小的振荡器时，极稀的细胞悬浮液形成很小的液滴，一个液滴中只含有一个细胞。液滴液滴，一个液滴中只含有一个细胞。液滴一旦形成并通过激光束时，激光束激发结一旦形成并通过激光束时，激光束激发结合在细胞表面抗体分子。合在细胞表面抗体分子。流式细胞仪基本原理和临床应用10流式细胞仪基本原理和临床应用

3、11流式细胞仪基本原理和临床应用12流式细胞仪基本原理和临床应用13流式细胞仪基本原理和临床应用14流式细胞仪基本原理和临床应用15流式细胞仪基本原理和临床应用16FALS SensorLaser流式细胞仪基本原理和临床应用17FALS Sensor90LS SensorLaser流式细胞仪基本原理和临床应用18Dichroic Filter/MirrorFilter placed at 45oReflected lightTransmitted LightLight Source流式细胞仪基本原理和临床应用19LaserFreqFluorescenceFALS SensorFluoresce

4、nce detector(PMT3, PMT4 etc.)Purdue University Cytometry Laboratories流式细胞仪基本原理和临床应用20流式细胞仪基本原理和临床应用21 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和光电二极管和90方向的光电倍增管接收。方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进

5、行检测，这种信光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。同波长的荧光信号。流式细胞仪基本原理和临床应用22流式细胞仪基本原理和临床应用23流式细胞仪基本原理和临床应用24流式细胞仪基本原理和临床应用25流式细胞仪基本原理和临床应用26 当含细胞的液滴逐个通过激光束时，当含细胞的液滴逐个通过激光束时，受到两种检测器的检测受到两种检测器的检测:如果液滴中含有如

6、果液滴中含有细胞就会激活干涉检测器细胞就会激活干涉检测器(interference detector)，只有带有荧光标记细胞的液滴，只有带有荧光标记细胞的液滴才会激活荧光检测器才会激活荧光检测器(fluorescence detector)。当带有荧光标记的液滴通过激。当带有荧光标记的液滴通过激光束时，将两种检测器同时激活，引起液光束时，将两种检测器同时激活，引起液滴充电信号使鞘液带上负电荷。由于液滴滴充电信号使鞘液带上负电荷。由于液滴带有负电荷，移动时就会向正极移动，进带有负电荷，移动时就会向正极移动，进入到荧光标记细胞收集器中。入到荧光标记细胞收集器中。细胞分选的原理流式细胞仪基本原理和临

7、床应用27488 nm laser+-Charged PlatesSingle cells sortedinto test tubesFALS SensorFluorescence detector流式细胞仪基本原理和临床应用28流式细胞仪基本原理和临床应用29流式细胞仪基本原理和临床应用30流式细胞仪基本原理和临床应用31+Antigen (cytokines)Fluorescence Detector antibodyCapture beads Capture antibodyBeads流式细胞仪基本原理和临床应用32Shades of a colorAntibody coupled be

8、ads, emitting at distinct FL3 intensitiesVarious analytesAntibody coupled PE label, emitting at FL2 intensity proportional to analyte conc.流式细胞仪基本原理和临床应用33Multiple sizesBeads provide an expandable assay platform for use with a flow cytometerDifferent intensitiesDifferent colors with different intens

9、ities流式细胞仪基本原理和临床应用34IL-8IL-1bIL-6IL-10TNFIL-12Capture BeadsLysate or SupernatantSampleDetector AntibodiesWashAnalyze on flow cytometer流式细胞仪基本原理和临床应用35CBA Standard curves流式细胞仪基本原理和临床应用36流式细胞仪基本原理和临床应用37流式细胞仪的数据处理流式细胞仪基本原理和临床应用38数据处理 检测数据的显示视测量参数的不同检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形

10、式表达，其直方图的形式表达，其X轴为测量强轴为测量强度，度，Y轴为细胞数目。对于双参数或轴为细胞数目。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图、等高线图、灰度图或三维立体视图。图。流式细胞仪基本原理和临床应用39流式细胞仪基本原理和临床应用40流式细胞仪基本原理和临床应用41流式细胞仪基本原理和临床应用42Gating流式细胞仪基本原理和临床应用43Compensation流式细胞仪基本原理和临床应用44compensation流式细胞仪基本原理和临床应用45流式细胞仪基本原理和临床应用46G0-G1SG2-MFluorescence Intensity# of EventsA typical DNA Histogram of cell proliferation流式细胞仪基本原理和临床应用47流式细胞仪基本原理和临床应用481 荧光信号的面积：对荧光光通量进行积分 2 DNA指数(DI)：相对DNA含量3异倍体：非二倍体，包括近二倍体，四