乳腺癌组织中耐药基因蛋白表达的相关研究

1、乳腺癌组织中耐药基因蛋白表达的相关研究         【摘要】  目的 探讨多药耐药基因P-gp、LRP、TOPO在化疗前乳腺癌组织的表达及其与ER、PR、CerbB-2及淋巴结转移之间的相关性。方法 采用免疫组化SP法检测76例乳腺癌组织中ER、PR、CerbB-2、P-gp、LRP、TOPO的表达水平。 结果 P-gp、LRP、TOPO在化疗前乳腺癌中的表达率分别为28.9%(22/76)、84.2%(64/76)和80.3%(61/76)。LRP、TOPO与CerbB-2之间存在正相关关系，LRP

2、、TOPO与ER、PR之间无相关，P-gp与ER、PR及CerbB-2之间均无相关性。有无淋巴结转移对耐药相关基因LRP、P-gp、TOPO的表达无显着性影响。 结论 P-gp、LRP、TOPO与乳腺癌原发MDR的发生有相当关系，CerbB-2基因可能也参与了MDR基因的调节机制。 【关键词】  乳腺癌 多药耐药 免疫组织化学【Abstract】  Objective  To investigate the expression of  multidrug  resistance genes P-gp, LRP,TOPOin breast ca

3、ncer before chemotherapy, and evaluate their relations with ER, PR, CerbB-2 and lymphatic metastasis. Methods  Immunohistochemical staining (S-P method ) was used to detect  the  expression of  ER, PR, CerbB-2, P-gp, LRP,TOPO in 76 cases of  breast cancer. Results  The

4、expression rate of P-gp, LRP,TOPOin breast cancer before chemotherapy was 28.9%(22/76), 84.2%(64/76), 80.3%(61/76) respectively, The expression of  LRP, TOPO and CerbB-2  show  positive  correlation, The expression of LRP,TOPO show no correlation with the expression of ER  a

5、nd PR, and the expression of P-gp also show no correlation with the expression of ER , PR and CerbB-2.Lymphatic metastasis or not show no significant effect on  the expression  of LRP, TOPOand P-gp. Conclusion  Genes P-gp, LRP,TOPO may be involved in the  primary MDR of breast ca

6、ncer and gene CerbB-2 may correlate with the regulatory machanism of MDR genes.【Key Words】  breast cancer  multidrug resistance  immunohistochemistry  乳腺癌是女性易患的恶性肿瘤之一，并且其发病率呈逐年上升趋势，严重危害广大妇女的健康。化疗和内分泌治疗是临床上常用的治疗手段，但多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致乳腺癌化疗及内分泌治疗失败的重要原因。目前发现了一些与化

7、疗及内分泌治疗耐药相关的基因。作者应用免疫组织化学方法检测P糖蛋白(P-gp)、DNA拓扑异构酶II ( topoisomerase II ,Topo II )、肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP )在化疗前乳腺癌组织中的表达，并探讨其相互之间及其与雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、癌基因CerbB-2以及有无淋巴结转移之间的相关性，为判断预后及临床治疗提供依据。1  材料与方法1.1  一般资料 收集本院2003 至2005年的乳腺癌手术标本共83例，术前均未经过化疗及放疗。均为女性；年龄2869岁。其中浸润性导管癌74例，

8、浸润性小叶癌2例，导管内癌4例，粘液腺癌2例，小管癌1例。考虑到其中导管内癌、小管癌和粘液腺癌恶性度较低，相对预后较好，为更好地观察研究结果，故将其从研究组中剔除，实际例数是76例，其中伴有淋巴结转移35例，无淋巴结转移41例。1.2  检测方法 选用P-gp、LRP、TOPO、ER、PR、CerbB-2共6项指标，采用免疫组化SP 法检测癌组织中的表达。所有单抗及SP试剂盒均购自福州迈新公司，操作步骤按试剂盒说明书进行，DAB显色，苏木素复染。1.3  结果判断 阳性结果为癌细胞中出现棕黄色颗粒。LRP阳性颗粒位于胞浆中，P-gp阳性颗粒位于胞膜及胞浆

9、中，TOPO阳性颗粒定位于细胞核中。阳性细胞10%为阴性，10%25%为+，25%75%为，75%为。+为低表达，为高表达。1.4  统计学处理 运用SPSS统计软件，对有、无淋巴结转移两组进行卡方检验，并对上述指标进行等级相关分析。2  结果2.1  乳腺癌组织中各项指标的表达情况见表1。对3种耐药相关基因的表达与ER、PR、C-erbB-2之间进行相关分析，结果显示：LRP、TOPO与CerbB-2之间存在正相关关系(P0.01)； LRP、TOPO与ER、PR之间无相关关系，P-gp与ER、PR及CerbB-2之间均无相关性。表1  乳腺

10、癌组织中P-gp、LRP、TOPO、ER、PR、CerbB-2的表达情况 (略)2.2  乳腺癌组织中各项指标的表达与淋巴结转移的关系见表2。结果显示：有无淋巴结转移对耐药相关基因LRP、P-gp、TOPO的表达无显着性影响，两组比较无统计学意义。表2  两组乳腺癌组织中P-gp、LRP、TOPO的表达情况(略)         3  讨论   P-gp是多药耐药基因产物，为多药耐药细胞膜上一种分子量为170 ku的跨膜糖蛋白，作为“药泵”功能引起癌细胞产生耐药而参

11、与多种肿瘤的多药耐药机制，。Burger等认为P-gp的高表达是乳腺癌的不良预后指标。目前倾向认为P-gp表达是不依赖于肿瘤细胞增殖的独立指标。P-gp表达与化疗敏感性有密切关系。Verrelle等检测原发性乳腺癌化疗前P-gp水平，并随访其化疗疗效，发现两者明显负相关。本研究发现，P-gp在化疗前乳腺癌组织中有一定的表达，说明其在乳腺癌的原发耐药中亦有重要作用。   LRP肺耐药蛋白(lung resistance protein,LRP)基因是1995年由Scheffer等克隆得到，它定位于染色体16p11.2 ，编码的蛋白质LRP由896个氨基酸组成，相对分子质量约为

12、1.1×105。LRP主要介导顺铂和烷化剂等药物耐药，可表达于许多肿瘤组织中，其表达程度的强弱反映不同癌组织的化疗敏感性。本研究发现LRP在乳腺癌组织中有较高的表达率(84.2%)，是3种耐药相关基因中表达率最高的，其升高可能是乳腺癌原发多药耐药的主要机制。有文献报道单一LRP基因的导入并不产生多药耐药基因表型，LRP完成耐药机制可能与其他成分有关。   Topo在DNA复制、转录和染色体分离中起着重要作用。与Topo II有关的化疗药物有表鬼臼毒素、葱环类、葱醌类。目前研究主要集中于Topo与MDR的关系。Jarvinen等观察到Topo的表达与处于S期的肿瘤细胞数、DNA非整倍体及CerbB-2的水平呈显着正相关，提示Topo可能与肿瘤的增殖能力及远处转移有一定关系。Sandri等发现Topo在乳腺癌中的表达具有预后意义，但与肿块大小、淋巴结转移、雌孕激素受体等无明显相关，与肿瘤细胞增殖状况呈正相关，即SPF值(S-phase fraction，代表DNA合成活跃的肿瘤细胞百分比)越大，Topo总体表达水平越高。本