超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究(一)

1、超声提取夏枯草中总三萜类成分的研究(一)    作者：吕杏放 朱文斌 杨倬荣 周杨 黄春瑜 彭新生【摘要】 目的：探讨夏枯草中总三萜类成分的提取工艺。 方法：采用正交试验设计方案优化夏枯草中总三萜类成分的超声提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取温度65，85乙醇，超声30min，10倍溶剂用量，超声提取3次。结论：超声提取既简便又高产，节能且环保。 【关键词】 超声提取 总三萜类 夏枯草 熊果酸夏枯草是唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris Linn的干燥果穗或全草，别名夏至草、夏枯头。在我国主产于江苏、浙江、安徽和济南等地，主要化学成分为三萜

2、类、甾体类、黄酮类、香豆素类、糖类和挥发油类等1，具有清肝、明目、散结、消肿、止痛之功效，临床用于治疗甲状腺肿大、淋巴结核、乳腺增生、高血压、肺结核、急性黄疸型传染性肝炎等疾病2。夏枯草属植物中含有多种三萜类成分, 主要为齐墩果烷型、乌苏烷型和羽扇豆烷型三萜。其药理活性成分熊果酸（UA）、齐墩果酸（OA）等三萜类化合物具有镇静、抗炎、抗菌、抗高血压、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应3。近年来研究发现，三萜类中的熊果酸（UA）具有抗致癌、抗促癌、诱导F9畸胎瘤细胞分化和抗血管生成作用，极有可能成为低毒高效的新型抗癌药物4；齐墩果酸（OA）具有保肝、免疫作用5。本实验采用正交试验设计，以

3、夏枯草中总三萜类成分的含量为评价指标，考察乙醇为溶剂用超声提取的最佳工艺条件。1 仪器与试药KQ 5200 DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV-1800紫外-可见分光光度仪（上海美谱达仪器厂）；TGL-18G高速台式离心机（湖南星科科学仪器公司）；WK-1000A高速药物粉碎机（山东青州市精诚机械有限公司）。夏枯草（干燥花序、果穗）购于广东东莞国药集团有限公司，经苟占平副教授鉴定为夏枯草属植物夏枯草(Prunella vulgaris Linn)。熊果酸标准品购于中国药品生物制品检定所。活性炭（C.P），其余试剂均为A.R。2 实验方法2.1 夏枯草超声提取正交试验设计方案

4、表1 因素水平表（略）2.2 测量方法的研究2.3 方法学考察6，7及含量测定2.4 结果表2 稳定性考察表（略）表3 重现性考察表（略）表4 正交试验结果与分析（略）表5 正交试验结果的方差分析（略）注：* P0.05。由表5分析可知，夏枯草中总三萜类成分最佳提取工艺为：A3B3C2D3。对夏枯草中总三萜类物质含量影响因素主次顺序为：B>A>C>D，即超声温度 65，85乙醇，超声30min，10倍溶剂用量。表6 夏枯草总三萜类物质含量测定（略）表7 回收率试验（略）3 讨论在预试验中发现，提取3次总三萜类成分含量为65.71g，提取2次总三萜类成分含量为49.67g。提取3次的含量远高于提取2次的含量，故选定工艺提取次数为3次。冰醋酸-香草醛、高氯酸比色法是测定三萜类化合物常用方法，本法测定的机制可能是三萜酸本身在可见光区无吸收，经过三萜酸中羟基与香草醛结构中的醛基进行缩合反应，生成紫红色的缩合物，通过测定缩合物的量，从而计算出总三萜类物质的量。在0.30ml 5香草醛-冰醋酸溶液，1.00ml高氯酸，60水浴10min的条件下显色，从实验中知在显色后3060min内稳定，有一个较准确的测定值。若在实验中严格控制反应条件，其结果稳定且重现性好，可用于质量控制8。通过回收率试验验证，最佳提取工艺对