化疗大鼠脾切除前后免疫功能改变的实验研究

1、    化疗大鼠脾切除前后免疫功能改变的实验研究        【摘要】目的探讨接受化学药物治疗后脾切除前后免疫功能的变化。方法本实验将72只大鼠随机分为3组：(1）对照组；(2）激素负荷组；(3）免疫抑制组。脾切除前后测定多项免疫指标：T淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性和中性粒细胞吞噬功能。结果脾脏切除前激素负荷组和免疫抑制组，T淋巴细胞增殖能力、NK细胞活性和中性粒细胞吞噬功能皆明显低于对照组（P 0.01）；脾切除后对照组上述免疫指标下降（P0.01），而激素负荷组和免疫

2、抑制组变化不大（P0.05）。结论术前大量应用激素或免疫抑制剂所引起的免疫功能损害及其对术后的影响，是导致机体脾切除术后免疫功能降低的主要原因，而切除有免疫功能障碍的脾脏可能是次要因素。【关键词】脾切除术；糖皮质激素类；免疫抑制剂 The changes of immune function before and after splenectomy in mice with chemotherapyMAO Yongzhong, RUAN Qinglan, GUO Xiaolan, et al.(Dep artment of Pediatric Surgery, Xie He Hospital,

3、 Tongji Medical University, Wuhan 430022, China)【Abstract】Objective To search for the changes of immune function before and after splenectomy in mice models with chemotherapy. MethodsSeventy-two mice were divided equally into three groups as follows: (1) control group; (2) steroid-loading group; and

4、 (3) immune suppressive group. The immune function was examined before and after splenectomy. ResultsThe lymphocyte proliferation, natural killer cell activity and neutrophil phagocytosis in group (2) and (3) were significant lower than that of group (1) (P<0.01). Above immune function index were

5、 decreased in group (1) (P<0.01), and no difference was observed in group (2) and (3) postoperatively (P<0.05). ConclusionUsing large dosage of glucocorticoids or immune suppressive drugs is the main factor leading to the immunosuppression after splenectomy. 【Key words】Splenectomy; Glucocortic

6、oids; Immunosuppressive agents脾切除可导致机体免疫功能下降 ,并导致机体对感染的易感性增加和可能发生凶险性感染（OPSI）。儿童发病率明显高于成人。患儿因血液系统疾病而行脾切除术前不同程度地接受过激素或免疫抑制治疗，常常在保守治疗无效时才行脾切除。当机体长期接受激素或免疫抑制剂治疗后，脾切除对机体免疫功能的影响，脾脏的功能及其在整个机体免疫中的作用有何区别，有待深入了解,本实验对此作一探讨。材料和方法一、 动物及分组72只雌性SD大鼠，体重150200?g,随机分为3组,分别按下列方法建立动物模型。1. 对照组生理盐水皮下注射,5?d 1次,每次1?ml,自由饮食

7、饮水。2. 激素负荷组强的松龙10?mg/kg肌肉注射,5?d 1次，普通饮食，用强的松溶于水中（10?mgkg）代替饮用水1。3. 免疫抑制组环磷酰胺50?mgkg 腹腔内注射,5?d 1次，普通饮食饮水2。各组动物在相同条件下分笼饲养8周，每组随机分为2组:1组在无菌条件下行心脏穿刺抽血5?ml，测定T淋巴细胞转化试验、NK细胞活性及中性粒细胞体外吞噬细菌试验;另1组行脾切除,术后4周处理同前组。二、手术方法动物用体积分数为1%戊巴比妥钠35?mg/kg腹腔注射麻醉，相对无菌条件下上腹正中切口手术，常规切除脾脏，副脾一并切除。三、实验方法T淋巴细胞对丝裂原增殖反应采用MTT(四甲基偶氮唑盐

8、)法测定；结果以所测定的光密度值（OD值）表示。NK细胞活性采用乳酸脱氢酶法测定；中性粒细胞体外细菌吞噬功能参照David法3，细菌选用肺炎双球菌标准株（由同济医科大学微生物教研室提供）。实验前肺炎双球菌用H3-TdR标记，细胞吞噬功能以所测定放射性强度表示。四、统计学方法各变量以±s表示，用t检验分析变量统计学差异。结果对照组脾切除后各项免疫指标下降明显(P0.01），激素负荷组和免疫抑制组各项免疫指标虽有一定程度的下降，但差异无显著性意义（P0.05），但激素负荷组与免疫抑制组术前、术后各项指标均已明显低于对照组（P0.01）(表1）。讨论糖皮质激素和免疫抑制剂由于能够在很大程度

9、上改变免疫性疾病和某些血液病的发展进程，因而广泛用于临床4，5。免疫学研究表明：生理浓度的糖皮质激素能够与胞浆内受体结合，选择性地影响淋巴因子的产生,参与淋巴细胞的功能调节,是一种有效的免疫调节剂6。外源性糖皮质激素能够导致淋巴细胞减少及细胞亚群的变化，这种变化是一种淋巴细胞再分布现象：在外源性糖皮质激素的作用下，淋巴细胞循环池中再循环淋巴细胞转移至骨髓，而不是转移至脾脏7，8，因而导致脾脏内淋巴细胞数目减少，淋巴细胞亚群比例失调，使脾脏对淋巴细胞回归和再循环的调节功能减弱或丧失。脾脏功能的损害势必影响其调理素的合成，而使中性粒细胞的吞噬功能减弱，NK细胞活性受到抑制。糖皮质激素还可通过抑制粒

10、细胞内一氧化氮合成酶活性而使其吞噬活性降低9。环磷酰胺是一种常用的免疫抑制剂,对血液系统和网状内皮系统具有很强的抑制作用。它可使脾脏淋巴细胞减少，淋巴细胞白细胞介素2（IL-2）合成减少，T淋巴细胞表面抗原表达水平下降，这种作用可持续存在于其各代增殖的细胞。环磷酰胺还可从分子水平损伤细胞DNA并且以遗传的方式存在于淋巴细胞增殖分化的许多代。由于糖皮质激素和免疫抑制剂对机体有广泛的免疫药理作用，长期使用后将对机体免疫系统产生广泛的抑制，作为免疫器官的脾脏也必将受到损害。这种药物对免疫功能的损害明显大于脾切除的影响,致使脾切除本身对各项免疫指标的影响不及对照组显著。本实验通过对脾切除前后机体细胞免

11、疫的检测，表明：当机体长期接受糖皮质激素或免疫抑制剂后，脾切除对免疫功能的改变没有正常时显著，并且机体的免疫功能处于更加低下的状态。因此，对于需要以脾切除作为主要治疗手段而术前长期接受激素或免疫抑制剂治疗的患儿，术前、术后加强抗感染及免疫支持治疗显得更为重要。参考文献1杨峰,胡成军,章建民，等温阳药，滋阴药对“阳虚”小鼠T细胞和B细胞转化功能的影响中国实验临床免疫学杂志，1990，2（2）：31-33.2施新猷，著医学动物实验方法. 北京:北京人民卫生出版社,1980：263-264. 3David GH, John ER, Philip P. Phagocytosis by human al

12、veolar macraphage and neutrophils: qualitative differences in the opsonic requirements of uptake of staphylococus aureus and streptocococus pneumoniae in vitro. Am Rev Respir Dis, 1980, 121:65-71.4沈卓洲脾脏切除治疗血液病的临床分析上海第二医科大学学报，1997,17（5）：369-371.5John PA,Alan DS,Michael MF.Effects of corticosteroids a

13、nd splenectomy on the immune clearance and destruction of erythrocytes. J Clin Invest, 1973, 52:1509-1517.6Wilckens T, Roel DR. Glucocorticoids and immune function：unknown dimensions and new frontiers.Immunology Today,1997,18:418-423.7Fauci AS. Mechanisms of corticosteroid action on lymphocyte subpo

14、pulations. I Redistribution of circulating T and B lymphocyte to the bone marrow. Immunology, 1975, 28:669-674.8Fasanmade AA, Jusko WJ. Immunodynamics of methylprednisolone induced T cell trafficking and deactivation using whole blood lymphocyte proliferation technique in the rat. Biopharm Drug Disp

15、os, 1999,20(5):255-261.9Therese BM, Richard MJ, Salvador M，et al. Inducton of nitric oxide synthase in rat peritoneal neutrophils and its inhibition by dexamethasone. Eur J Immunol,1991,21:2523-2527表1手术前、后各组免疫功能变化比较（±s）组别测定时间nT淋巴细胞增殖反应(OD值)NK细胞活性(%)中性粒细胞吞噬功能(%)对 照 组术前 术后12121.48±0.140.84±0.18*85.05±6.8461.85±4.81*60.89±9.3340.33±6.58*激素负荷组术前术后12120.76±0.130.62±0.1134.77±6.1828.86±5.1036.82±5.7732.38±6.43免疫抑制组术前术后12120.45±0.110.35±0.0820.29±3.3417.22±2.5217