猪支原体肺炎疫苗研究进展 (1).docx

1、猪支原体肺炎疫苗研究进展施尧（南京农业大学动物医学院，江苏南京210095）中图分类号:S858.285.1文献标志码：A文章编号:1002-1957（2013）03-0093-03摘要：猪支原体肺炎是严重影响世界养猪业的疾病之一，也是造成猪呼吸道病综合征的主要疾病之一。猪支原体肺炎的商品化疫苗有灭活疫苗和弱毒活疫苗。灭活疫苗主要激发机体的体液免疫，对外周免疫细胞的影响不大。活疫苗能够激发细胞免疫和黏膜免疫，通过占位效应很好地减少支原体肺炎的发生，但活疫苗肺内注射的免疫途径限制其大面积推广，辅以保护性佐剂可经肌肉注射达到很好的免疫效果。新型疫苗如亚单位疫苗和口服微球疫苗已经研制成功，但其商品化

2、仍需一个过程。关键词：猪支原体肺炎；灭活疫苗；弱毒活疫苗；亚单位疫苗猪支原体肺炎（Mycoplasmalpneumoniaofswine,MPS）又称猪喘气病，是由猪肺炎支原体Mycoplasmahyopneunwniae»M.hyo）引起的一种慢性呼吸道传染病。临床上以咳嗽、气喘和肺部典型的“虾肉”样病变为特征，发病率高，死亡率低。猪肺炎支原体常与其他细菌和病毒混合感染，引起猪地方性肺炎（Enzooticpneumonia,EP）和猪呼吸道病综合征（Porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC）川。猪肺炎支原体常通过病猪与健康猪接触或通过飞沫经空气传播

3、,其传播距离一般可达4.7km叫最远可达9.2km囹。猪肺炎支原体对一些消毒剂及一些恶劣环境如干燥具有抵抗力叫一旦传入很难彻底扑灭。单纯的药物防控猪支原体肺炎有效，但存在保护期短，必须长期间隔或定时给药，成本高，易产生耐药性的缺点咯因此，采用疫苗防控猪支原体肺炎是重要选项。目前用于预防猪肺炎支原体感染的商品化疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗。1猪支原体肺炎灭活疫苗自20世纪90年代猪支原体肺炎灭活疫苗在美国注册上市以来，己有大量试验证明免疫猪支原体肺炎灭活疫苗带来了很大的经济效益叫Wilson等在德国南部的一个肺炎支原体阳性猪场使用富道喘气病灭活疫苗（SuvaxynMH-One）免疫45口龄的仔猪发现

4、，免疫组的肺部病变率、屠宰重、日增重与对照组均有显著差异，这说明SuvaxynMH-One疫苗免疫小于7日龄的仔猪，可有效降低猪感染肺炎支原体对肺部造成的伤害，同时减少体重损失和增加平均日增重，提高了猪的生长性能四。潘延钵等对从美国菌种中心引进的猪肺炎支原体（J株）进行培收稿日期:2013-03-23作者简介:施尧（1992），男，甘肃山丹人，主妾从事猪病研完.E-mail;vet.shiyaogmaiLconi养、滴定，如颜色变化单位CCU达108/mL以上，用甲醛灭活后，加入自主研发的免疫佐剂-603制成疫苗，免疫猪在6个月内能检测到保护性抗体，攻毒试验证明灭活疫苗免疫猪能有效获得攻毒保护

5、阿。但是灭活疫苗主要激发机体的体液免疫的。Kick等发现，未免疫猪支原体肺炎灭活疫苗的对照组血液CD47细胞的百分数要小于免疫组，然而对照组CD8T细胞及CD4/CD8*T细胞却多于免疫组,这可能与试验过程中经历了断奶有关，但也间接说明了灭活疫苗对外周免疫细胞的影响不大叫。2猪支原体肺炎弱毒活疫苗2.1免疫效果和安全性刘茂军等使用猪支原体肺炎活疫苗（168株）在河南3个猪场进行临床免疫效力试验，研究结果显示，免疫猪的肺病变与非免疫组之间都存在显著差异，疫苗免疫显著降低了试验猪的肺病变，这表明猪支原体肺炎活疫苗（168株）具有良好的免疫保护性"。此外,Elsbemd等发现，免疫过猪支原

6、体肺炎活疫苗的猪群比未免疫猪群日增重平均增加17.91g,最高达29.63g,这表明免疫活疫苗对仔猪生长有促进作用咧。与猪瘟疫苗同时免疫也有很好的免疫效果，沈青春等对24头30-40日龄仔猪分别或同时免疫猪支原体肺炎活疫苗（RM48株）和猪瘟活疫苗（传代细胞源），结果表明，两种疫苗同时免疫对各自的近期免疫效力均无明显影响网。猪支原体肺炎活疫苗（168株）免疫后，免疫猪和同群感染猪均未观察到典型的临床症状和病理变化;连续5代返强试验，试验猪均未观察到典型的临床症状和病理变化，说明该疫苗株未出现返强。单剂量、单剂量重复和大剂量试验及5批次疫苗的临床试验也未观察到不良反应的，这说明受试批次猪支原体肺

7、炎活疫苗（168株）具有良好的安全性。2.2免疫机理猪玄原体肺炎疫苗的免疫机理独特，黏膜免疫和占位效应企免疫过程中发挥重要作用|峋。仔猪出生后57d,不会自然感染肺炎支原体，活疫苗弱毒株通过肺内注射直接到达肺泡黏膜表面，在肺泡表面形成优势占位，借助黏膜蛋白等营养物质大昼繁殖，最终占据肺泡表面所有的可占用空间(大约需12周时间)，同时，这个过程伴随机体发生局部黏膜免疫、细胞免疫和体液免疫。此时,如果仔猪吸入感染肺炎支原体野毒株，肺泡表面已缺乏可占据的空位，野毒被抗体中和、淋巴细胞吞噬或衰竭死亡，从而减少喘气病的发生2.3佐剂和免疫途径对免疫效果的影响猪支原体肺炎弱毒活疫苗显示出良好的免疫效果，但

8、由于现有活疫苗采用肺内注射的免疫途径，一定程度上影响了其广泛应用。活疫苗辅以佐剂肌肉注射显示出良好的免疫效果。熊祺琰等发现，免疫刺激复合物(ISCOM)基质佐剂和左旋咪哇+壳聚糖混合佐剂肌肉注射能有效激发细胞免疫应答和体液免疫应答；同时左旋咪哩+黄芷多糖混合佐剂能增强疫苗的细胞免疫刺激能力，而对体液免疫无作用;但是皂角素佐剂未显示明显的免疫增强效果网。对ISCOM-基质的研究发现JSCOM-基质不影响活疫苗的活力，并且在体外可直接或协同刀豆蛋白刺激淋巴细胞产生明显的增殖反应，最低起效浓度为0.01ng/mL;当作为佐剂与活疫苗配合肌肉注射免疫时，可显著诱导动物对疫苗抗原的细胞免疫应答，体液免疫

9、应答亦有一定程度增强。用肺炎支原体强毒攻毒后25d剖检，免疫组病变明显较对照组减轻，显示出较好的攻毒保护效果叫。赵卓等发现，用6035纳米佐剂稀释猪支原体肺炎冻干活疫苗，肌肉注射，采用“55分计分法”记录肺脏病变情况，结果表明，疫苗经纳米佐剂稀释后，与用生理盐水稀释的疫苗相比，肺炎减少率均达到80%以上，且胸腔免疫与肌肉注射效果相当团。黏膜免疫在猪支原体肺炎免疫应答中发挥重要作用，因此，探究能引起良好免疫应答的口服或喷雾佐剂成为支原体肺炎疫苗研究的热点。Lin等发现，通过共同喷雾干燥法制作的口服微球疫苗能为猪提供有效的保护力。而经喷雾免疫时，喷雾器在雾化过程中的切割力能显著降低疫苗的活力。喷雾

10、器喷射压力越大，对疫苗活力下降的影响越大回。3新型亚单位疫苗的研制Fagan等以肺炎支原体核糖核酸氧化酶Nrdf和半乳糖昔酶R2亚单位的融合蛋白为基础构建新型亚单位疫苗，免疫此疫苗后用强毒株攻毒,免疫组比未免疫蛆猪肺的损伤率显著降低。马丰英等以MAyol68株的基因组为模板，经扩增、转化大肠杆菌表达、突变、菌株破碎、蛋白纯化，纯化后加入佐剂制成疫苗，经动物免疫后发现，以P36、P46、P65蛋白为组分和以P36、P46、P65、重组质粒P97R1-Nrdf蛋白为组分的猪支原体肺炎亚单位疫苗均能产生较高水平的抗体，且产生了比常规猪支原体肺炎疫苗免疫组更高水平的IFN-7(7干扰素)，而IFN-y

11、是由T细胞分泌的，是介导细胞免疫的关键，在活化巨噬细胞抵抗猪肺炎支原体的过程中发挥着一定的作用。此外，注射2种亚单位疫苗小鼠的脾脏T淋巴细胞诱导的IL-4(白细胞介素4)极显著高于对照组(P<0.01>,说明这2种亚单位疫苗在激活体液免疫的同时也激活了细胞免疫网。4小结与展望猪支原体肺炎是影响世界生猪养殖业的重要传染病之一，目前防控猪支原体肺炎的商品化疫苗有灭活疫苗和弱毒活疫苗。灭活疫苗只激发机体的体液免疫，而抗原的制备工艺是灭活疫苗生产的瓶颈，其高滴度和高纯度抗原生产工艺仍是国际支原体组织(InternationalResearchProgrammeonComparativeMy

12、coplasmologyJRPCM)在2012年大会上的5项主要议题之一。对肺炎支原体而言，疫苗诱导产生的抗体水平和阻止病原移行及疾病的发生联系不大，疫苗抗体水平不一定与保护正相关，只为参考性指标。弱毒疫苗能够激发机体的细胞免疫，通过占位效应而减少喘气病的发生，免疫效果良好。但弱毒疫苗肺内注射的免疫方法阻碍着其推广。活疫苗辅以多种佐剂经肌肉注射能达到良好的免疫效果，因此,探究新型佐剂、改良活疫苗的免疫方法,使活疫苗能够通过肌肉注射、口服或者喷雾免疫是今后猪支原体肺炎疫苗研究的关键。新型疫苗能够很好地激发机体细胞免疫，然而以天然菌体成分或其分泌物作为亚单位疫苗的组分，其免疫原性虽好，但提取成本高

13、、产量较低，因此,利用基因工程方法制备亚单位疫苗是首选途径。新型疫苗的商品化也是今后支原体防控的关键。参考文献：1 WoesteK,GrosseBE.Transmissionofagentsoftheporcinerespiratorydiseasecomplex(PRDC)betweenswineherds:areviewPartI-diagnostics,pathogentransmissionviapigmovement(J.DtschTieraratlWochenschr,2007,l14(9):324-326,328-337.2 CardonaAC.PijoanC,DeeSA.Ass

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15、rbornetransportof急性副猪嗜血杆菌病的诊治与分析朱秀高(武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042)中图分类号:S858.285.1文献标志码：B文章编号：1002-1957(20】3)03-0095-021发病情况2013年3月，江苏某地区一存栏570头母猪猪场的保育猪群发病，临床表现为突然不食、高热至40T、有轻微呼吸急促症状、呈腹式呼吸：两天后病猪瘫痪在保育床上，并在48小时内死亡：截至笔者现场处理时，全群发病率为48%、死亡率65%,无其他明显可见临床表现。发病后先后用阿莫西林(含克拉维酸钾)及头泡嚏吠钠预混剂经饲料给药治疗无明显效果。将4头发病瘫痪猪宰杀后解剖,观

16、察其内脏器官的病理变化，其中肝脏、肾脏、脾脏及淋巴结等部位无任何异常，胃肠等消化器官也无病变。病变局收稀日期:2013-04-18作者简介：朱秀高(】984-),男，山东圳坊人，执业善医师，硕士，主要从享动物疾病防治工作.E-mail:zhuxiugaaoinfectiousPRRSVandMycoplasmahyopneumoniaefromaswinepopulationinfectedwithmultipleviralvariantsJ.VeterinaryMicrobiology,2010,145(3-4)：198-208.5 EterpiM,McDonnellG.ThomasV.De

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20、J.Researchinveterinaryscience,2011,91(3):e68-72.12 刘茂军，苗连叶,赵永前，等.猪支原体肺炎活疫苗168株临床试牧与兽医,2009.41(8)：93-95.13 ElsbemdAJohnsonA虬StalderKJ,e/al.AReviewontheImpactofMycoplasmahyopneumoniaeVaccinationonAverageDailyGaininSwineJ.AnimalIndustryReport,2012,658(1):4.限在肺脏、心脏及跑关节,表现为心包严重积水(图1)、呈浅黄色(4/4),肺脏肿胀(图2)、表

21、面有点状坏死灶(3/4),关节腔内有大量淡黄色积液(4/4)o图1心包积水图2肺脏肿胀2诊疗情况根据发病情况、临床症状和剖检病变，笔者怀疑病猪为急性副猪嗜血杆菌感染，在采取治疗措施的同时进行实验室诊断。病猪宰杀后无菌条件下采集心包液和关节液划线于自制的含NAD(烟酰胺腺嗔沈育春，范学政，王芳，等.猪瘟和猪肺炎支原体活疫苗同时免疫的相互干扰研究几中国兽药杂志,2011,45(12):9-12.14 刘茂军，苏国东，周勇岐，等.猪支原体肺炎活疫苗168株的安全性研究JJ.中国兽药杂志,2012,46：I-4.15 王荣祥，杨倩，张小飞，等.气喘病疫苗免疫效果探讨J.畜牧兽医杂志,2011,30(2):91-95.16 周勇岐，赵永前.猪支原体肺炎168株活疫苗的作用机理与应用J.中国牧业通讯，2008(10):49-52.17 熊祺琰，范志鹏，甘源，等.几种佐剂对肌肉注射猪支原体肺炎活疫苗免疫刺激能力的增强作用研究