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文档简介
1、 二、实验器材与试剂 1. 器具: 显微镜 离心机 天平 离心管 细滴管 载片、盖片 酒精灯 试管 2 试剂: 50%聚乙二醇(PEG:称取一定量的PEG(MW=4000放入刻度试 管中在 至 酒精灯火或沸水中加热溶化。待冷至50时,加入等体积并预热 50的GKN液混匀。 Alsver液:葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.8g NaCl 0.42g,加重蒸水至100ml。 GKN 液:NaCl 8g,KCl 0.4g,Na2HPO4.2H2O 1.77g, NaH2PO4.2H2O 0.69g,葡萄糖2g,酚红0.01g,溶于1000ml重蒸水中。 0.85%NaCl液 三、实验内容及方法 1.用
2、注射器取2ml Alsver液,再从翼下静脉取鸡血2ml,注入 管内,再加6ml Alsver液,混匀后置4冰箱中可备作3-4 用。 2. 实验时取“1”液1ml于离心管中,加入4ml 0.85%的NaCl 液,混匀平衡后以1200rpm离心5min。 3. 去上清液。再重复“2”两次,最后一次离心10min。 4. 在沉降血球中加入1mlGKN液,混匀使之成为细胞悬液。 5. 在“4”液中加入68滴(约0.5ml)50%的PEG液,迅速 混匀,常温下2-3min滴片镜检。 v 四、结果观察 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡血细胞膜 融合在一起,形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞 与重叠的鸡血细胞。 v 五、融合率的计算 在高倍镜下随机计数200个细胞(包括融合的与未融合 的细胞,以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞
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