微生物限度检查方法验证方案

1、页码：第1页，共12页文件编码： ZYCWJ-TS-07156-01起草部门：质量管理部版本号：01标题微生物限度检查方法验证方案起草人起草时间审核人审核时间批准人批准时间颁发部门质量管理部生效日期分发部门份数质量管理部生产部设备部 物料部行政人事部销售部财务部变更记载：修订号批准日期执行日期变更原因页码：第2页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案微生物验证实施小组主要成员:部门质量管理部曰.rin 寺it曰.rin 寺it曰.rm 寺it质量官理部质量官理部质量官理部质量官理部姓名职位验证领导小组审查汇签:姓名部门职务或岗位签字日期

2、企业负责人质量管理部经理生产部经理设备部经理质量管理部QC主管质量管理部QA主管物料部经理页码：第3页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案1. 概述药典微生物限度检查法中要求在建立药品的微生物限度检查法时，应进行方法的验证，以证明所采 用的方法适合于该药品的微生物限度检查。所以对感冒灵颗粒微生物限度检查进行方法的验证。2. 目的为了保证检验质量，对所用的检验方法必须经过验证，才能确保检验结果的准确可靠。3. 适用范围本方案适用于感冒灵颗粒微生物方法学确实认与验证。4. 验证人员职责4.1 .验证小组：组长：质量管理部经理成员：QC主管

3、、微生物操作人员4.2 .职责及分工：QC主管组织起草该验证方案，并组织实施该方案；微生物操作人员具体实施该方案；质量管理部经理协助和监控该方案的实施。4.3 .验证方案批准后，应进行培训。由验证小组指定人员负责对小组成员及和验证有关的人员进行培训。5. 验证依据中国药典2015年版通则“1105”、“1106”序号项目潜在的风险分析潜在的失败后果原因分析严重程度发生频次风险等级措施结果采取的措施严重程度发生频次风险等级1验证方案编写人员编写人员未按照ZYCWJ-SOP-10008-01微生物限度检查法标准 操作规程编写方案。验证方法错 误，导致验证 结果不可靠。人员培训考核不到位F2P3AL

4、ARP对验证编写人员进行培 训和考核，合格后方可 编写F2P5ACC可接受2试验人员试验人员未按照编写的验证方案进行操作操作不正确，导致试验结果不可靠人员培训考核不到位F2P3ALARP按照验证方案进仃培 训，培训合格后方可操 作F2P5ACC可接受3培养箱、净化工作台仪器未经校验或不在校验期内。导致检验环境 和培养环境不 符合要求，最 终导致验证失 败。使用人员 使用前未 对校验期 进行检查F2P3ALARP设备人员使用前对设备进行检查。F3P5ACC可接受4干热火菌 烘箱、压 力蒸气锅仪器未经校验或不在校验期内。导致试验结果出现异常。使用人员使用前未对校验期进行检杳F2P3ALARP设备人

5、员使用前对设备进行检查。F3P5ACC可接受5对照培 养基、检查用培养基、检 定菌对照培养基、检查用培养基、检疋菌失效导致验证失败使用前未对对 照培养基、检 查用培养基、F2P3ALARP对管理人员进行培训，严格按照ZYCWJ-SMP-10020-00F3P5ACC可接受检定菌有效期进行核查。培养基及检定菌管理规 程进行管理，使用前页码：第5页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案使用人对有效期进行确认。6培养基、 缓冲液、 消毒剂培养基、缓冲液、消毒剂配制不正确导致验证失败严格按照标准要求制备缓冲液和消毒剂F2P3ALARP对实验人员

6、进行验证培训F3P5ACC可接受7火菌器具、洁净服已火菌器具和洁净服过效期导致验证失败使用前未对已火菌器具和洁 净服有效期进行确认F2P3ALARP使用前对已火菌器具和洁净服有效期进行确认F3P5ACC可接受8验证方法不正确1、验证方案编与不正确；2、未严格按照验证方案开展验证工作导致验证失败验证方案未经批准F3P3ALARP对验证方案进行审核F3P5ACC可接受9控制菌 检验结 果不合 格实验组无菌落生长，供试品可能有抑菌性导致验证失败1、供试品可能 对试验菌存在抑制作用2、检验员判断 失误。F2P3ALARP采用培养基稀释法消除抑菌性F3P5ACC可接受10实验组各试验组回收率低于或导致验

7、证失败1、供试品可能F2P3ALARP采用培养基稀释法消除F3P5ACC可页码：第6页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案菌种回收率不达标咼于标准范围对试验菌存在 抑制作用2、检验人贝计 数错误。抑菌性接受11样品储存环境样品储存环境、温度异 常。导致样品被污染或失败样品存放不当F2P3ALARP严格控制样品存放环境的温湿度F3P5ACC可接受12洁净区环境1、洁净区温湿度、压差异常2、洁净区环境被污染导致验证失败1. 洁净区温湿 度、压差控制 不当2. 未定期对洁 净区进行清洁 和消毒；F2P3ALARP1. 每天定期监察洁净区的温

8、湿度；2. 按照SOP规定对洁净区进行消毒；3. 严格按照洁净度 监测管理规程对 洁净区环境进行监测。F3P5ACC可接受6.1结果分析：通过以上采取的措施，风险均控制在可接受范围内。7.人员培训确认表培训时间培训内容培训对象培训地点培训讲师主办部门被培训人员签名序号部门及岗位QA主管QC主管设备部经理设备管理员生产部经理质量管理部QC检验员质量管理部QC检验员质量管理部QC检验员质量管理部QC检验员8.验证方法6.1仪器及设备名称仪器及设备名称型号生产厂家是否校验备注生化培养箱是口否口页码：第8页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案

9、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26 003、大肠埃希菌CMCC(B)44 102、枯草芽孢菌CMCC(B)63 501、恒温培养箱是口否口净化工作台是口否口超净工作台是口否口立式压力消毒器是口否口立式压力火菌器是口否口验证用样品：感冒灵颗粒规格:批号:感冒灵颗粒感冒灵颗粒规格：规格：批号：批号：6.2 .验证用培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：沙氏匍萄糖琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：营养琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号：胰酪大豆胨液体培养基生产厂家：批号：配制批号沙氏匍萄糖琼脂培养基生产厂家：批号：配制批号麦康凯液体培养基生产厂家：批号：配制批号麦康凯琼脂培养基生产厂

10、家：批号：配制批号验证用菌种白色念珠菌CMCC(F)98 001、黑曲霉菌CMCC(F)98 003菌液制备:取经30C 35C培养1824小时的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤液体培养物1ml5 7加入9ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至1010为不大于100cfu/ml备用。取经2025C培养23天的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml，加入9ml 0.9%氯化钠溶液中，10倍稀释至105为不大于100cfu/ml备用。将黑曲霉菌斜面的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20? 25C培养5? 7天，使大量的孢子成熟。加入3-5ml含0.05% ml/ml丨聚山梨酯

11、80的0.9%无菌氯化钠溶液或无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，将孢子洗脱。然后，采用适宜方法吸出孢子悬液无菌试管内用含0.05% ml/ml丨聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液或无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液依次稀释至，制成每 1ml含孢子数小于100cfu 的孢子悬液。上述菌悬液制备后假设在室温下放置，应在2小时内使用；假设保存在 28C，可在24内使用。供试液制备：取样品10g,加入pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，为1: 10供试液。页码：第9页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案7.1需氧菌、霉菌及酵母菌计数平皿法所加菌液的

12、体积不得超过供试液体积的1%为确认供试品中的微生物能被充分检出，首先应选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性检查。试验组取上述制备好的供试液，加入试验菌液、混匀，使每1ml供试液或每张滤膜过滤的供试液中含菌量不大于100cfu。取的供试液和小于 lOOOOcfu的铜绿假单胞菌菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 3035C倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。取的供试液和小于 10000cfu的金黄色葡萄球菌菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 3035C倒置培养3天点计菌落数

13、。平行制备 2个平皿。取的试液和小于10000cfu的枯草芽孢杆菌菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 3035 C倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。取的供试液和小于 10000cfu的白色念珠菌菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 3035 C倒置培养3天点计菌落数。平行制备2个平皿。取的供试液和小于 10000cfu的黑曲霉菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 3035C倒置培养3天点计菌落数。平行制备 2个平皿。取

14、的供试液和小于 10000cfu的白色念珠菌菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 2025 C倒置培养5天点计菌落数。平行制备2个平皿。取的供试液和小于 10000cfu的黑曲霉菌悬液混匀后，吸取1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基1520ml，混匀，凝固，于 2025C倒置培养5天点计菌落数。平行制备 2个平皿。7.3菌液组取小于100cfu的铜绿假单胞菌菌悬液、金黄色葡萄球菌菌悬液、枯草芽孢杆菌菌悬液、白色念珠菌菌悬液、黑曲霉菌悬液各1ml，注入平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基约1520ml，混匀，凝固，于3035C倒置

15、培养3天点计菌落数。各平行制备2个平皿。取小于100cfu的白色念珠菌菌悬液、黑曲霉菌悬液各1ml，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基各1520ml，混匀，凝固，于 2025C倒置培养5天点计菌落数。各平行制备2个平皿。供试品对照组取的供试液1ml，注入平皿中，分别立即倾注1520 ml温度不超过45C胰酪大豆胨琼脂培养基和沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，胰酪大豆胨琼脂培养基3035 C倒置培养3天点计菌落数，沙氏葡萄糖琼脂培养基2025C倒置培养5天点计菌落数。各组平行制备2个平皿。计算公式：稀释剂对照组的回收率= 稀释剂对照组菌落数-供试品对照组菌数X 100%菌液组菌落数试验组菌数回收率=

16、试验组菌落数-供试品对照组菌数X 100%菌液组菌落数页码：第10页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案7.5判定标准：实验组、稀释剂对照组的菌数回收率应在2之间。假设各试验菌的回收率均符合规定,照所用的供试液制备方法及计数方法进行该供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数。表1平皿法验证结果1#批号:、实验组别试验菌种供试液对照组菌液组菌数试验组菌数回收率%1号2号1号2号金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌表2平皿法验证结果 2#批号:实验组别试验菌种供试液对照组菌液组菌数试验组菌数回收率%1号2号1号2号金黄色葡

17、萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌表3平皿法验证结果 3#批号:实验组别试验菌种供试液对照组菌液组菌数试验组菌数回收率%1号2号1号2号金黄色葡萄球菌大肠埃希菌页码：第11页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微生物限度检查方法验证方案枯草芽孢杆菌黑曲霉白色念珠菌结果说明:8.控制菌检查方法验证1大肠埃希菌取1: 10供试液10ml两份，分别加入两瓶 100ml胰酪大豆胨液体培养基，其中一瓶加入 1ml大肠埃 希菌液不大于100cfu/ml丨为试验组；一瓶为供试品；另取一瓶 100ml胰酪大豆胨液体培养基加入 10ml 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液为阴性

18、对照。取上述培养物1ml,接种至含100ml麦康凯液体培养基内培养，4244 C培养2448小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上3035C培养1872小时。表10大肠埃希菌常规法验证结果1#批号:步骤实验组阳性对照组阴性对照组胰酪大豆胨液体培养基，3035C培养1824小时麦康凯液体培养基，4244C培养2448小时取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，3035C培养1872小时。假设麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行别离、纯化及适宜的鉴定试验,确证是否为大肠埃希菌；假设麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果 为阴性，判未检出大肠埃希菌。表11大肠埃希菌常规法验证结果2#批号:步骤实验组阳性对照组阴性对照组胰酪大豆胨液体培养基，3035C培养1824小时麦康凯液体培养基，4244C培养2448小时取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板上，3035C培养1872小时。假设麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行别离、纯化及适宜的鉴定试验页码：第12页共12页文件编码：ZYCWJ-TS-07156-01版本号：01题目：微