假单胞菌属PseudomonasMigula的检验

1、假单胞菌属Pseudomonas Migula的检验G"，直或微弯的杆菌，0.5-1.0 X 卩m。多单在。不产芽孢。以单极或数根极毛运动，有的种还具短波长的侧毛。严格需氧。不能在酸性下(pH4.5 )生长，多数种不需要有机生长因子。化能异养，有的种利用H2或CO为能源兼性化能自养。接触酶阳性，产生各种水溶性色素。自然界分布极广，土壤、淡海水、污水、动植物体表等均存在。引起疾病(Pseudomonas Disease)的有绿脓杆菌、荧光假单胞菌、鳗败血假单胞菌和恶臭假单胞菌等。(一)铜绿假单胞菌(P. Aerugi nosa )原称绿脓杆菌。在自然界分布广泛，为土壤中存在的最常见的细

2、菌之一。各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在。易从外伤、烧伤及尿道感染的标本分离。本菌存在的重要条件是潮湿的环境。1形态及染色特征铜绿假单胞菌为非发酵革兰氏阴性菌，菌体细长，长短不一，呈球杆状或线状，成对或短链状排列。菌体一端单鞭毛，暗视野或相差显微镜下可见细菌运动 活泼。2生长特性专性需氧，生长温度 2542 C，最适2530 C, 4C不生 长，42 C可生长，可用以鉴别该菌。普通培养基上生长1824h可见扁平、湿润的菌落，能产生水溶性的色素，如绿脓素(pyocynin )与带荧光的水溶性荧光素(pyoverdin )等，使得培养基呈亮绿色。血琼脂平板生长可见菌落周围有溶

3、血环，菌落呈金属光泽；液体培养基呈浑浊状生长，液体表面形成菌膜， 培养基底部生长不良。3生化特点该菌氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气，但不分解乳糖和蔗糖。液化明胶、可分解尿素，还原硝酸盐为亚硝酸盐并产生氮气。吲哚阴性，利用枸橼酸盐，精氨酸双水解酶阳性。4抗原性与分型该菌含0抗原（菌体抗原）及 H抗原（鞭毛抗原）。0 抗原包含两种成分：一种是其外膜蛋白，为保护性抗原； 另一种是脂多糖，有特异性。0抗原可用以分型。（1） 噬菌体分型：所应用的噬菌体现有24株，分型率达90%（2）血清学分型：利用 O抗原进行分型，目前可分 20个 血清型。（3）质粒指纹图分析：此项技术是对同种细菌的不

4、同株进行同源性分析的一种方法。根据细菌携带质粒的情况进行分析。5微生物学检查标本采集：采自不同感染部位的各种标本，包括血液、尿液、痰标本、脓汁、穿刺液等。还包括来自环境中的各种标本如水、空气、物体表面等。涂片镜检：革兰阴性，菌体大小 1.5-5.0 X 0.5-1卩m。菌体的一端有单鞭毛，无芽胞。分离培养：对有正常菌群存在的临床标本或采自环境中的标本应接种选择性培养基：麦康凯琼脂（MAC）;对无正常菌群存在的临床标本如血液、脑脊液、穿刺液等可接种普通或血琼脂培养基。（二）椰毒假单胞菌酵米面亚种椰毒假单胞菌酵米面亚种（ Psedomonas cocovenenanssupsp. farino f

5、ermentans ）是我国发现的一种新的食物中毒菌，它存在于发酵的玉米、糯玉米、黄米、高梁米、变质银耳以及周围环境中，它是酵米面及变质银耳中毒的病原菌。该菌产生的毒素米酵菌酸是其致病原因。1形态及染色特征革兰氏阴性短杆菌，大小为1.5-4卩卩m,直或微弯的需氧杆菌。细胞呈卵圆、短杆状以至长杆状形态。两端钝圆，无芽胞，有鞭毛。兼性厌氧，但易在 表面生长。胞浆中含浓染颗粒及空泡。在透射电镜下观察，可见异染颗粒、脂质颗粒、板层状内膜结构等特殊结构。假单胞菌属为有机化能异养菌，代谢为呼吸而非发酵, 有些是兼性化能自养菌，能利用H2或CO2为能源。分子 氧是普遍的电子受体，有些能脱氮而利用硝酸盐为替代

6、 的受体。除能利用脱氮作用以厌氧呼吸的一些外 ，均为严格或专 性需氧菌。菌苔虽不明显呈色，但部分菌可产生水溶性色 素和荧光色素。2生长培养特性椰毒假单胞菌的某些菌株在有硝酸盐环境中可呈厌氧生长营养要求不严格，几乎所有菌群在铵盐和单一碳源环境中均可生长。生长温度为 2537C ,最适生长温度为 37 C ,最适产毒温度为26 C。PDA平板上生长，菌落大小为12mm呈乳白色或灰白色 光滑、湿润、边缘整齐；培养48h后，中心有突起，呈草帽 状或放射状花纹；菌落周围有黄绿色素产生，并扩散到基 质中。在365nm紫外灯下有黄绿色荧光。卵黄琼脂平板上 生长,菌落表面光滑、湿润,48h后,菌 落周围形成乳

7、白色浑浊环，斜射日光下可见环的表面呈 虹彩现象。S.S琼脂平板不生长。以脱脂椰肉为基质，接种椰毒假单胞菌,30 C下培养4d 产生的米酵菌酸，可溶于石油醚中，用PHS的水萃取后调 pH至23,可再用石油醚或乙醚萃取，如此反复可得到较 纯净的米酵菌酸。3生化特性假单胞菌氧化糖类只产生少量的酸。蛋白胨糖水不适用于测定酸的产生。因为产生的酸常被蛋白胨分解产生的碱所中和。用铵盐培养基易测定酸的产生。因在该培养基中糖是唯一碳源。过氧化氢酶阳性。假单胞菌能产生和分泌许多胞外酶 ，包括蛋白酶、脂酶、卵磷脂酶等。明胶酶的产生对其分类很重要。4抵抗力在PDA上生长的椰酵假单胞菌，对金霉素、土霉素、四 环素、庆大

8、霉素较为敏感，对青霉素、红霉素、合霉素、 氯霉素、新霉素具有很强的抗性。椰酵假单胞菌对一般常用的消毒剂都很敏感，但鉴于许多消毒剂本身的毒性和残留问题，仅可用于实验室消毒。 亚硫酸氢钠对椰酵假单胞菌具有较强的抑菌和杀菌作用,可用于某些食品加工过程的消毒。5抗原构造椰酵假单胞菌具有 O K、H3种抗原。很少发生交叉反应。O抗原为菌体抗原，耐热,凝集反应出现较慢，聚集物呈颗粒状。H抗原为鞭毛抗原，不耐热，凝集反应发生迅速，凝块呈疏松絮状。K抗原为表面抗原。在3种抗原中，研究得最多的是 O抗原。迄今已证实该菌具有7种O抗原因子，划分为6种O抗原型。椰毒假单胞菌的血清型目前有 0-川、0-W、0-V 、0-W 、 O-W 、 0-忸等。产毒与血清型有关，已知o-v、o-w、o-m 产毒。6致病因素此菌产生毒黄素和米酵菌酸两种外毒