猪水疱性口炎病毒基因及其疫苗的研究进展.docx

1、猪水您燧口炎曷基因及其SBKHtSE进展甘振磊*汤筋元'罗险峰2,曾智勇，李春燕*王凤1(1.贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025；2.贵州省动物疫病预防控制中心贵州贵阳550008)摘要:猪水疱性口炎是由水疱性口炎病毒引起的高度接触传染性的病毒性疾病。其临床特征为猪的唇部，鼻及口腔等处发生水池，并从口中不断向外流涎，有时常常还发生在蹄冠和趾间皮肤上，其症状主要以水疱为主。该病在全球许多地区造成广泛流行。近年来，由于产品贸易量的增加，猪水疱性口炎病毒也陆续的传入我国。由于该病与猪水疱病、猪口蹄疫和猪水疱性疹等病毒性疾病容易混淆，因此对该病做出准确地诊断与防制显得尤为重要。在VSV疫

2、苗的研究方面，主要是灭活疫苗和弱毒疫苗的研究，而在新型疫苗的研究方面很少。本文主要综述了猪水疱性口炎病毒的基因及其疫苗的研究进展，为进一步了解和预防该病提供参考依据。关键词：猪水疱性口炎病毒;基因组结构；疫苗研究ResearchProgressofSwineVesicularStomatitisVirusGeneanditsVaccineGanZhenlei,TangDeyuan,LuoXianfeng,ZengZhiyong,LiChunyan,WangFeng(1.DepartmentofAnimalScienceGuizhouUniversity,GuiyangGuizhou,55002

3、5;2.AnimalDiseasePreventionandControlCenterinGuizhouProvince,GuiyangGuizhou,550008)Abstract：Swinevesicularstomatitisisahighlycontagiousviraldiseasecausedbyvesicularstomatitisvirus.Clinicalcharacteristicsofpigslips,thenose,mouth,blistersanddroolingfromthemouthrepeatedlyassured,sometimesoftenalsooccur

4、intheskinofthehoofcrownandtoes,theirsymptomstoblisters.VSVhaswidelyspreadinmanypartsoftheworld.Inrecentyears,becausetheincreaseofheproducttradeswinevesicularstomatitisvirusalsospreadsintoourcountry.BecauseSwinevesicularstomatitishassimilarclinicalsymptomswithswinevesiculardisease,swinelootandmouthdi

5、seaseandswinevesicularrash,soitisparticularlyimportanttomaketheaccuratediagnosisandprevention.InVSVvaccineresearch,mainlyareinactivatedvaccineandattenu-atedvaccine,andlittleresearchofnewvaccines.Thispaperreviewstheresearchprogressofswinevesicularstomatitisvirusgeneanditsvaccine,soastoprovidereferenc

6、eforfurtherunderstandandpreventionofthisdisease.Keywords：swinevesicularstomatitisvirus,genomeicstructure,vaccineresearch猪水疱性口炎(Swinevesicularstomatitis,SVS)是由于水疱性【1炎病毒(VSV)感染引起的高度接触传染性的病毒性疾病mo该病毒属于小RNA病毒科(Picomaviridae),肠道病毒属(Enterovirus),与人柯萨奇病B5(CoxsackievirusB5,CB5)有密切的遗传关系。临床症状主要表现在以舌部、唇部、口腔黏膜和蹄

7、冠等处的上皮组织发生水疱性炎症。SVS可引起地方及甚至多个国家的广泛性流行，临床表现与猪II蹄疫(FMD)、猪水疱性疹(SVES)和猪水疱病(SVD)等疫病难以区别叫VSV主要有2种血清型,它们分别是印第安型(IND)和新泽西型(NJ),代表的毒株为印第安纳株(VSV-1N)和新泽西株(VSV-NJ),本病被国际兽医局(0IE)列为必须通报的传染病,在我国VSV为外境来源的动物传染病。早.在19世纪初，该病就在美国东部暴发过，被称作“舌溃疡”。到了1916年,VSV从北美洲传到了欧洲并引起了地方大面积流行性。使该病在美洲、欧洲、非洲及亚洲等多个国家和地区引起猪、马、牛群发病，造成的惨重经济损失

8、。我国于2009年已有该病的报道，该病主要随着进境商品传入中国，造成国内大量的牲畜感染而死亡，特别在养猪业带来了严重的影响。1病原学水疱性口炎病毒(Vesicularstomatitisvirus,VSV)属弹状病毒科，水疱性口炎病毒属的成员，通过血清中和试验和免疫补体结合的试验，可将VSV分为两中血清型，即新泽西型(NJ)和印第安纳型(IND)E,而印第安纳型又可分为3种亚型。VSV与在琼扩试验中可出现两条沉淀线，可区分这两种血清型。1964年，在稻鼠身上的蟠体内分离到一株毒，该毒株的形态上与VSV|分相似，血清学与VSV-1N有一定的关系，但与VSV-NJ没有相关性，此毒株在特立尼达被命名

9、为Cocal株。通过研究VSV(包括从巴西和阿根廷的马体内分离到的巴西株)显示，VSV-IN一般可分为3个亚型。即印第安纳I型、印第安纳n型和印第安纳m型。该3种亚型的分离主要来自牛、马、猪、昆虫和人等体内的毒株。VSV呈子弹状或圆柱状，即一端呈圆弧形，而另一端平坦，纯化后的粒子呈明显的圆筒状。其大小为150180x5070nm。通过电镜下观察可以看出，病毒粒子表面具有囊膜结构。病毒粒子内部的核衣壳呈密集卷曲的螺旋状结构。其外径约49nm,内径约29nmo另外，在电镜下常可以看到T型结构,T型结构内含有正常病毒粒子的全部结构蛋白，但没有转录酶活性，其RNA含量只占到正常含量的1/3左右叫该病的

10、生态学分布场所主要在沿河和林区昆虫活动常发生，表明该病由昆虫传播。印第安纳I和新泽西两种血清型都能从沙蝇分离到的，并已证明经卵可以垂直传播。感染新泽西型的沙蝇可将VSV传播给乳鼠。已证明晚春昆虫活跃季节野猪新泽西资助项目：贵州2011年农业攻关项目资助编号：黔科合NY字(2011)3103号】作者简介：甘振云(1986-)，男，硕士研究生，主要从事动物传染病病原分子病毒学的科研学习。通讯作者:汤德元(1964-),男，教授，博士，硕士生导加主要从事动物传染病病原分子生物学和中西兽医姑合的教学科研工作。E-mail:tdyuan血清型抗体为阳性。黑蝇舔食新泽西病毒液后以唾液传播可达10d之久。在

11、猪的VSV传播中主要是因为污染物参与而增加感染传染的机率。接触传染亦可发生，但只有皮肤擦伤才会感染。Nichol等根据VSV新泽西型毒株T1核酸酶指纹图研究显示，其野毒株可分为14个基因型。通过对多个新泽西型毒株糖蛋白核酸序列和氨基酸组成进行分析比较发现，不同毒株间核酸变异度口J达19.8%,而氨基酸变异度为8.5%。分析不同毒株间的进化关系，可将VSV新泽西血清型分也可为3个基本亚型。在美国和墨西哥地区流行的毒株属于大多属于1亚型；来自于萨尔瓦多和洪都拉斯等国家的毒株属于2亚型;来自尼加拉瓜和巴拿马的毒株属于3亚型。VSV与其它病毒一样，囊膜糖蛋白抗原可使动物产生中和抗体，呈现不同毒株的特异

12、性。但在小RNA病毒科中月前还没有证实其它病毒属成员具有VSV的抗原成分。研究显示,在中和试验和系麻结合试验中,VSV与狂犬病毒属的病毒均没有任何交叉反应。VSV的感染细胞时可产生血凝索，维持液内不含血清的适宜条件与狂犬病病毒相似，但加04%牛血清后，在pH6.2、4七的条件下，可以凝集鹅红细胞。病毒不会在凝集的红细胞表面脱落下来。洗脱被凝集的鹅红细胞上的病毒粒子，红细胞还可以再次凝集，从而证明VSV没有受体破坏酶。VSV对理化学因素的抵抗力都十分的敏感。在58Y条件下存活30min,紫外线、乙酰、氯仿等有机溶剂都能使其灭活。病毒可在土壤中于46T条件下活存几天。但该病毒在pH410之间时表现

13、较为稳定。该病毒既不耐酸更不耐碱,2%的NaOH溶液中或1%的甲醛溶液能在几分钟内迅速被灭活。0.05%结晶紫可以使其失去感染能力，在1%石炭酸需要6h以上才能将其灭活。病毒在5%甘油磷酸盐缓冲液内可存活4个月。在感染的细胞培养液中加入2%胎牛血清，可以明显提高VSV的稳定性。2猪水疱性口炎病毒的分子生物学特性及基因组结构2.1病毒的分子生物学特性VSV分子量约为265.6x10*Da,VSV为单股负链线状RNA病毒，从3,到5,端依次排列着N、NS、M、G和L5个不同的基因。N基因3,端有不编码的先导序列，在各基因片段间有间隙子序列，在5*端有非编码区。VSVIndiana株RNA分子量为3

14、.68x0kDa,全长ll.lkb核背酸，无感染特性。3,端的非编码先导序列长度为47个核苛酸，转录成为先导RNA,其功能目前仍不清楚。研究显示，先导序列与N基因间有AAA序列，VSVNJ株为AAAA序歹L它的作用可能是抑制宿主的RNA合成。N基因有1333个核昔酸.主要编码病毒的核衣壳;NS基因由822个核苻酸组成，主要编码磷酸蛋白；M基因有838个核甘酸，编码基质蛋白；G基因由1672个核仔酸组成，编码病毒的糖蛋白；L基因有6380个核甘酸，主要编码病毒RNA聚合酶，在这些基因片段之间的间隙子分别为GA、CA、GA和GA儿种核苻酸。5*端非编码区有59个核件酸。在病毒的基因组正链转录过程中

15、,其中含有的mRNA和非编码先导序列总共有70个核甘酸未被转录，它们主要为5,末端的核甘酸序列、前导序列、N基因间以及各基因片段间的间隙子序列。病毒的结构蛋白有422个氨基酸残基组成，分子量约为47.3KDa.每个病毒粒子中含有1258个拷贝数，其作用是保护病毒RNA,防止各种核酸酮将其降解。磷酸蛋白分子由222个氨基酸残基组成,VSVNJ株由274个残基组成，和Indiana株核昔酸同源性只有41%。整个病毒的全部蛋白质结构有466个拷贝数，它和RNA聚合酶、核蛋白以及RNA共同维持病毒的转录活性。KNA聚合前蛋白由2109个氨基酸组成，分子量24.1KDa,每个病毒粒子中含有50个拷贝数，

16、主要依赖RNA聚合酶合成，可以直接决定病毒的转录活性。核蛋白、磷酸蛋白、RNA聚合酸以及RNA复合物共同形成核糖核蛋白结构，即核衣壳蛋白。它们对RNA聚合酶活性的发挥都是必需的。VSVIndiana株糖蛋白有511个氨基酸残基，分子星约为57.4KD&,每个病毒粒子含有1205个拷贝数，病毒的表面抗原由糖蛋白上的两个糖基化位点组成，决定着病毒的感染力。糖蛋白由229个氨基酸残基组成，分子量:26kDa,糖蛋白檀嵌在脂质膜中，与核衣壳相互接触，起到连接的作用。糖蛋白碱性较强，可通过与核衣壳结合抑制转录。另外,VSV是高效的干扰素河能是该毒在增殖过程中形成双股RNA链的缘故。2.2烟毒的基

17、因组结构及所编码的蛋白功能2.2.1病毒的基因组结构VSV以负链RNA为基因组，全长11.1kb个核昔酸，其各基因间结构顺序为3-引导序列-N-P_M-G-L-非转录区-5',分另I编码N、P、M、G和L等5种主要结构蛋白吨见图l）o图1水疱性口炎病毒结构皆白基因图（来自SusanE.Witko,etal,2010年）VSV基因组的非编码区和基因间隔区从5-到3*序列通常较短,5,端非编码区长度为59个核甘酸，富含A碱基3端非编码区有47或48个核昔酸，各个基因之间的间隔为23个核甘酸，并且在基因间隔区的周围序列的同源性较高。VSV包膜主要含脂质和蛋白，其脂质完全来自宿主细胞，而包膜的

18、脂质分子组成与宿主细胞有一定的差异，研究发现,VSV包膜的胆固醇含址较高，如果胆固醇含址下降，就会导致VSV的感染性和融合能力的降低。VSV包膜内还含有少量的磷脂酰胆碱，但神经鞘磷脂和氨基磷脂等磷脂较多,从而可以说明VSV的包膜比宿主细胞黏度更大。2.2.2主要结构蛋白功能VSV主要有5种蛋白，它们分别是N、P、M、G和L蛋白，其中N是病毒主要的结构蛋白，P和L的共同作用可以起到转录功能。M蛋白町以抑制病毒的转录作用,C蛋白具有与细胞膜融合的功能,222.1、P和L基因所编码的蛋白功能在弹状病毒科中，它们的基因组为不分节段的ssRNA,其中VSVNJ株基因组长度为ll.lkb核甘酸残基,主要与

19、N蛋白结合形成核衣壳或RNP核心，在核衣壳上还结合有少量:的L蛋白和P蛋白（以前称为NS蛋白）。VSV基因组的N、P和L3种蛋白构成病毒的主要核衣壳蛋白，它们相瓦结合形成核糖核蛋白，具有一定的活性，呈螺旋对称结构，并有感染能力。N蛋白由422个敏基酸构成，分子量为47.3kD;P蛋白（或磷蛋白）有222个氨基酸，分子量为29.9kD；L蛋白最大，分子最为240.7kDoVSV核衣壳中，N、P和L蛋白分别含有1258.466和50个拷贝数，其中Y和L蛋白构成内源性的RNA依赖性RNA聚合酶。值得指出的是,P蛋白磷酸化程度与病毒基因组转录活性有关，通常P蛋白磷酸化水平较高时，会提高转录酶的活性。在

20、VSV基因组中,N蛋白是病毒主要的核衣壳蛋白，它是VSV特异性的抗原，在弹状病毒属中，它与其他的病毒没有交又反应性,不能产生中和抗体。VS中的两种血清型中的N蛋白同源性为68.7%。在病毒感染过程中，其N蛋白以单体、多聚体和与P蛋白结合3种形式存在。三种主要结构蛋白中,L蛋白的分子量最大，主要是因为L蛋白含有激酶活性。可以促进P蛋白的丝:氨酸高度磷酸化。P蛋门磷酸化程度与转录活性有关。L和P蛋白的共同转录功能构成了聚合酶。N蛋白与RNA一起形成N蛋白-RNA（RNP）核心复合物。形成的复合物与L蛋白及NS蛋白联合作用，共同构成转录复合物，具有转录活性和感染性。经过转录的RNP核心才有活性，可以

21、产生5种mRNAoM基因所编码的蛋白功能M蛋白由229个纽基酸构成，呈强碱性，每个病毒粒了中有1826个拷贝数研究表明，M蛋白既可以与G蛋白结合形成三聚体结构，也可以结合在卷曲的核衣壳上，但有研究证明.M蛋白与核衣壳相结合时,它能够抑制核衣壳的转录。在小RNA病毒科中，特别是弹状病毒,M蛋白能够与核衣壳及G蛋白的包膜相互结合，形成内外之间的相互联系，因此,M蛋白起到连接的作用,可以认为是一种桥连分子。另外,M蛋白还可以导致细胞发生病变的现象。在病毒其他蛋白缺失的条件下，单独表达M蛋白能够引起细胞变圆，使细胞的形态发生改变，甚至迅速衰老死亡，这可能是因为M蛋白破坏了细胞结构造成的叫在M蛋白的20

22、35位氨基酸之间，含有Ser和Thr残基,这些氨基酸残基可以产生磷酸化，但M蛋白产生磷酸化修饰的功能仍不清楚。2.2.2.2 G基因所编码的蛋白功能VSV通常含有两种蛋白结构，一种是包膜糖蛋白突起G.另一种是包膜内面的基质蛋白M,G蛋白具有特异性抗原决定簇，可产生中和抗体。VSV病毒粒子中含有1205个拷贝数的G蛋白，形成400个左右三聚体的包膜突起。VSVIndiana株的G蛋白前体由511个氨基酸组成，其N端有16个氨基酸的信号序列，当信号序列介导G蛋白插入到内质网膜后就被切割下来。G蛋白存在于包膜外，有2个N-糖基化位点，跨膜区域由20个氨基酸残基组成.位于包膜内表面由29个氨基酸残基组

23、成，在弹状病毒属中，有些病毒的G蛋白包膜内的半胱氨酸残基上会出现棕桐酸酯化,其功能尚不清楚。另外，研究发现,G蛋白在偏酸性条件下，其跨膜区的疏水域会暴露出来，并能部分插入到敏感细胞膜中，使病毒包膜与细胞膜相互融合。另外,G蛋白N端的一小段疏水区域，可能也具有溶血和融合活性，在不过改变G蛋白的N端序列时，不会影响G蛋白的融合活性，但可以失去溶血功能,G蛋白的融合活性可能还与其他区域有关，其影响G蛋白融合活性的区域还需进一步的研究证明。另外，在G蛋白118-136位氨基酸残基之间，不带电荷的短基酸残基可能也与膜融合相关。3猪水疱性口炎病毒疫苗的研究目前,对病猪目前尚无特异性治疗方法,同时研究猪水疱

24、性口炎的疫苗方面较少，除国外有报道研制出了VSV的灭火疫苗和弱毒疫苗外，对核酸疫苗、亚单位疫苗等新型疫苗方面的研究很少。如何才能有效的控制VSV,给国内外很多学者带来了挑故，研究VSV的弱毒疫苗、新型的基因工程疫苗方面，也越来越得到国内外的研究人员的重视。下面将分类概述各类疫苗的发展现状及研究进展。3.1灭活疫茴在国外，已研制出了不同的灭活疫苗和致弱活疫苗。Koener等（1990年）利用杆状病毒载体表达了该病毒的糖蛋白，其与抗体的反应原性较好，期望作为安全有效的疫苗oLapatra等（1994年）报道,利用抗传染性造血器官坏死病毒的虹绻鱼高免血清，对平均体重4.3g的虹瓣鱼进行实验性被动免疫

25、,免疫鱼对105PFU/mL病毒攻击有91%的保护作用。暴露后24和48h免疫,保护率分别为88%和75%oWiese-hahn等报道了关于美国研发出的VSV的灭火疫苗，该疫苗的灭活主要是用紫外线照射的办法使病毒失去感染活性,灭火的疫苗只保留病毒的免疫原性，同时有生理性可接受的载体和佐剂疫苗共同构成。该剂耘:从大约106109滴度/剂量，机体可对接种后的疫苗产生抗体。另外，该研发中心还用补骨脂素灭火的VSV-NJ型疫苗，该疫苗在研制过程中，首先把乳鼠(010日龄)分为3组，每组5只，进行脑内接种，给每只小鼠注射不同滴度的疫苗，分别注射107pfu/dJ06pfu/d和105pfu/(L在Od和

26、第21d分别采一次血，检测血清样本的抗体效价。结果107pfu/d的抗体效价最高。3.2弱却疫苗国内有学者应用豚鼠化弱毒疫苗和细胞培养弱毒疫苗，对猪的免疫保护率达80%以上，免疫期在6个月以上。用水疱皮和仓鼠传代毒制成的灭活疫苗具有良好的免疫效果。另外，有人已报道关于研制的鸡胚结晶紫甘油疫苗对黄牛有短期免疫效果，但对猪的免疫效果还没有做进一步的研究。国外用紫外线照射灭活病毒制成的疫苗进行接种有良好效果。RobertsA等9新构建的两种表达流感病毒A/WSN血凝索(HA)蛋白的VSV重组体，研究小鼠的免疫原性和抗致死性流感病毒攻击的保护效价，分别用CT1-HA和AG-HA两种蛋白。前者编码VSV

27、C蛋白后者以A/WSN的HA完全替代VSV的G蛋白。研究发现，利用VSV缺失G蛋白的VSV、AG、VSV-HA、野毒株VSV作为对照。结果表明XT1-HA可在BHK-21细胞上生长和传代，滴度达107PFU/mL,细胞上的空斑比VSV-HA及野毒株VSV要小，而对于AG和AG-HA的感染性，在BHK-21细胞上滴度复制2代后失去，必须在诱导G蛋白表达的BHK-G细胞中增殖，滴度也可达107PFU/mL,并在BHK-G细胞上形成大空斑。通过电镜观察，AG-HA毒粒表而有HA较强的标记，呈弹状结构。通过长期观察小鼠发现,CT1-HA和AG-HA均无致病性，小鼠接种后18d、32d和47d,小鼠免疫

28、21d后发现，其CT1-HA组小鼠全部活存，AG-HA组5只中活存2只。在2Id后加强一次免疫小鼠，在35d用高于5个致死剂量进行攻击，CT1-HA和AG-HA组全部活存;而AG组小鼠7d内死亡。攻毒后2d.各组均查不到病毒血症,而检测AG和AG-HA组小鼠的肺内病毒M分别为1.5x106和2.5x104PFU/go加强免疫对CT1-HA或VSV-HA组可增加AG-HA组的中和抗体水平,但效果不理想。另外,CT1-HA免疫原性差,需增大10倍剂量才能达到与VSV-HA相当的中和抗体水平。研究显示，AG-HA不会诱导产生抗VSV中和抗体XT1-HA和AG-HA是完全弱毒的载体，而且无致病性的特点

29、。因此,CT1-HA和AG-HA可作为VSV弱毒疫苗最重要的候选载体。3.3核酸疫苗近年来,VSV作为疫苗的载体研究已成为一个热点。由于VSV糖蛋白(G)定位在包膜的突起上，可以刺激机体产生中和抗体，呈现血清型或毒株的特性，所以，在研究VSV基因工程疫苗时，可考虑的首选抗原。N蛋白主要呈现群的特异性,因此,N蛋白能够诱导产生非中和抗体，但与其他弹状病毒无交叉反应性。目前，已有报道用原核和其核表达系统表达G蛋白，对VSV进行免疫效果的研究。Linda等构建了弱毒重组水疱性口炎活病毒,并以其作为载体表达丙型肝炎病毒的糖蛋白，这种内型肝炎病毒糖蛋白的表达，使其整合到VSV表面，被认为是研制丙型肝炎病

30、毒新型疫苗的有效途径。Haglund等报道，用弱毒重组水疱性口炎活病毒为载体表达艾滋病病毒的env和gag基因，被看作是最有可能成为理想的人类艾滋病病毒的候选核酸疫苗载体。研究证实，用该疫苗进行免疫接种后14个月中，一直产生较高的抗体水平，接种的7只猴均未发生艾滋病病毒感染，而对照组的8只猴中，有7只被感染，平均病程为148d。另外，研究发现，只有通过鼻内接种才能刺激机体产生较高的抗体水平。BrandsmanJL等期用重组的VSV沉默载体接种相应的蛋白进行对人乳头瘤病毒的治疗，研究显示，该种载体可以起到相应的治疗作用，这为进一步研究抗肿瘤治疗性疫苗提供了依据。BarberG川山报道利用VSV的

31、沉默载体可以迅速调整肿瘤病毒活性，使肿瘤病毒不能活很难感染细胞系，其应用前景广阔oFlanaganEB等皿通过将N蛋白基因从转录起始部位去掉，使其病毒毒力减弱，同时可将病卷的致病力完全丧失,然后与G蛋白基因连接在一起并共同进行表达，研制基因疫苗,大量提取核酸疫苗后，免疫猪后可对野毒株产生较强抵抗力。国内学者周学章等叫根据FlanaganEB等发表的文献来研究VSV核酸疫苗对小鼠免疫原性的研究。该试验首先进行筛选核酸疫苗的候选基因，在免疫动物机体后，可产生较强的域保'咐:用。同时.该试验构建的K核表达载体，通过质粒感染BALB/c小鼠使其产生免疫保护.并研制核酸疫苗的免疫活性提供参考依据

32、目前,猪水疱性口炎病毒在国外研究比较多.主要是欧美些发达国家和地区对vsv都做r深人的研究，在'SV的病原学特征、流行病学特点以及基因组结构方而研究的比较详细在VSV疫苗的研究方面-主要是灭活疫苗和弱毒疫苗的研究，而在新型疫苗的研究方面很少。在国外，研究者研究关于猪水胞性口炎的核酸疫苗，但免疫效果不是很理想，敏感性不高.特异性不强，国内的研究就更为少见.七要原因是该病发病率不高，流行性不强.不能里大面积的地方流行，给养猪业造成的危害相对较小.但防范该病不容忽视,需提高防范意识.警惕仃突发病情的可能，因此,要针对性的对VSV进行深人的研究，特别是国内要从VSV的基因方而多做研究.研究其病

33、毒分子的致病机理，为研究新型疫苗特别是核酸疫苗打下扎实的基础.更好地防制该病的暴发与流行11）11参考文献：|1股震.刘景华.动物病毒学帅第2版.北京:科学出版社.网7.(2 CravesJH.SenJopcalrrlati<>ii«hipofswinevehicularvim*andenxwkieB5virusJJ.Nalurr.1973.245:314-315.(3 IzrlchwnrthGJ,RodriguesLLBam*raJI)C.VehicularM<Mnatitis(J|.TheVrtrrinanJotimd.1999,155:239-260.(4 蔡

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