水产口服疫苗研究进展.docxVIP

1、必述摘杵"综文水产口服疫苗研究进展黄钧I,施金谷"，陈明二黄艳华I（1.广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005；2.广西壮族自治区水产研究所，广西南宁530021）中图分类号：S942.5文献标识码：B每年全球对鱼产品的消费最约为12亿吨，从1980年开始，水产养殖业为全球渔业产业提供的水产品以每十年两倍的速度增长，并且有不断上升趋势。为了满足不断增长的水产品需求，集约化养殖业迅猛发展，随之带来的是养殖环境不断恶化、病害频发肆虐、病原耐药性增强、药物残留等制约水产养殖业健康发展和危害消费者健康等诸多问题。因此，水产养殖行业急需一种及时有效、可持续发展、经济适用的疾病

2、防治方法。1942年，随着Duff首次将杀鲤气单胞菌（Aeromonas.Salmonici-da）的灭活口服疫苗应用于硬头鳄并获得成功后，意味着一种新的鱼病防治方式开启。随后，国内外不少学者对疫苗在鱼类中的应用进行了大最的研究开发，特别是近年来，随着对鱼类肠道粘膜免疫系统机制研究的不断深入，抗原载体的不断研发，抗原包裹技术的不断完善,鱼类口服疫苗研究取得了一定进展。本文仅对水产口服疫苗的研究进展做一综述。1鱼类肠道免疫机理11鱼类肠道粘膜免疫的细胞及应答鱼类的肠道主要包含固有层和上皮层，巨噬细胞、粒细胞、嗜碱性粒细胞等白细胞主要分布在固有层，上皮层中则较为少见，但鲤鱼肠道上皮层中分布有大量T

3、淋巴细胞（Ig-）,固有层中为B淋巴细胞（I厂）。在舌齿鳞肠道中，1厂密度大于Ig',且主要存在于肠上皮中，越是靠近肛门，淋巴细胞的数量就越多，表明鱼类的后肠具有更高的免疫相关性。Companjen也证实了鱼类后肠为抗原的主要吸收和加工的部位，抗原可在后肠被巨噬细胞吞噬，诱导产生免疫应答。一般认为，可溶性抗原较颗粒性抗原更容易被吸收，相应地也更容易被降解，运用包裹技术制成的可溶性微囊可减基金项目：广西科学研究与技术开发计划项目（桂科攻1123006-4）。文章编号：1002-5235（2013）01-0055-03缓抗原的降解，持续性释放抗原，从而引起更强的免疫应答。通常认为，口服疫苗

4、引起的免疫反应主要是以粘膜免疫为主，它对鱼类疾病的防御起到决定性作用，但对于鱼类粘液免疫运转机制目前尚未清楚。鱼类虽然缺乏如哺乳动物淋巴集结（Peyer节）等的肠道相关淋巴组织（GALT）,但却具有大量的淋巴细胞。抗原在进入肠道后，小分子或可溶性物质经细胞间隙渗透进入血液，大分子颗粒则被巨噬细胞吞噬后呈递给相关淋巴组织，从而引起机体进一步的免疫反应。鲤鱼的肠细胞与哺乳动物中GALT的M细胞类似，能将抗原从肠道上皮转移到淋巴聚集部位，通过胞饮和内吞作用,将抗原呈递到巨噬细胞和外周组织中。大分子蛋白或细菌抗原则主要经后肠上皮细胞吞饮吸收。有研究证明，前肠及后肠等组织的粘膜具有能够独立完成免疫应答的

5、细胞基础，口服免疫不仅能引起粘膜免疫，还能引起系统免疫，口服免疫灭活的食果糖乳杆菌可使黑躺肠道内I”淋巴细胞数量和游走于身体各部位的嗜酸性颗粒细胞（EGC）数量显著增加U0-,21o表明口服免疫不仅能够诱导抗体介导的免疫应答,还能够诱导包括细胞免疫在内的全身性免疫反应。12鱼类肠道免疫分子哺乳动物主要组织相容性复合体（MHC）是外源性抗原呈递的主要物质。在很多真骨鱼类中也能克隆到大量MHC-2的cDNA,同时MHC-2的mRNA可在大西洋锥鲤中大量表达，免疫后鱼类的MHCmRNA表达量显著增加方。表明MHC分子在鱼类粘膜免疫中对抗原的呈递起着重要的作用。另外，感染绦虫后的褐第肠道中的血清素、P

6、物质（SP）、肠血管肽（VIP）等水平均呈不同程度的上升，证明这些免疫调节因子参与了鱼类的肠道免疫调节3、可见一些调节因子对鱼类的粘膜免疫也起到一定作用,但其调节机制还知之甚少。2目前几种较为成功的口服疫苗2.1微囊或包裹疫苗目前已报道的包裹材料主要有海藻酸钠、壳聚糖和脂质体。以海藻酸钠包裹溶藻弧菌后免疫鲤鱼和虹第，试验组具有更高的抗体效价，同时粘膜上的浆细胞数量大幅增加。用其包裹嗜水气单胞菌制成微囊对银鲫进行口服免疫后，血清和后肠粘膜抗体效价可高达1：80和1：320皈；将一种表达半乳糖昔酶的DNA疫苗包裹于壳聚糖中免疫罗非鱼，在其腮、胃、脾脏中均检测到半乳糖昔酶3);将载有淋巴囊肿病毒的核

7、酸疫苗包裹于壳聚糖中制成壳聚糖微囊核酸疫苗免疫牙鲜，该微囊疫苗被肠道吸收后能持续释放抗原长达45d,在牙鲜各组织中均能检测到包含淋巴囊肿病毒主要衣壳蛋白(MCP)基因的mRNA,在组织切片中同时也发现病毒蛋白表达，血清中抗体的浓度大幅度增加，免疫效应为阳性用脂质体包裹杀气单胞菌制成微囊免疫鲤鱼，发现其血清、肠道粘液、胆汁中的抗体水平明显增高,感染后的存活率达到83.5%3)。2.2生物载体疫苗于俊红等将生物包埋技术和化学包埋技术相结合，让卤虫分别携带全菌疫苗和微囊疫苗，同时设计了微囊疫苗组和全菌疫苗组，喂食免疫虢鱼，攻毒后，携带微囊疫苗的卤虫组免疫保护率最高，达73.17%；其次为微囊疫苗组，

8、为56.18%,最低为携带全菌疫苗组，为36.18%(20oLin等)则通过生物包埋和重组蛋白技术相结合，运用基因重组技术制备口服疫苗，以卤虫无节幼体为生物载体对鱼类进行免疫，在石斑鱼中运用，存活率可由30%提高到82%。转基因口服疫苗在兽用疫苗中已获得了较大进展。目前已成功构建了将草鱼呼肠孤病毒VP6、大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)、绿色荧光蛋白(GFP)融合表达的植物载体pCAMBIA1302-LTB-VP6")o将LTB和一种病毒多肽或者GFP融合后在马铃薯茎块中获得表达，用该植物疫苗免疫鲤鱼，发现鲤鱼对LTB的吸收增加,并能引起特异性免疫反应习O2.3其他口服疫苗龚辉

9、等刃构建了携带嗜水气单胞菌溶血素基因的重组菌，该菌能够表达嗜水气单胞菌溶血素，利用其胞外产物制成的免疫刺激复合物，经口服免疫，发现鳗稣淋巴细胞的增殖转化能力显著提高，并能诱导免疫保护和免疫记忆，一免的保护率为44.4%,二免后其保护率可达100%e此外，鱼类寄生虫的口服疫苗也逐渐被人们关注和研究。3面临问题和发展趋势水产口服疫苗现在所面临的最大问题是抗原的保护问题，核心是如何使抗原在载体和水体中具有较好的稳定性和如何在鱼体内保持抗原的完整性。因此选择合适的抗原处理方式、合理的有效剂景、适当的免疫时间、免疫程序和免疫次数等都是口服疫苗研究中亟待解决的问题。尽管目前注射型疫苗在疫苗市场中仍占主要位

10、置，但因其在使用过程中劳动强度大、容易造成动物受伤引起感染甚至死亡等不利因素的存在，研发具有低刺激性、高敏感性、使用简便和低成本的口服疫苗是未来鱼用疫苗发展的趋势。参考文献1NelsonMcmillan.D,Secombes.ChristohcrJ.Isolationofrainbowtrout(Oncorhynchusmykiss)intestinalintraepitheliallymphocytes(TEL)andmeasurementoftheircytotoxicactivityJ.Fish&ShellfishImmunology,1997,7(8)：527-541.2 Ro

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