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文档简介

1、 酸性磷酸酯酶的组织定位一、目的 1.了解并掌握酸性磷酸酶定位的原理及操作步骤;2.观察酸性磷酸酶在细胞中的分布。 二、原理 酸性磷酸酯酶(Acid Phosphatase)存在于植物的种籽、霉菌、肝脏和人体的前列腺之中，能专一性地水解磷酸单酯键。 PO43-+Pb(NO3)2 -Pb3(PO4)2 （沉淀） Pb3(PO4)2 +(NH4)2S-PbS (棕黑色)三、实验材料、试剂和仪器1、材料 新鲜蒜苔，新鲜青菜的全根系组织；2、试剂 磷酸缓冲液PH=7.2，丙酮，底物溶液，(NH4)2S试剂，邻苯二酚，蒸馏水等3、仪器和用具恒温水箱、显微镜、烧杯、

2、大小培养皿、镊子、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等等。四、实验方法与步骤1、新鲜蒜苔的酸性磷酸酶组织定位：A. 徒手切片蒜苔（使切片尽量薄而透明），将切片放入装有干净蒸馏水的培养皿中备用；B. 挑选适宜的蒜苔切片，将其放入4的丙酮中，固定15 min后用蒸馏水清晰切片1-2次；C. 将洗好的切片移入装有底物溶液的试管中，在37下水浴1h；D. 水浴完成后，将切片用蒸馏水洗3次，加入0.5%的(NH4)2S溶液，放置1-2 min后，再次用水将切片洗净；E. 将切片转移至载玻片上后，进行镜检。2、新鲜青菜根系的酸性磷酸酶组织定位：A. 将完整的青菜根系用蒸馏水清洗干净，放入装有PBS（磷酸缓冲液，

3、PH=7.2）的烧杯中，在室温下放置5 min；B. 将根系放入1%的邻苯二酚液中，在37下水浴1h-2h;C. 水浴过后将根系取出，观察并拍照。五、实验结果与分析1、新鲜蒜苔的酸性磷酸酶组织定位：  将蒜苔进行徒手切片：将切片放入底物溶液中进行水浴：在10×的放大倍数下对切片进行观察：在视野中很明显有棕黑色的地方，说明蒜苔切片中酸性磷酸酶的主要分布区即为如图所示的棕色部分。在40×的放大倍数下对切片进行观察：观察到在蒜苔细胞的细胞质中，出现许多棕色或棕黑色的颗粒和斑块。部分细胞内，酸性磷酸酶极为丰富。整个细胞质区域都有黑色沉淀。也有部分细胞呈现阴性反应。2、新鲜青菜根系的酸性磷酸酶组织定位：将根系加入邻苯二酚中进行水浴：加入邻苯二酚的根系（左）与自然状态下根系（右）进行对比：我们可以很容易地观察到左边的根系颜色明显为棕红色或褐色，而右边的自然状态下的

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