生化实验-血糖的测定（课堂PPT）

1、.1.2血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖：指血液中的单糖：葡萄糖血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖水平：血浆中葡萄糖浓度血糖总维持在恒定水平：血糖总维持在恒定水平： 3.96.7mmol/L.3v调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮质激素和肾上腺素。v血糖水平异常：高血糖及糖尿病；低血糖.4临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾临床：血糖检测是目前诊断糖代谢异常相关疾病的主要依据。病的主要依据。科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在科研：在代谢疾病的研究中，常测定血糖。在某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。某些药物的研究中，也涉及血糖的测定。.5体液糖的测定项目：体液糖的测定项目：血糖

2、浓度测定口服糖耐量试验 糖化血红蛋白试验糖化血清白蛋白测定胰岛素测定C-肽测定等.6测定测定方法方法无机化学法：无机化学法： Folin-Wu法法有机化学法：邻甲苯胺法有机化学法：邻甲苯胺法酶法：酶法：葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法.7葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶法原理过氧化物酶法原理（1）葡萄糖）葡萄糖O2H2O（2）H2O24-氨基安替吡啉苯酚氨基安替吡啉苯酚葡萄糖酸葡萄糖酸H2O2H2O 红色醌式物质红色醌式物质505nm.8分光光度计的原理分光光度计的原理生物化学的四大研究技术：生物化学的四大研究技术：.9分光光度计的工作原理分光光度计的工作原理.10朗伯朗伯- -比尔定律比

3、尔定律朗伯定律朗伯定律：A=k1L 比尔定律比尔定律：A=k2C朗伯朗伯-比尔定律比尔定律：如同时考虑液：如同时考虑液层厚度和溶液浓度对吸光度的层厚度和溶液浓度对吸光度的影响，则吸光度与溶质的浓度影响，则吸光度与溶质的浓度和溶液的厚度的乘积成正比。和溶液的厚度的乘积成正比。 A=KLC .11朗伯-比尔定律应用A标=KC标LA样=KC样L 标准品法测定未知样品含量标准品法测定未知样品含量C样=A样A标C标.121. 接通电源，接通电源，调整波长调整波长。2. 比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中比色杯中加入空白及待测样品，并放入分光光度计中，注意：加入样品量不超过比色杯体积的，注意：

4、加入样品量不超过比色杯体积的2/3。3. 调模式为调模式为“透射比透射比”，对空白对照进行调对空白对照进行调“0”（开盖（开盖）和调）和调“100”（闭盖）。（闭盖）。4. 调模式为调模式为“吸光度吸光度”，将空白对照调将空白对照调“0”，测定待测，测定待测样品的吸光度值。样品的吸光度值。.13.14.15.16（1）取取4支试管，按下表加入试剂支试管，按下表加入试剂: :试剂试剂标准管标准管(ml)测定管测定管1(ml)测定管测定管2(ml)空白管空白管(ml)血清样品血清样品0.020.02葡萄糖标准液葡萄糖标准液0.02蒸馏水蒸馏水0.02酶酚混合试剂酶酚混合试剂3.003.003.00

5、3.00充分混匀，充分混匀，37 水浴中保温水浴中保温20min；冷却至室温后冷却至室温后，505nm处比色处比色比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。比色方法：以空白管调零，读取标准管及测定管光密度值。.17（2）计算）计算： 依据依据朗伯朗伯-比尔定律比尔定律： A=KLC 标准管葡萄糖浓度：标准管葡萄糖浓度：5mmol/L 测定管测定管葡萄糖含量葡萄糖含量（mmol/L）测定管光密度测定管光密度 标准管光密度标准管光密度5.18正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的应占比色皿的2/3。血糖测定应在取血后血糖测定应在取

6、血后2小时内完成，放置太久，血小时内完成，放置太久，血糖易分解，故使含量降低。糖易分解，故使含量降低。酶酚混合液一般现用现配。酶酚混合液一般现用现配。 .19补充实验补充实验测2-3名同学早餐后和空腹血糖的水平，并比较二者之间的区别。使用怡成JPS-5型血糖仪。.201 1、葡萄糖氧化酶、葡萄糖氧化酶- -过氧化物酶比色法过氧化物酶比色法测定血糖的原理。测定血糖的原理。2 2、分光光度计的正确使用。、分光光度计的正确使用。3 3、实验操作中存在的问题。、实验操作中存在的问题。.21葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法过氧化物酶比色法Folin-Wu法法邻邻-甲苯胺法甲苯胺法.22原理原理

7、 葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使葡萄糖在和碱性铜试剂混合加热后，可使 Cu2+还原成还原成Cu+ ，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过，后者与磷钼酸试剂作用生成蓝色的钼蓝。通过比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。比色法测定蓝色化合物，计算出血糖的含量。评价评价 稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖稳定、准确、但对葡萄糖无特异性，受血中非糖还还 原物质原物质的影响。的影响。空腹正常血糖参考值空腹正常血糖参考值 4.46.7mmol/L或或80-120mg/dL.23葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶-过氧化物酶比色法过氧化物酶比色法Folin-Wu法法邻邻-甲苯胺法甲苯胺法.24原理

8、原理 葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻葡萄糖在冰醋酸中加热脱水后，与邻-甲苯胺缩合产甲苯胺缩合产生蓝绿色的席弗生蓝绿色的席弗(Schiff)碱，颜色的深浅与葡萄糖含量碱，颜色的深浅与葡萄糖含量成正比，可通过比色法测得血糖含量。成正比，可通过比色法测得血糖含量。评价评价 结果较可靠、但邻结果较可靠、但邻-甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。甲苯胺须蒸馏后使用，有毒性。空腹正常血糖参考值空腹正常血糖参考值 3.96.1mmol/L或或70-110mg/dL.25葡萄糖氧化酶法：葡萄糖氧化酶法：该法特异性高，反应条件温和，能该法特异性高，反应条件温和，能反映血中葡萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，反映血中葡

9、萄糖的真实含量，且已推广出试剂盒，广泛应用与临床。广泛应用与临床。 Folin-Wu法：法：该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质该法对葡萄糖无特异性，一切还原物质均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原均可产生同样的反应。虽血液中葡萄糖为主要还原物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考物质，但仍存在其他非糖还原物质，故该法其参考值较其他方法略高。值较其他方法略高。邻邻-甲苯胺法：甲苯胺法：该法涉及强酸、加热等反应条件，不该法涉及强酸、加热等反应条件，不便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和便于大规模检测，且使用的试剂具有毒性，临床和科研上已很少采用。科研上已很少采用。.26思考题思考题1、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖、为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异？参考值存在差异