动物细胞核的分离与鉴定

1、动物细胞核的分离与鉴定动物细胞核的分离与鉴定赵麒麟：0910150434张耀镭：0910150441邓江岳：0910150436黄小江：0910150440黄 华：09101504232009级临床4班19561956年由年由ChauveauChauveau等人提出，用高等人提出，用高密度介质来分离细胞核，由于细胞密度介质来分离细胞核，由于细胞核密度较大，在高密度介质中，在核密度较大，在高密度介质中，在高速离心的条件下沉降下来，从而高速离心的条件下沉降下来，从而达到细胞核与细胞质的分离达到细胞核与细胞质的分离。本次实验就是各种细胞器在一定本次实验就是各种细胞器在一定介质中沉降速度的差异，用离心

2、介质中沉降速度的差异，用离心的方法将细胞核分离出来的方法将细胞核分离出来细胞核细胞核-线粒体线粒体-溶酶体和其他溶酶体和其他微体微体用柠檬酸分离细胞核，在柠檬酸介质用柠檬酸分离细胞核，在柠檬酸介质中可以显著除去附着在细胞核膜上的中可以显著除去附着在细胞核膜上的细胞质成分，由于柠檬酸降低了溶质细胞质成分，由于柠檬酸降低了溶质的的pH，这样可减少细胞核的破碎率。，这样可减少细胞核的破碎率。解剖器材解剖器材1套套 高速捣碎机高速捣碎机/组织匀浆器组织匀浆器1台台 普通离心机普通离心机1台台 天平天平1台台 普通光学显微镜普通光学显微镜1台台0.9%生理盐水生理盐水 1.5柠檬酸钠柠檬酸钠 （0.25

3、mol/L+1.5%）蔗糖）蔗糖+柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 （0.88mol/L+1.5%)蔗糖蔗糖+柠檬酸钠溶液柠檬酸钠溶液 1%甲苯胺蓝甲苯胺蓝实验步骤实验步骤1.实验前实验前24小时小动物须保持空腹，然后将小时小动物须保持空腹，然后将其断头处死，取出肝脏，在生理盐水充分洗其断头处死，取出肝脏，在生理盐水充分洗去血污，用滤纸洗吸取表面液体，肝脏保存去血污，用滤纸洗吸取表面液体，肝脏保存待用。待用。2.取取1g肝脏剪成小块，按肝脏剪成小块，按1：10（重量：体积）（重量：体积）加入加入1.5%柠檬酸钠溶液，用组织捣碎机（组柠檬酸钠溶液，用组织捣碎机（组织匀浆器）破碎细胞（注意保护细胞核）。织

4、匀浆器）破碎细胞（注意保护细胞核）。3. 3.把捣碎液用把捣碎液用8 8层纱布（先用少量生理盐水润洗层纱布（先用少量生理盐水润洗纱布）过滤，绿叶以纱布）过滤，绿叶以800ymp/min800ymp/min离心离心1515分钟，分钟，弃上清液，沉淀再用弃上清液，沉淀再用1.5%1.5%柠檬酸钠液洗一次。柠檬酸钠液洗一次。4. 4.将沉淀再悬浮于将沉淀再悬浮于10ml0.25mol/L10ml0.25mol/L蔗糖蔗糖+1.5%+1.5%柠柠檬酸溶液制成悬液，将离心管预先加好檬酸溶液制成悬液，将离心管预先加好20ml0.88mol/L20ml0.88mol/L蔗糖蔗糖+1.5%+1.5%柠檬酸液，

5、并将上述柠檬酸液，并将上述悬液置于悬液置于0.88mol/L+1.5%0.88mol/L+1.5%柠檬酸溶液，以柠檬酸溶液，以1000rmp/min1000rmp/min离心离心1010分钟。分钟。5. 5.取上清液制成涂片，沉淀制成涂片取上清液制成涂片，沉淀制成涂片，自然干燥后分别滴加甲苯胺蓝染液，自然干燥后分别滴加甲苯胺蓝染液，染色染色5757分钟分钟。6. 6.洗涤，晾干，镜检，描述结果洗涤，晾干，镜检，描述结果操作流程简图操作流程简图取动物取动物肝脏洗肝脏洗涤待用涤待用取取1g肝脏按肝脏按1：10加入加入 柠檬酸柠檬酸钠溶液，捣碎钠溶液，捣碎过滤，过滤，8000rmp/L离离心心15分钟，弃分钟，弃上清液再用上清液再用1.5%柠檬酸钠柠檬酸钠再洗一次再洗一次沉淀加沉淀加10ml0.25mol/L蔗糖蔗糖+1.5%柠檬酸溶液柠檬酸溶液制成悬液制成悬液20ml0.88mol/L蔗糖蔗糖+1.5%柠檬柠檬酸液，并将上述悬液置于酸液，并将上述悬液置于0.88mol/L+1.5%柠檬酸溶液，柠檬酸溶液，以以1000rmp/min离心离心10分钟分钟。制涂片，制涂片，染色