胆香鼻炎片药材有效成分的提取工艺进行改进

1、1 前 言1.1 中药提取技术 概述 中药有效成分的提取是中药生产过程重要的单元操作，其工艺特点、工艺流程的选择和设备配置都直接关系到被提取有效成分的数量和质量，从而进一步影响到产品的质量、经济效益等。因此探明中药提取的机理、优化提取工艺参数等逐渐成为中药生产和研究的重点内容。广义的中药提取也称为分离，是指从中药材原料开始，经过一道或多道操作工序，最终的到所需要的药物或其半成品的全过程。按照分离手段的不同，溶质分离方法重要包括机械方式和化工传质方式。机械方式即是榨取发法，通过机械方法使含液固体组织发生体积变化和破裂，进而分离液体和固体。化工传质方式是用液体溶媒从固体药材中浸出有效成分的操作过程

2、，称为浸提、浸出或浸取，它是现代中药生产的重要提取方法。 由于中药材的药性、有效派成分的不同，所适用的浸取方式显然不同，选择合适的浸取方法与工艺对浸出生产是保持中药有效成分的生物活性非常重要。目前浸取生产的传统方法按固液接触状态可分为静态方式和动态方式，具体有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法等1。 煎煮法 煎煮法是以水为提取溶剂，将药材加热煮沸一定时间而获得煮出液，并重复进行若干次，以提取其有效成分的一种传统方法，又称煮提法或煎取法。 本质上，水煎煮法是一种强化的浸渍提取方法，只是操作温度较高，达到了溶媒沸点，是中药最早、最常用的制剂方法之一。但水煎煮法的操作工艺基本上是依据经验指导，其工艺参数

3、，如浸泡及煎煮时间、次数、煎出量等均无最佳操控标准，往往导致产品质量或疗效的显著性差异；另外，水作为一种溶媒并不能完全提取所有有效成分；实际上现代中药理论研究表明，许多中药的生物活性对加热都有不同程度的敏感，因此使煎煮法的应用受到一定限制。 浸渍法浸渍法属于静态提取方法，是在常温或在加热条件下浸泡药材，使其所含的有效成分被浸出的方法。通过浸渍法所得到的浸出液在不低于浸渍温度下能较好地保持其澄清度；操作简单易行，但所需时间较长，溶剂用量大，出液系数高，有效成分浸出率低；另外，浸渍状态下固液间通常呈静止状态，溶剂的利用率低，有效成分浸出不完全。 渗漉法将药材粉碎后装入特制的渗漉筒或渗漉罐中，从渗漉

4、罐上方连续通入溶媒，使其渗过罐内药材积层，发生固液传质作用，从而浸出有效成分，自罐体下部出口排出浸出液，这种方法叫渗漉法。由于浸出液浓度在渗漉过程中不断提高而密度增大，逐渐向下移动，由上层溶剂或更稀浸出液置换其位置，连续造成较大浓度差，使扩散能较好地进行。（1）.渗漉的特点：渗漉提取过程类似多次浸出过程，浸出液可以达到较高的浓度，其浸出效果好。不需要加热，可常温操作。溶剂用量少，过滤要求低，简化了渣液分离操作过程。操作技术要求高，否则影响提取效率。工艺操作周期较长。（2）渗漉法工艺流程及工作目的 流程：药材 粉碎 浸润 装筒，排空气 浸渍 渗漉渗漉各操作工序目的：渗漉提取前药材需经适当粉碎才能

5、装筒。通常，渗漉提取的药材颗粒多为中等粒度以上，不宜过细，负否则增加吸附性，溶剂将难以顺利通过，不利于溶质的浸出,生产中药材切片厚度一般为0.5 mm。颗粒过粗则会减少接触面积，降低浸出效率；浸润的目的在于装筒前就使药材组织充分膨胀，避免装罐后堆积过紧或膨胀不均，防止溶剂的流动不畅或不均匀通过，影响提取效果，通常浸润溶剂量为药材量的0.71倍，充分均匀后放置时间为14 h；装筒时要注意压力要均匀，松紧合适。装的过松，溶媒通过速度过快，造成短路，浸提效果不好，且占用容积大，溶媒耗用多。装的过紧会使通道阻塞而使渗漉无法进行；扩散的效果与时间密切相关，故渗漉前的浸渍是非常必要的。装筒完毕后，自上部缓

6、缓通入溶媒，则罐内药粉间的残存空气便可由罐底部打开的出口排出，至没有气泡为止关闭出口，继续加溶媒至高出药层几厘米处，加盖放置2428h。浸渍时要尽量排出空气，并阻止空气重新渗入。否则残存气泡将冲挤药层，使药粉层原有的松紧改变，产生空隙，溶媒由空隙流过。渗漉过程中，液面应始终保持高于药层，否则表层药粉会产生干涸裂缝，溶媒将同样由空隙流过而影响渗漉。 回流法回流法是以乙醇等易挥发的有机溶剂不提取溶剂，对浸出液加热蒸馏，其中挥发性溶剂馏出后又被冷凝，重新回到浸出器中继续参与浸出过程，循环进行，直到有效成分浸提完全。本质上，回流是一种热浸法。因为溶剂的循环使用，回流法较渗漉法的溶媒用量少，浸提较完全，

7、但由于回流提取需要连续加热，浸出液受热时间较长，故不适用于对热敏感型有效成分的浸出。1.2 鼻炎知识介绍 病理介绍鼻炎是一种常见多发性疾病。主要症状是鼻塞，并伴有嗅觉减退，头痛，流浊涕等。急行鼻炎一般由感冒引起；慢性鼻炎多由急性鼻炎转化而来。其主要分为慢性单纯性鼻炎、慢性肥厚性鼻炎、鼻窦炎、过敏性鼻炎和萎缩性鼻炎等几个大类2。（1）慢性单纯性鼻炎中医称为“鼻窒”，其鼻粘膜由于各种因素所致的可逆慢性鼻炎疾病，是一种常见多发病。其主要发病原因为急性鼻炎反复发作或治疗不彻底。另外，鼻中隔偏曲及邻近病灶的影响，长期吸入污染的空气以致某些全身慢性疾病，如贫血、糖尿病等均可导致慢性鼻炎的发生。主要诊断要点

8、：鼻阻塞常为交替发生，鼻涕或多或少，或清或黄。重者鼻阻塞为持续性，且伴有头昏、头胀、咽喉不适。鼻甲肥大，滴收敛剂后可缩小。（2）慢性肥厚性鼻炎又名增生性鼻炎，是一中常见的鼻腔疾病。其发病原因与全身慢性疾病、维生素缺乏、鼻粘膜反复急性感染以及慢性化脓性鼻窦炎等因素有关。其特点为鼻腔持续性阻塞，鼻粘膜肥厚、增生。（3）鼻窦炎是鼻窦粘膜的非特异性炎症，为一种鼻科常见多发病。所谓鼻窦是鼻腔周围面颅骨的含气空腔，左右共有4对：额窦、上合窦、筛窦和蝶窦。因其解剖特点，各窦可单独发病，也可形成多鼻炎或全身鼻窦炎。本病一般分为急性和慢性两类，其原因很多，较复杂。急性鼻窦炎多由急性鼻炎导致；慢性鼻窦炎常因急性鼻

9、窦炎未能彻底治愈或反复发作而形成。另外，游泳时污水进入鼻窦，邻近器官感染扩散，鼻腔肿瘤妨碍鼻窦引流，以及外伤等均可引起鼻窦炎。诊断要点：急性期：鼻塞，流黄脓涕，眉额或眼眶下压痛。鼻腔粘膜充血肿胀，中鼻道有积脓。常伴有形寒发热，头昏头痛。慢性期：不同程度鼻塞，眉额胀痛不适，脓涕不断，味臭，嗅觉减退，头昏头痛上中鼻道有脓性分泌物。中药辛荑、黄芩、麦冬、牛蒡子、金银花、鱼腥草、薄荷在治疗其急性期是有重要作用，而牛蒡子、薄荷、苍耳子、藿香、菊花可用于其慢性期的治疗。（4）过敏性鼻炎 中医称为鼻 其发病机理是由于肺虚卫气失固，抵御外邪能力减弱，风寒乘虚入侵所致。主要诊断要点为：多在吹风受凉时突然发作，鼻

10、痒，鼻塞，连续喷嚏，流清水样鼻涕，鼻腔粘膜苍白、水肿。生黄芪、防风、白术、桂枝、苍耳子、生姜、红枣常被用此类鼻炎的治疗当中。（5）萎缩性鼻炎 中医称为鼻藁，俗称“臭鼻子”。其是由于肺经有火，日久肺燥阴伤，鼻失滋养所致。主要诊断要点为：鼻腔宽大，粘膜干燥萎缩，嗅觉减退。结有黄绿色脓痂，具有特殊嗅味，痂块堵塞时感觉鼻塞。伴有头昏，头痛，鼻腔及咽喉常感干燥，在脓痂脱落时可引起轻度鼻出血。鼻炎是一种常见的多发性疾病，现代医疗技术已经可以完全予以治愈，但如果粗心大意，不及时治疗，其可以进一步引起其他鼻科疾病，如鼻息肉、鼻出血等疾病。 常用治疗鼻炎的中药鼻炎的是一种常见的多发性疾病，因此对其的治疗研究从很

11、早就有记载。而治疗鼻炎的药方也很多。如处方1：苍耳子、辛荑、白芷、藿香、薄荷各10 g，薄荷、桔梗、菖蒲各5 g。其专用于慢性单纯性鼻炎的治疗。处方2：辛荑、黄芩、山栀、麦冬、牛蒡子各10 g， 金银花、鱼腥草各15 g，薄荷5 g，生石膏30 g。其专用于急性期鼻窦炎的治疗。处方3：生黄芪15 g，防风、白术、桂枝、白芍、苍耳子各10 g，生姜2片，红枣4个。其专用于过敏性鼻炎的治疗。 在现代的药药生产条件下，又产生了许多治疗各种类型鼻炎的中成药。如补中益气丸、玉屏风口服液、鼻炎灵冲剂、千柏鼻炎片，藿胆丸等。1.3 胆香鼻炎片资料 胆香鼻炎片处方及制法以1000片制剂为标准猪胆汁膏15 g

12、广霍香560 g 白芷560 g苍耳子450 g 鹅不食草375 g 荆芥250 g 金银花250 g 野菊花250 g 薄荷脑1.5 g 以上九味，除薄荷脑、猪胆汁膏外，取鹅不食草50 g粉碎成细粉，过筛，剩余鹅不食草与其余各药照流浸膏剂与浸膏剂项下渗漉法（中国药典2005年版一部附录11），用65%乙醇为溶剂进行渗漉，以每分钟35 mL的速度缓缓渗漉，收集漉液13500 mL,回收乙醇，滤过，滤液浓缩成相对密度为1.101.15(80 )的稠膏，与猪胆汁膏合并，干燥，加鹅不食草粉末及辅料适量，制成颗粒，干燥，将薄荷脑研细，与上述颗粒混匀，压制成1000片，即得。 处方分析处方各味中药材理化

13、性质及药理作用：（1）猪胆汁膏含胆汁酸，猪去氧胆酸等多种成分。胆汁酸盐是胆汁的主要成分，有解痉、镇静、利胆、止咳、消炎作用。胆汁酸为C17上的R为5个的侧链，为24个碳原子构成的类固醇；其侧链末端为羧基，环上无双键；环上的羟基都是-构型（即在环平面的下面）。由于胆汁酸分子中既含有亲水基团（如羟基、羧基），又含有疏水基团（如甲基），故溶于水和有机溶剂，且这两种不同性质的基团在空间的排列上是分布在环戊烷多氢菲的两侧，这样，使分子分为亲水面和疏水面两个侧面，故为很强的乳化剂。对脂肪的消化、吸收起着重要的作用3。（2）广藿香含有广藿香醇、广藿香酮、丁香烯、广藿香烯、愈创木烯等多种药用成分,在本药品中主

14、要作用成分为广藿香醇，对常见致病性真菌和多种致病细菌有抑制作用，能消炎、解痉、防腐、芳香化浊。广藿香来源于唇形科植物广藿香Pogostemoncablin (Blanco) Benth1 的干燥地上部分。原产于菲律宾、马来西亚、印度等国家,后传入我国,主要以栽培为主。目前在广东省的肇庆地区、湛江地区、广州郊区、海南岛均有栽培。挥发油为广藿香的主要活性成分,关于其化学成分的报道很多,其广藿香是临床上常用的芳香化湿药,其味辛,性微温;归脾、胃、肺经,具有芳香化浊,开胃止呕,发表解暑的功能4。临床上主要用于湿浊中阻,脘痦呕吐,暑湿倦怠,胸闷不舒,寒湿闭暑,腹痛腹泻,鼻渊头痛等症的治疗。此外,广藿香所

15、含挥发油还可以作为化妆品、定香剂和杀虫剂等日常生活用品的生产配料,是重要的出口创汇的产品。（3）白芷含欧前胡素、白芷醚、呋喃香豆等成分。在本品中主要作用成分为欧前胡素，对多种致病菌有抑菌作用，还可以消炎、消肿、排脓、止痛。欧前胡素在中性和酸性条件下不溶于水，易溶于石油醚，乙醚等有机溶剂；呋喃香豆精多为无色结晶，味苦，具特异香气，小分子的香豆精能升华，香豆精苷可溶于水、甲醇、乙醇与碱液，难溶于苯、乙醚等有机溶剂。甙元难溶于冷水，能溶于沸水，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚及碱液。香豆素具有、一不饱和内酯的结构，在稀碱溶液中可渐渐水解开环生成顺式邻羟基桂皮酸的盐，但它不稳定，一经酸化，又可复原。但时间

16、较长，或有氧化汞存在，则形成反式邻羟基桂皮酸，不易再复原5。（4）苍耳子含脂肪油以及苍耳苷、苍耳醇。对多种致病菌有抑制作用；通鼻窍、止痛、祛风湿。苍耳子脂肪油中的脂肪酸以油酸和亚油酸为主，其中亚油酸64.2%, 油酸26.8%,易溶于乙醚等有机溶剂，在高温和长时间放置后会影响脂肪油的稳定性,可引起色泽加深,折光率、酸值增大、易氧化分解。（5）鹅不食草有效成分为其挥发油，有祛风、散寒、胜湿、利九窍作用；治鼻渊、祛息肉6。（6）金银花金银花为常用中药, 具有清热解毒, 凉风散热的功效。文献报道的主要有效成分有如下几类: 挥发油,具有抑菌抗病毒的作用; 木犀草素,具有抗菌、消炎、改善心血管功能及解痉

17、, 祛痰,抗癌的作用;酚酸类物质,绿原酸、异绿原酸具有广谱抗菌及抗氧化的作用。易溶于水、醇溶液和酮等试剂。 中药中的广谱抗菌药、解毒、清热；冶各种急性炎症。主要作用成分为绿原酸，绿原酸是含有羧基和邻二酚羟基的有机酸，易溶于水、醇溶液和酮等试剂。 中药中的广谱抗菌药、解毒、清热；冶各种急性炎症7。（7）荆芥含柠檬烯、薄荷酮等，有祛风、解表、止血、抗菌、抗过敏作用。主要用于过敏性鼻炎的治疗药物中。薄荷酮化学名为环戊酮，易溶于乙醇等有机溶剂，由于C=O的作用微溶于水。柠檬烯又称苧烯,学名为1-甲基-4-异丙基环己烯,分子式C10H16,分子质量136.23。柠檬烯是广泛存在于天然植物中的单环单萜，它

18、是除蒎烯外,最重要和分布最广的萜烯。 柠檬烯是一种无色至淡黄色液体,具有令人愉快的柠檬样香气,不溶于水,溶于乙醇!丙酮等有机溶剂，柠檬烯有三种异构体,即右旋柠檬烯、消旋柠檬烯和左旋柠檬烯。它们在外观上没有什么区别,都是无色至淡黄色液体,都有新鲜柠檬样香气。九味中药均能抗炎抑菌功能，又苍耳、白芷、荆芥、薄荷能上升开窍，尤善通力鼻窍，以利助长诸药发挥消炎抑菌之作用直达鼻窍，故对慢性、单纯性鼻炎、过敏性鼻炎，急慢性副鼻窦炎有极佳的疗效。 提取工艺简析 胆香鼻炎片处方包括的九味中药，虽然每一味中药中都能提取出许多药用成分，而且对身体的某些病理起到主治或辅助治疗的作用，但是只针对鼻炎而言，每味中药中仅有

19、一种有效成分。例如，猪胆汁膏的猪去氧胆酸；广藿香中广藿香醇；白芷中的欧前胡素；苍耳子中的苍耳子醇；荆芥中的薄荷酮，柠檬烯；金银花、野菊花中的绿原酸等。这些有效成分中，有些能溶解于水中，而有些却不能，这就决定了胆香鼻炎片的有效成分的提取不能使用水煎煮法提取；浸出法虽然能够用于本品有效成分的提取，但因其工艺缺点不能很好的达到提取有效成分和节约成本的目的，因此也不适用于本品的提取过程。或许是考虑到了胆香鼻炎片中有些成分对热的敏感性，如绿原酸，当温度超过80摄氏度时，其有可能被破坏；再如鹅不食草中的挥发油等。所以药典上胆香鼻炎片有效成分的提取工艺采用渗漉法。 目前胆香鼻炎片的生产厂家为吉林涌源药业股份

20、有限公司，药品批准文号为：国药准字Z22025160。 实验目的就胆香鼻炎片而言，渗漉法能在不破坏其对热敏感物质的前提下，最大限度的提取各味中药的有效成分，但渗漉提取法的操作技术要求高，且渗漉周期长，用于工业大生产的困难度大。陕西康惠制药有限公司从其企业以追求利润的角度出发，提出将胆香鼻炎片药材有效成分的提取工艺进行改进的课题，将原来的渗漉提取改进为回流提取，并要求将将两种提取方法的提取成分进行质量和含量的对比，比较其有效成分含量是否变化、提取物中提取成分有无增减、提取的成分是否因工艺的改变而改变、以及有效成分是否因回流受热而遭到破坏。以两者之间的对比结果为依据，探讨回流提取的工业可行性，指导

21、工业生产。2 实验2.1 渗漉法提取工艺研究 相关仪器设备及试剂：（1）仪器SGF-130高速粉碎机 上海天和制药机械厂 HH-4数显恒温水浴锅国华电器有限公司101A-2型电热鼓风恒温干燥箱上海亚明热处理设备司渗漉筒自制火牌B型玻璃仪器气流烘干器郑州市上街区仪器厂（2）材料及试剂广藿香 112 g 白芷 112 g 苍耳子 90 g 鹅不食草 75 g 荆芥 50 g 金银花 50 g 野菊花 50 g 上述药材共529 g来自省药材公司酒精（宝鸡酒精厂） 实验方法（1）渗漉工艺流程图以上七味中药 前处理 鹅不食草10g 其余药材 粉碎（最粗粉） 渗漉 粉碎（过100目筛） 渗漉液 滤液浓缩

22、 混合 稠膏 真空减压干燥 膏粉图2-1 渗漉提取工艺步骤图（2）实验操作步骤制作好渗漉装置后，先在渗漉筒的底部塞一小团棉花，然后再铺上纱布。按照处方量的1/5分别称取药材，共529 g。将适量药材粉末装入渗漉筒中，压实，再继续装入药材粉末同法处理，装完药材后将药材表面压紧，盖上纱布，将渗漉筒固定。用玻璃棒引流向渗漉筒中缓缓加入1450 mL，65%的乙醇，封好筒口，浸泡一天。向渗漉筒中缓缓加入300 mL，65%的乙醇，保持液面高度为3cm左右，打开渗漉阀，开始渗漉，渗漉速度3-5 mL/s,收集渗漉液。及时补充提取溶剂保持液面的一定高度，共加入提取溶剂4000 mL,收集渗漉液总共为285

23、0 mL。将所收集的渗漉液置蒸发皿中于水浴锅上蒸发至稠膏状。2.2 回流法提取工艺研究 相关仪器设备及试剂（1）仪器SGF-130高速粉碎机上海天和制药机械厂HH-4数显恒温水浴锅国华电器有限公司MH2000电子调温电热套黄骅市渤海电子设备厂101A-2型电热鼓风恒温干燥箱上海亚明热处理设备公司星火牌B型玻璃仪器气流烘干器郑州市上街区仪器厂三口圆底烧瓶（2）材料及试剂广藿香 33.6 g 白芷 33.6 g 苍耳子 27 g鹅不食草 22.5 g 荆芥 15 g 金银花 15 g 野菊花 15 g 上述药材来自省药材公司酒精（宝鸡酒精厂） 实验方法（1）实验方案由于要求在不同的实验条件下用回流

24、提取工艺进行九组实验，再分别以其提取物膏粉作为质量检查和含量测定的样品，由其测定结果得出最佳的回流工艺条件。由于实验时需要将影响回流的各种主要因素考察在内，因此实验安排用正交设计，实验条件安排如下8：A：提取时间 B：溶剂用量 C：溶剂浓度 D： 提取温度表2-3 三因素水平表 水 平 因子 1 2 3 A2h4h 6h B6倍 8倍 10倍 C65% 70% 75% D 80 80 80 表2-4 L9（34）正交安排实验号 1 2 3 41 A1 B1 C1 D12 A1 B2 C2 D23 A 1 B3 C3 D34 A2 B1 C2 D35A2 B2 C3 D16 A2 B3 C1 D

25、27 A3 B1 C3 D28 A3 B3 C2 D1 （2）制剂工艺流程图：以上七味中药 前处理 鹅不食草3g 其余药材 粉碎（最粗粉） 回流 粉碎（过100目筛） 回流液 滤液浓缩 混合 稠膏 真空减压干燥图2-2回流提取工艺步骤图 膏粉（3）实验操作步骤药材的粉碎：除猪胆汁膏、薄荷脑外，其他药材均应进行粉碎。取适量鹅不食草进行细粉，过80目筛，称取45 g于取样袋中备用，剩余的鹅不食草与其他药材分别进行粗粉（两遍）。回流法制备流浸膏： 安装回流装置。分别称取一定量的（其中第一组回流样称取264.5 g，第2-9组称取161.5 g）药材。将称量好的药材混合均匀，装入2000 mL的三角烧

26、瓶中，按实验方案的条件向烧瓶中加入乙醇溶液，将烧瓶放在电热套中，加上冷凝装置，塞好瓶口。打开冷凝水，开启电热套开关，调节温度开始回流。至烧瓶中第5滴液体滴下开始计时，瓶内温度为80 。回流时间、回流次数由实验安排决定，收集回流液，将所收集的滤液置蒸发皿中于水浴锅上（温度不高于80 ）蒸发至稠膏状。2.3质量标准检查2.3.1仪器与试剂（1）仪器HPD-25真空抽虑机 上海精密科学仪器有限公司电子称Spidei60 上海精密科学仪器有限公司SB3200超声波清洗仪 国华电器有限公司ZF-2型三用紫外分析仪 上海康禾光电仪器有限公司HH-4数显恒温水浴锅 国华电器有限公司PBQ-型薄层自动铺板器

27、重庆南岸新力实验电器厂岛津LC-10AD型高效液相色谱仪、SPD10AVP型紫外检测器、LC10Atvp型泵、C18(250×4.6)色谱柱。（2）材料及试剂质量鉴别所需的药物均来自上述实验提取的膏粉无水乙醇（分析纯） 西安三浦精细化工厂石油醚（分析纯） 天津富宇精细化工有限公司甲酸（分析纯） 天津市科密欧化学试剂开发中心乙酸乙酯（分析纯） 天津市津北精细化工有限公司二氯甲烷（分析纯） 天津市化学试剂六厂苯（分析纯） 天津市化学试剂三厂甲醇（分析纯） 天津市百世化工有限公司冰醋酸（分析纯） 天津市巴斯夫化工有限公司三乙胺（分析纯） 西安化学试剂厂糠醛（分析纯） 天津市博迪化工有限公司

28、香草醛（分析纯） 西安中信精细化工有限责任公司三氯化铝 西安化学试剂厂浓硫酸（分析纯） 洛阳市化学试剂厂硅胶G （化学纯） 青岛海浪硅胶干燥剂厂2.3.2薄层鉴别（1）鹅不食草的显微鉴别：茎表皮非腺毛细长而扭曲，直径320 m，为单细胞，壁薄。叶表面非腺毛少见，由46个细胞组成，基部细胞直径4060 m，顶端细胞窄细，扭曲成鞭状，花冠非腺毛平直或微弯，长120180 m，直径48 m，由12个细胞组成，壁稍厚。花粉粒类圆形或卵圆形，直径1820 m，外壁具短小刺，有3个萌发孔。（2）取本品0.7 g，除去糖衣，研细，加乙醇15 mL,温浸15 min，滤过，取滤液3 mL置水浴上蒸干，残渣加6

29、0%醋酸1 mL使溶解，加新制的1%糠醛硫酸溶液1 mL，于70水浴中加热10 min，溶液逐渐显紫黑色。（3）取鉴别（2）项下的滤液，点于滤纸上，干后，置紫外光灯（365 nm）下检视，呈紫蓝色荧光，再喷洒1%三氯化铝乙醇溶液，呈黄色荧光。（4）取本品3.5 g片，除去糖衣，研细，加入石油醚（30 60 ）20 mL，置于35水中超声处理30 min，滤过，滤液低温蒸干，残渣加醋酸乙酯1 mL溶解，作为供试品溶液。另取广藿香对照药材1 g,同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录B）试验，吸取上述两种溶液1020 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（3060）醋

30、酸乙酯甲酸（85:15:2）为展开剂，展开，取出，凉干，喷以5%香草醛硫酸溶液，100加热至斑点显色清晰。薄层图谱见结果与讨论。（5）取本品1.75 g，除去糖衣，研细，加入二氯甲烷10 mL,冷却过夜，过滤，滤液作为供试品溶液。另取白芷对照药材，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录B）试验，吸取上述两种溶液10 L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯醋酸乙酯（10:1）为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外光灯（365 nm）下检视。薄层图谱见结果与讨论。（6）取本品1.75 g，除去糖衣，研细，加甲醇20 mL,置水浴上加热，充分振摇，放置10 min，滤过，滤液作为

31、供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液作为对照品溶液，照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录B）试验，吸取对照品溶液1 L，供试品溶液2 L，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，凉干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。此标准为原标准中绿原酸的薄层鉴别，符合标准规定。2.3.3含量测定 照高效液相色谱法（中国药典2005年版一部附录D）9测定。色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(20:85:1:0.3)为流动相；检测波长为324

32、nm；柱温为室温；理论板数按绿原酸峰计算，应不低于200010。对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品适量，加50%甲醇制成每1 mL含0.05 mg的溶液，作为对照品溶液（10 以下保存）。供试品溶液的制备 取本品20片，除去糖衣，精密称重，研细，取约2.0 g，精密称定，置100 mL量瓶中，加50%的甲醇适量，超声处理30 min使溶解，并稀释至刻度，摇匀，滤过，滤液作为供试品溶液。测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 l，注入液相色谱仪，测定，即得。其测定结果见第三章。 3 结果与讨论3.1提取物的干燥结果将渗漉和回流提取所得的稠膏分别置于蒸发皿中，标上编号，放在托盘中，进行

33、真空减压干燥。所得膏粉重量及收膏率如下：表3-1 收膏率考察结果 实验序号 取样量(g) 收膏量(g) 收膏率（%）渗漉样 529.0 83.50 15.78回流样1 264.5 37.80 14.29回流样2 161.7 14.95 9.25回流样3 161.7 20.56 12.71回流样4 161.7 21.88 13.53回流样5 161.7 20.74 12.83回流样6 161.7 22.00 13.61回流样7 161.7 24.20 14.97回流样8 161.7 26.80 16.57回流样9 161.7 24.67 15.26由上表可知渗漉样的收膏率要普遍高于回流样的收膏率

34、。3.2质量检查结果3.2.1薄层鉴别结果（1）广藿香有效成分薄层图谱 对照样 渗漉样 回流样1样2 验证样 365 nm紫外光下检视 喷5%香草醛硫酸溶液图3-1广藿香有效成分薄层鉴别图 图3-2广藿香薄层显色图结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的黄绿色荧光斑点。其它回流样在365 nm紫外光下的检视结果、喷洒5%香草醛硫酸溶液后观察结果与上图相似。此标准为原标准中广藿香醇的薄层鉴别，符合标准规定。（2）白芷有效成分薄层图谱 对照样 渗漉样 回流样1样2 样3 样4 验证样图3-3白芷有效成分薄层鉴别图结果显示供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色

35、的黄绿色荧光斑点。其它回流样在365 nm紫外光下的检视结果、喷洒5%香草醛硫酸溶液后观察结果与上图相似。此标准为原标准中欧前胡素的薄层鉴别，符合标准规定。（3）其它药材有效成分薄层鉴别结果实验表明：实验样品能在硅胶板上有与标准品相同的色谱行为。3.2.2绿原酸含量测定（1）高效液湘图谱及峰面积图3-4对照品 (0.0355 mg/mL,20 L,2775086)图谱图3-5供试品渗漉样(1.0004 g/50mL,5 L,9224182vs)图谱图3-6供试品回流样8(2.0003g/100mL,5 L,9374940vs) 图谱由以上图谱分析可知供试品与对照品的出峰时间相当,均在十一分钟左

36、右,峰面积相差不大,分离度均大于1.5,脱尾现象不明显.其它回流样也有着相同的液湘图，并将其附在附录中。（2）绿原酸含量计算各实验组高效液湘测定绿原酸峰面积结果如下:表3-2 各样品峰面积表 内容品名取样量(g)供试品峰面积(Vs)平均峰面积(Vs)渗漉样1.000413509097922418211366640回流样12.0005951434672431458378745.5回流样22.0004751040868706167190284.5回流样32.0002803298773687937700890回流样41.9988761051979812667795892.5回流样52.0015805

37、959385737028316647.5回流样62.0004958352092640659423792.5回流样72.0003915513792749409265038.5回流样81.0005874618284618198604000.5回流样90.5000775980286389678199384.5对照品浓度 对照品峰面积 平均峰面积 (Vs) (Vs)27750860.0355mg/mL 2771857.52768629计算公式 （3-1） 由上述公式计算得供试品含量表3-3 十种样品绿原酸含量测定结果 内容品名取样量(g)平均峰面积(Vs)稀释倍数(mL)供试品中绿原酸含量(%)渗漉样

38、1.000411366640502.91回流样12.00058378745.51002.14回流样22.00047190284.51001.84回流样32.000277008901002.01回流样41.99887795892.51002.00回流样52.00158316647.51002.13回流样62.00049423792.51002.42回流样72.00039265038.51002.37回流样81.00058604000.5502.20回流样90.50008199384.5252.10由绿原酸含量测定的结果，得出以下结论：渗漉提取物中绿原酸的含量高于回流提取的含量 ，但两种听取方法都

39、能使绿原酸含量不低于1.2%，符合标准。3.3正交实验结果正交实验结果直观分析表3-4 L9（34）正交表及考察指标结果L9(34)正交表 因素 试验号ABC指标得分溶剂量时间溶剂浓度出膏率（%）绿原酸含量（%）11 1 1 14.29 2.148221 2 2 9.25 1.8461.931 3 3 12.71 2.0172.542 1 2 13.53 2.0073.452 2 3 12.83 2.1377.862 3 1 13.61 2.4281.773 1 3 14.97 2.3788.483 2 1 16.57 2.2084.493 3 2 15.26 2.1079.7k172.133

40、 81.267 82.700 79.833k277.63374.70071.667 77.733 k384.167 77.96779.567 76.767 R12.0346.567 11.0333.066 因素主次A>C>B>D最佳组合 A3B1C3 正交实验的曲线效应图图3-7正交实验曲线效应图从正交设计输出的曲线效应图上，我们可以得出下列结论：a、随这提取溶剂用量的增大，对综合指标的影响也随之增大。当溶剂用量大于8倍量时，对综合指标的影响的增大的速度明显加快，这一效果明显的表现在溶剂量对综合指标的影响的曲线斜率上。b、综合指标与提取时间的关系是，在24h区间内，其随提取时

41、间减少；在46h区间内，随时间增大。但仍然以2h对综合指标的影响最大。见提取时间对综合指标影响图。c、综合指标与提取溶剂浓度的关系曲线和绿原酸与提取时间的关系曲线的变化相似，在65%70%酒精浓度区间内，影响随浓度减小，在70%75%酒精浓度区间内，影响程度随浓度增大而增大，但增大曲线的斜率要小于减小曲线的斜率。所以仍然以65%酒精浓度的影响程度最大。d、从曲线效应图可以看出，溶剂浓度、提取时间这两因素效应曲线没有出现曲线拐点，所以此两因素的最佳提取条件不在本次实验考查的范围内。e、通过对正交设计曲线效应图的分析，在本组实验范围内，我们得出正交设计最佳操作工艺条件为：10倍剂量，65%浓度的酒精，提取2h，既A3B1C1。这一结果与正交设计的直观分析不一致，这说明用回流法提取的最佳工艺操作条件在设计之外，因此需要再进行一组实验进行验证。3.4两种提取方式的对比分析通过长时间的实验，本小组得出了对渗漉提取和回流提取这两种不同提取方式的对比结果：a、从广藿香和白芷有效成分的薄层鉴别上可以得出，两种提取方式都能将药物的有效成分提取出来。在广藿香薄层上Rf=0.4的位置有各样品有效成分的斑点，在白芷薄层上Rf=0.3,0.5,0.6的位置上有相