东亚钳蝎提取物对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用

1、东亚钳蝎提取物对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用                             作者：黄迎春，张铁钢，林强，韩永平【摘要】  目的研究东亚钳蝎提取物BmKE及其醇提部位（BmKEA）对四氯化碳诱导的小鼠肝损伤的保护作用及其作用机理。方法BmKE、BmKEA、阳性对照VE灌胃第5天，

2、小鼠腹腔注射四氯化碳造成急性肝损伤，测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT），天冬氨酸转氨酶（AST）的活性和丙二醛（MDA）含量的变化。结果BmKE及BmKEA预处理和后，肝损伤小鼠血清中ALT，AST活性均有所下降，其中，BmKEA高、中剂量组达到显著性差异（P<0.05）。BmKE低剂量组和BmKEA所有处理组血清中MDA含量极显著下降（P<0.001）。结论BmK及BmKEA通过减少肝细胞ALT和AST的泄漏，减少脂质过氧化而保护肝脏免受损伤，BmKEA是抗氧化的活性部位。 【关键词】  东亚钳蝎提取物； 肝损伤AbstractObjectiveTo study th

3、e protective effect of extract from Buthus martensic Karch(BmKE) and the fraction separated using alcohol(BmKEA) on liver injury induced by carbon tetrachloride(CCl4) in mice and its mechanism. MethodsMice were administrated with BmKE and BmKEA with high,middle and low dosages, positive control(Vita

4、minE) for 5d,respectively, and then acute liver injury was induced by 0.5% CCl4 ip 0.1 ml×kg-1. The mice were killed 36h after CCl4 treatment. Alanine aminotransferase and aspartate aminotransferase(ALT and AST) activities in serum were measured. Maleic dialdehyde(MDA) in serum was detected.Res

5、ultsThe high and middle dosages of BmKEA significantly reduced the levels of ALT and AST(P<0.05)in serum. BmKEA remarkedly decreased the content  of MDA(P<0.001) in serum.ConclusionThe BmkE and BmKEA can protect carbon tetrachloride-induced liver injury in mice by reducing the leakage of

6、ALT and AST from the liver cells and lipid peroxidation. The BmKEA is active part of antioxidation.Key wordsButhus martensic Karch;  Liver injury;  Antioxidation    东亚钳蝎Buthus martensii Karsch，BmK，属节肢动物门，蛛形纲，蝎目，钳蝎科，是在蝎群中分布最为广泛的一种，是传统的药用动物，中医以完整的干燥虫体入药，称为“全蝎”或“全虫”。其性平、味腥、有毒，有

7、祛风、止痉、通络、解毒功能，可治疗惊风抽搐、癫痫、中风、半身不遂、口眼歪斜、偏头痛、破伤风、淋巴结核和风疹疮肿等症。药理研究表明，蝎子对心脑血管疾病和多种类型的癌症也有一定的疗效，对预防许多慢性病有显著的效果1。由于受到中医“药食同源”的理论的影响，现在人们也把它作为一种功能食品搬上了餐桌。一般认为蝎子对机体作用的主要成分是蝎毒2。近年，有人研究蝎子生长过程中的代谢产物蝎皮，并且发现其蛋白组分具有免疫调节药理活性和对T/B淋巴细胞转化具有显著促进作用3，4。本研究在建立小鼠四氯化碳肝损伤模型的基础上，用去掉蝎尾毒腺的东亚钳蝎提取液（BmKE）及其醇提部位（BmKEA）进行预防和治疗，以观察Bm

8、KE和BmKEA的保肝降酶和抗氧化作用。1  材料和方法1.1  提取物的制备及使用剂量首先用剪刀剪掉蝎子尾部的毒腺，将剩余的部分剪碎在液氮中研磨碎，然后加入10%的无菌葡萄糖溶液，充分摇匀，在03冷藏静置2 h，取上清液冷冻干燥，4冰箱保存，此为东亚钳蝎提取物（BmKE）。用50%乙醇在4抽提4 h，4，8000 r/min，离心20 min，取上清液冷冻干燥，4冰箱保存，此为BmKE醇提部位（BmKEA）。使用剂量， BmKE高剂量（36 g/kg）、中剂量（18 g/kg）、低剂量（9 g/kg），BmKEA是BmKE的1/36，高剂量（1 g/kg）、中剂量（0.5

9、 g/kg）、低剂量（0.25 g/kg）。1.2  动物ICR小鼠（二级），雄性，体重1822 g，购自北京大学医学部实验动物部。饲养在洁净动物房，合格证号为：京动许字（1999）第042号，笼具用过氧乙酸溶液消毒，温度（22±2），湿度40%70%，光照，自由进食与饮水，饮用水为净化水。1.3  阳性对照药维生素E，北京双鹤药业医药技术有限责任公司产品。生产批号030602，密封，在干燥处保存，用前用吐温80乳化，蒸馏水稀释。1.4  急性肝损伤实验取健康ICR雄性小鼠，随机分为正常对照组，四氯化碳模型组，不同剂量的给药保护组，每组10只，实验开始先

10、灌胃给药，1次/d。正常对照组，模型组小鼠分别用蒸馏水（0.3 ml/只），VE阳性药组予VE阳性药（0.1 mg/只），BmKEA组分为BmKEA大剂量组（20 mg/只），中剂量组（10 mg/只），小剂量组（5 mg/只）。实验第5 d，除正常组外，其余各组腹腔注射0.5%CCl4-橄榄油0.1 ml/kg。诱导产生小鼠急性肝损伤模型。造模型后36 h将小鼠全部处死。处死前15 h禁食，但不禁水，小鼠在末次给药后1 h取眼球放血处死，分离血清后测ALT，AST的活性和MDA含量。1         1.5&#

11、160; 测定分析方法ALT，AST活性的测定采用ALT、AST测定试剂盒，在TRACECB171自动生化分析仪上测定（日本岛津），血清MDA含量的测定采用MDA测定试剂盒。以上试剂盒购自南京建成生物工程研究所。1.6  统计学分析组间比较采用Cochran & Cox近似t检验，实验数据用±s表示，P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著。2  结果2.1  BmKE及BmKEA对血清ALT活性的影响小鼠在处死前36 h腹腔注射CCl4诱导小鼠急性肝损伤，并在小鼠末次给药后1 h取眼球放血处死，分离血清，检测血清ALT的活性

12、。结果见表1。由表1可见四氯化碳(CCl4) 所致急性肝损伤小鼠血清ALT活性与正常对照组小鼠比较，ALT的活性明显升高(P<0.001)；维生素E组阳性药对照组的ALT活性与急性肝损伤模型组比较，降低明显(P<0.05)；可能是因为其他杂质的影响，BmKE的高剂量组血清ALT活性虽然降低，但是没有达到显著性差异，中，低剂量组及BmKEA高、中、低剂量组血清ALT活性，分别较模型组降低明显，有显著性差异（P<0.05）。表 1  BmKE及BmKEA对血清ALT(U%)活性的影响(略)2.2  BmKE及BmKEA对血清AST活性的影响四氯化碳(CCl4)

13、 所致急性肝损伤小鼠血清AST的活性与正常对照组小鼠比较AST的活性明显升高(P<0.001)；维生素E组阳性药对照组和BmKE各剂量组以及BmKEA低剂量组的AST活性与急性肝损伤模型组比较，AST活性有所降低，但是均未达到显著性差异；BmKEA高、中剂量组血清AST活性，分别较模型组降低明显，有显著性差异（P<0.05）。表 2  BmKE及BmKEA对血清AST(U%)活性的影响(略)2.3 BmKE及BmKEA对血清MDA含量变化的影响模型组的MDA含量与正常对照组比较，MDA含量升高显著，(P<0.001)；维生素E组与模型组比较， MDA含量下降显著，(

14、P<0.05)；BmKE高、中剂量组及BmKEA中剂量组血清MDA含量分别较模型组降低显著，P<0.05；BmKE低剂量组，BmKEA高、低剂量组血清MDA含量分别较模型组降低极显著，P<0.01。表3  BmKE及BmKEA对血清MDA含量的影响(略)3  讨论    CCl4对肝脏细胞的毒性是多方面的，如使肝细胞内的ALT、AST释放，引起血清中ALT和AST的大大增加，使肝细胞内质网膜上的脂质引起过氧化反应，造成细胞膜结构和功能的损害，MDA是脂质过氧化反应的最终产物，被作为自由基产生的间接指标5。  

15、;  本研究显示，BmKE及BmKEA均能够显著降低CCl4诱导的肝损伤模型血清中的ALT和AST的活性，这是由于BmKE和BmKEA阻止了肝细胞内ALT和AST的释放，从而达到保肝降酶的作用。BmKE和BmKEA能够极显著降低血清中MDA的含量，表明BmKE和BmKEA能够稳定细胞膜结构，减轻脂质过氧化对细胞膜造成的损伤。这可能是因为在脂质过氧化反应中，BmKE和BmKEA阻止了自由基连锁反应，使生物膜磷脂中的不饱和脂肪酸未受到氧化，而不能生成过氧化脂质，从而产生抗氧化作用。实验结果表明，BmKE的醇提部位BmKEA是抗氧化的活性部位。【】  1吴英良.我国全蝎及其有效成分的药理毒理研究及临床应用进展J.中草药，1995， 26（2）：97.2赵渤. 蝎子、蜈蚣养殖实用技术M.北京：农业出版社，2002：6