乳与乳制品非常规理化指标检验维生素AE的检测

1、YLNB 5.101. 范围用液相色谱法测定各种婴幼儿配方食品和乳粉中的维生素 A、E。2. 方法提要样品中脂溶性维生素在皂化过程中与脂肪分离，经（用）乙醚萃取后，用高压液相色谱，紫外检测器定量测定。3. 试剂所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水， 如未注明其他要求，均指三级水。3. 1乙醚：脱醛3. 2甲醇：色谱纯3. 3异丙醇：色谱纯3. 4无水乙醇：色谱纯3. 5无水乙醇：分析纯3. 6氢氧化钾溶液：质量体积比为 500g/L3. 7抗坏血酸：100g/L3. 8无水硫酸钠：分析纯3. 9维生素A、E标准溶液3. 9 . 1维生素A标准贮备液，取适量维生素 A醋酸酯同5.2处

2、理。3. 9. 2维生素E标准贮备液，含维生素 E400g/mL的乙醇 （3.4 ）溶液。称取40mg勺a -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。称取40mg勺8 -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。称取40mg勺丫 -生育酚，用乙醇（3.4）溶解并定容于100mL容量瓶中。3. 9. 3维生素A E标准工作液。量取1mLL隹生素A标准贮备液（3.9.1 ）和2.5mL维生素E 标准贮备液（3.9.2 ）于100mL容量瓶中，用乙醇（3.4 ）溶 解，0.45卩m滤膜过滤，滤液作为标准工作溶液。按照下表中的波长在紫外分光光度计上测定吸收值，并 按公式（

3、1）和表中系数计算浓度。标样波长（nm）系数（S）维生素A (IU/ml)3253.33/1835a -生育酚（卩g/ml）294718 -生育酚（卩g/ml）29891.2Y -生育酚（卩29892.8g/ml）A 10000SC（IU/ml 或 口 g/ml）=公式（1）式中：C标样浓度，IU/ml或p, g/mlA在紫外分光光度计上测得的吸光值S系数4. 仪器及器材常用实验室仪器及：4. 1圆底烧瓶：250mL。4. 2分液漏斗：500mL。4. 3旋转蒸发仪。4. 4摇床水浴锅。4. 5高压液相色谱仪：具有可变波长的紫外检测器、数据 处理系统或记录仪。4. 6紫外分光光度计。5. 方法

4、5. 1样品处理精确称取5.0000g样品（液态奶20ml），置于250mL磨口 三角瓶中，用水润湿。5. 2测定液的制备皂化：于上述处理的样品中加入 50mL乙醇溶液（3.5 ）, 充分混匀后加15mL氢氧化钾溶液（3.6 ），再加入5ml抗坏血 酸溶液（3.7 ），在90C水浴锅中连续回流30min后，立刻冷 却到室温。5. 2 . 2转移：将皂化液定量转移到500ml分液漏斗中，用少量水分几次冲洗磨口三角瓶，洗涤液并入分液漏斗中。5. 2. 3萃取：于上述分液漏斗中，加入 100ml乙醚（3.1 ）, 盖好瓶塞，倒置分液漏斗并剧烈振摇1min，在振摇过程中，注意释放瓶内压力。静置分层，将

5、水相放入另一500ml分液漏斗中。重复上述萃取过程，合并醚液到第一个分液漏斗中。 用蒸馏水洗该醚液至中性（用 pH试纸测定），通过无水硫酸 钠过滤干燥，在50C水浴和氮气流下，于旋转蒸发器上蒸至 近干（绝不允许蒸干）,取下，用氮气吹干，用无水乙醇（3.4 ） 定量转移至50ml容量瓶中，定容，0.45卩m滤膜过滤，滤液 作为样品溶液。5. 3测定5. 3. 1维生素A和E的测定5. 3. 1. 1仪器条件色谱柱：C18 , 250mn¥ 4.6mm, OD柱或具等同性能的色 谱柱。流动相：甲醇：水（98 : 2 ）。流速：1.0mL/min 。灵敏度：0.005AU/MV。波长：维生素A, 325nm 维生素E, 290nm。5. 3. 1. 2注射20卩L维生素A、E标样（3.9.3 ）和20卩L样 品溶液（5.2.3 ），得到标样和样品溶液中维生素 A和E的峰 面积。6. 结果计算样品中维生素 A（ IU/100g）= As Csd v I。Asdx m样品中维生素 E（ mg /100g） = As Csd v 100Asd>< m式中：m样品的质量， g；A样品中维生素A或E的峰面积（或峰高）；Ad标样中维生素A或 E的峰面积（或峰高）；Csd标样中维生素 A或 E的浓度