微生物限度验证范例(中检所)

1、复方磷酸可待因(欧博士止咳露)溶液微生物限度检查法验证实验1. 样品复方磷酸可待因(欧博士止咳露) ，批号 309315 、402021 ，生产厂家为香港欧化 药业有限公司。2. 验证用菌种 枯草杆菌 CMCC (B) 63501、金黄色葡萄球菌 CMCC ( B) 26003、大肠 埃希菌 CMCC(B) 44102、白色念珠菌 CMCC (F) 98001、 黑曲霉 CMCC(F)98003 。3. 方法 中国药典有关微生物限度检查法方法验证试验。4. 具体操作方法4.1 菌液制备：(1) 取经37C培养1824h,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的肉汤培养物1ml+9ml 盐水， 1

2、0 倍稀释至 10-5 10-7，细菌数约为 50100cfu/ml ，做活菌计数备用。(2) 经25 C培养1824小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9 ml盐水10倍稀释至10-5 10-7，细菌数约为 50100cfu/ml ，做活菌计数备用。(3) 取经25 C培养1周的黑曲霉斜面培养物，加35ml盐水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用标准比浊管比浊，然后取 1 ml +9 ml 盐水，逐管 10倍稀释为 10-4，细菌数约为 50100cfu/ml ，做活菌计数备用。4.2 供试液制备 吸取样品 10 ml ，加 0.1%蛋白胨水氯化钠稀释液 90ml 浓度均为 1：10 供试液，分别

3、人工污染上述 5 种代表试验菌株。4.3 培养基稀释法： 采用加 0.5 ml、 0.2 ml、 0.1 ml /皿供试液，再加 1520 ml 琼脂培 养基，待凝固后，置规定温度培养 2448 小时观察结果细菌计数，测定回收率。结果见表：4.4 回收率测定：(1) 试验组: 分别取不同品种的 1：10供试液 1 ml、 50100 个/ ml 试验菌株同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度培养2472 小时观察结果。薄膜过滤法以最后一次的冲洗液加入试验菌 .(2) 活菌组 测定每一菌株的试验菌数(3) 供试液对照 测定供试品本底菌数(4) 稀释剂对照组5 结果 菌落计数结果

4、、常规法和培养基稀释法在复方磷酸可待因微生物限度检查法的验证结果 见表 1 、 2 和表 3。表1菌落计数（cfu/ml）实验次数金葡菌10-5枯草杆菌10-5白色念珠菌10-5黑曲霉10-4大肠埃希菌10-7194、90130、 8073、72110、9014、15280、7445、23128、108110、12054、343153、15078、7773、74110、10030、27从表2结果可以看出：（1）采用常规方法检验复方磷酸可待因溶液供试品，人工污染5株代表菌株，该供试品对大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率试验均高于70%，可采用常规方法检验。（2）复方磷酸可待因对金黄色葡萄球菌

5、、枯草杆菌有不同程度的抗菌活性， 供试品回收率为 0.0229.2%，均低于70%。表2复方磷酸可待因微生物限度检查方法验证（常规法）实验次数人工染菌回收率%金葡菌枯草杆菌白色念珠菌黑曲霉大肠埃希菌10.0271.481.1100.0100.0229.229.4100.0100.0100.03抑菌抑菌100.0100.0100.0表3培养基稀释法（1ml加2个平皿）复方磷酸可待因微生物限度检查验证实验次数人工染菌回收率%金葡菌枯草杆菌180.7100.0291.4100.0表3中的结果证明，采用培养基稀释法可消除供试品对人工污染金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的抑菌作用。回收率达到70%以上。因此，培养基稀释法（0.5ml/皿）可用于复方磷酸可待因（欧博士止咳露）的微生物限度检查。6结论根据验证试验结果，确定复方磷可待因（欧博士止咳露）溶液微生物限度检查法为细菌数测定可采用培养基稀释法（0.5ml/皿）测定，霉菌数可采用常规法测定。注：常规法为1ml供试液加1