原蛋白肽生物功能材料的研究与开发_图文

1、西北工业大学博士学位论文胶原蛋白肽生物功能材料的研究与开发姓名:张小燕申请学位级别:博士专业:材料学指导教师:范晓东20060501 西北工业走学博士学位e文个区段,其制作方法均相似,主要不同处在于分隔数目的差异,以下以10区段为例,介绍其制作过程。首先取厚度为0.5衄的压克力板,将其裁切成10cm5cm大小,并等距离割划出9个凹槽,接着,将压克力板截切成10cml咖三段,将切口处磨光滑,再以二氯甲烷将切好的压克力板粘成长宽为10cm1cm大小的沟槽,此时取9片大小适当,材质为P,rFE,孔径为0.8岬的薄膜,分别疆入各划的凹槽中,这样可将凹槽区分成10等份,再以铁氟龙(Tcflon,杜邦专利

2、涂料胶带,仔细将剩余的空隙塞严,放进水溶液时没有渗漏发生。接着取两条铂金电极,铺到IEF装置的左右两端,电极上方再以热熔胶固定,即完成了哐F电泳装置的制作,见图3.1所示。(2高压电源供应器电源供应器输出电压:眦OKV,电流:o5mA。(3温度控制整个mF系统的温度是以冰浴的方式来进行,其做法是用保温箱,内置O冰水,使系统保持在低温状态,并以热电偶温度计检测各个区段内的温度。 图3.1lO个区段的等电点聚焦装置F嘻3.1TIle equipotential缸鹏iIlg equipmem w妯iil10sectiom3.2分离仪器简介当通电给电场时,利用样品中不同成分的蛋白多肽等电点的差异,不同

3、等电点的蛋白多肽会移动至其等电点位置后静止,而达到第一分离结果,此分离方式 西北工业太孝博士辛fi抡文这20种区段的溶液分别收集,进行下个程序的分析。而聚焦分离的时间则会依旌加电压的高低、样品种类各异。一般施加的高压电控制在2000V时,较小的胶原蛋白肽或较简单的胶原蛋白肽混合物,聚焦的时间在3小时以上,若是对于较复杂的蛋白混合物,则要高达15小时。 w哪B.voItage w觚added to the two sid船of pole to IEF s印甜ation;C.fow pratcillsscparated;D.20辩ctions were coIlected rcspectiVely

4、 t0do next proce蟠毛细管液相层析是在传统的电泳技术基础上发展起来的。其利用小的毛细管代替传统的大电泳槽,使分离效率提高了几十倍。此技术从80年代以来发展迅速,是生物化学分析工作者与生化学家分离、定性多肽与蛋白类物质的有利工具。(1pHPLc系统本实验使用的液相层析仪是A画!ent lloo的“.HPLC系统,配备有脱气装置、毛细管泵、自动进样及数据处理器。其流速有两种操作模式,其一是标准流速,流速大约为lmLmirI一;其二是微量流速,透过分流方式,流速控制到5 25肛Lm计1。此外,配合微量的自动进样系统,其吸取量可低于0.1此。本研究实验共分5个部分,在妒HPLC实验参数的

5、设定上也有所不同,第一部分与第二部分的操作条件是相同的,其样品的注入量是0.5此,流速是加 ,。,。!:,:皇兰三兰i:垒!:丝i呈三,。:!,。一一。一该组装的试验装置现已破加拿大农业部试验室采纳应用,并经改进后加工成达lOOO个区段的控温保温电泳装置,见下图3,4。图3_3这款电泳的设计主要体现了蛋白质组工作系统对电泳高容量、高分辨率,重现性好等要求。操作要求:a提取蛋白样品,注意盐浓度低于40r州,将蛋自样品加在反应盘中:b将预制胶条的塑料保护层撕去,并将其凝胶的一面向下,放在样品上:c水化胶条,在恒温下进行主动(低电压及被动的(无申压水化反应,一般需1215小时;d按设定的程序等电聚焦,一般需68小时:e聚焦完成后,平衡胶条30min,再移到PA3E胶中。 图3.3等电点聚焦电泳实验装置:高压电源供应器、lEF电泳及控温保描箱high volatage power supply、electrophoresis and ContrOl heat 图3.4己商品化的等电点聚焦电冰实_;5盘袋置本实验五个部分包括研究各实验样品量、缓冲液用量、分离