L-精氨酸对庆大霉素致肾毒性的防治作用

1、    L-精氨酸对庆大霉素致肾毒性的防治作用        庆大霉素(GM)为临床常用的一种抗生素，不合理应用可致肾损害。因此，对GM肾毒性致病机理的研究有重要的临床意义。NO是近年来发现的具有多种生物学功能的小分子化合物，在调节肾脏生理功能及介导某些肾脏疾病中起重要作用。我们通过应用GM诱导急性肾损害的动物模型，测定此时大鼠体内NO的含量，进而探讨精氨酸L-arginine(L-arg)对肾毒性的防治作用。一、材料与方法1.GM及硝酸盐等测定试剂均为分析纯试剂，L-arg

2、为上海泊澳生物制品公司产品。2.动物分组及标本收集：雌性SD大鼠体重170200g 42只随机分为三组。正常组14只，正常饮食，饮水，每日腹腔注射生理盐水0.5ml 7天。GM组14只，GM 140mg*kg-1/d腹腔注射7天，正常饮水。GM+L-arg 组14只，L-arg 120mg*d-1/只，溶于3ml生理盐水中灌胃7天，余同GM组。实验第4天收集24h尿液，检测尿NAG酶。实验第8天收集24h尿液测尿渗透压、尿肌酐、尿NAG酶、尿硝酸盐及亚硝酸盐。取血测BUN、Cr、血硝酸盐及亚硝酸盐，并计算Ccr。肾标本作光镜、电镜观察。硝酸盐及亚硝酸盐测定用镀铜镉还原测定法。二、结果1.各组死

3、亡鼠数：正常组及GM+L-arg组无死亡，GM组实验第6天死亡1只。2.尿量：正常组为8.78±1.68ml/24h，GM组为10.31±2.88ml/24h,GM+L-arg组为10.29±2.16ml/24h，三组间无显著性差异。3.尿渗透浓度：GM组、GM+L-arg组明显低于正常组(P0.01)；GM组与GM+L-arg组无显著性差异(正常组为1134.29±224.69mmol/L，GM组为736.57±120.94mmol/L，GM+L-arg组为807.14±108.97mmol/L)。4.肾小球功能：见表1。5.尿NA

4、G酶：见表2。6.用药7天三组间血硝酸盐及亚硝酸盐含量：三组间无显著性差异。其平均值顺序为GM组GM+L-arg组正常组(正常组11.703±2.20mol/L；GM组为15.72±3.10mol/L GM+L-arg组为13.56±2.04mol/L)。7.肾组织病理学检查：(1)GM组：光镜下肾小球大致正常，主要病变集中在肾小管，以近曲小管受累明显，部分出现浊肿、空泡变性，部分出现坏死。远曲小管受累较轻，间质有大量炎性细胞浸润。电镜下见上皮细胞微绒毛消失。(2)GM+L-arg组：光镜下整个病变较GM组轻，肾小球大致正常，近曲小管上皮细胞有少量坏死，主要以浊肿

5、、空泡变性为主。间质有少量炎性细胞浸润，蛋白管型、颗粒管型明显。电镜下见上皮细胞微绒毛减少。(3)光镜下GM组、GM+L-arg组分别随机选10个视野，经IBAS计算坏死面积，GM组为6.882%，GM+L-arg组为1.168%。两组有显著性差异(P0.05)。 表1用药7天三组间血BUN、Scr、Ccr及尿NO-x水平比较组别鼠数BUN(mmol/L)Scr(mol/L)Ccr(ml/min)NO-x(mol/24h)正常组146.616±0.95953.85±10.560.828±0.181233.71±345.39GM组1414.24±

6、4.12*248.77±67.85*0.119±0.078*550.23±166.63GM+L-arg组148.18±2.86152.2±46.940.251±0.096853.33±134.68与正常组比， P0.05； 与GM+L-arg组比，* P0.05 表2三组间尿NAG酶动态变化组别鼠数尿NAG酶(U/24h)用药3天用药7天正常组1416.63±2.46517.24±1.96GM组1476.3±18.16*63.18±19.98*GM+L-arg组1453.25±

7、;15.355.447±11.65与正常组比， P0.05；与GM+L-arg组比，* P0.05三、讨论体内L-arg在NOS及一些辅酶作用下生成NO和胍氨酸。NO半衰期很短，迅速氧化成NO-2+NO-3。测定24h尿液中NO-2+NO-3的变化可间接反映体内NO的产生Am J Physiol,1993,265:886。本实验中，我们发现24小时尿NO-2+NO-3含量，GM组明显低于正常组，说明GM致肾损害时体内NO处于低合成状态。L-arg是体内合成NO的重要底物，GM致急性肾损害时，肾脏合成L-arg下降，体内L-arg处于相对不足状态。因此给予L-arg改善体内合成L-ar

8、g的不足，提高体内NO生成水平，对肾功能改善产生有益作用。国外早在1980年代即用钙离子拮抗剂防治GM诱发的急性肾衰Exp Mol Pathol,1985,43:107，其目的在于应用钙离子拮抗剂的扩张血管作用，改善肾脏血流动力学。我们推测，NO在此起的作用与钙离子拮抗剂相似。有趣的是用药7天时，三组间血NO2-+NO3-无显著性差异，但其平均值顺序为正常组GM+L-arg组GM组，与Ccr顺序相反。这说明对NO-2+NO-3的清除率为正常组GM+L-arg组GM组，这与国外报道一致Clin Chem,1996,423:440。尿NAG酶是监测肾小管损伤的敏感指标。动态观察其变化，用药3天，GM组明显高于GM+L-arg组，说明GM组损伤重。用药7天，两组差异不明显，但分析每只动物尿酶变化，GM组大部分(8/13只)的结果较3天时更低，而GM+L-arg组织有少量(3/14只)出现上述情况，说明GM组肾小管损伤严重，与我们形态学观察一致。GM致肾小管坏死与氧自由基的产生有关。一定浓度的NO在体内具有对其它氧自由基清除的作用。我们推测本组实验给予的L-arg对肾小管损伤的防治作用是通过产生一定浓度的NO，NO清除体