产品管理--NEB产品知识和市场培训（PPT51页）

1、来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB 产品知识和市场培训产品知识和市场培训 2001年8月市场与技术支持部来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载第一部分第一部分 NEBNEB厂家背景回顾厂家背景回顾美国总部： Beverly, MA来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载19752001支柱产品支柱产品工具酶工具酶先进的基因克隆和高先进的基因克隆和高表达体系的构建技术表达体系的构建技术120120种自主开发的酶种自主开发的酶6060多种酶是由多种酶是由NEBNEB首先筛首先筛选到并进入商品化生产选到并进入商品化生产二十五年的生产历史二十五年的生产历史来

2、自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载国际化的生产和营销网络国际化的生产和营销网络v 在全世界在全世界3535个国家和地区有分销商个国家和地区有分销商v 美国、英国、德国、加拿大四个生产基地美国、英国、德国、加拿大四个生产基地专业水准的厂商专业水准的厂商v 发酵中心发酵中心生产部生产部v 酶制备和酶制备和DNADNA重组技术中心重组技术中心研发部研发部v 分子生物学和寄生虫学研究中心分子生物学和寄生虫学研究中心基础研究院基础研究院来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载第二部分第二部分 NEB NEB 产品讲解产品讲解来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载核酸工

3、具酶核酸工具酶 DNA限制性内切酶限制性内切酶 DNA聚合酶、逆转录酶聚合酶、逆转录酶 Vent系列的系列的PCR聚合酶聚合酶 DNA/RNA修饰酶修饰酶来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载 在在5050 l l反应体系中，反应体系中，1 1小时内，完全消化小时内，完全消化1 1 g g的的DNADNA所所需要的酶量为需要的酶量为1 1 UnitUnit 常用酶大多数为常用酶大多数为10 10 U/U/ l l 4 4种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液种不同颜色标记的标准缓冲液和特定缓冲液 分为分为A A、B B、C C三种，依表询三种，依表询 在不被稀释的情况下，可长期存放

4、在在不被稀释的情况下，可长期存放在 零下零下2020度长达度长达2020之久之久DNA限制性内切酶限制性内切酶来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载非特异性的内切酶活性检测非特异性的内切酶活性检测核酸酶污染检测核酸酶污染检测外切酶污染检测外切酶污染检测蓝白斑筛选检测蓝白斑筛选检测DNA限制性内切酶限制性内切酶针对于常用在克隆实验中的酶针对于常用在克隆实验中的酶检验过量酶切对检验过量酶切对DNADNA末端的完整性是否有破坏末端的完整性是否有破坏来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB自主克隆的酶基因自主克隆的酶基因从重组菌株中提纯的酶从重组菌株中提纯的酶随酶另附一管随

5、酶另附一管BSA酶识别位点被酶识别位点被dam或或dcm甲基化后不能被切动甲基化后不能被切动酶是否耐热酶是否耐热经过蓝白斑法检测经过蓝白斑法检测目录书中出现的标志符号的含义目录书中出现的标志符号的含义最佳的工具酶反应温度最佳的工具酶反应温度酶所对应的缓冲液编号酶所对应的缓冲液编号DNA限制性内切酶限制性内切酶来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载Homing 核酸内切酶核酸内切酶识别识别12-40碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶碱基的长的、对称识别位点的稀有内切酶 v 同裂酶的概念同裂酶的概念识别同一酶切位点的一组内切酶识别同一酶切位点的一组内切酶 v BSA的作用的作用酶保护

6、剂，在反应中保证酶具有最佳的活性酶保护剂，在反应中保证酶具有最佳的活性DNA限制性内切酶限制性内切酶小常识：小常识：来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB限制性内切酶的卖点：限制性内切酶的卖点：种类非常齐全，（丰富的稀有酶）种类非常齐全，（丰富的稀有酶）稳定性好，存放时间长稳定性好，存放时间长价格在进口酶类里适中价格在进口酶类里适中质量可靠质量可靠DNA限制性内切酶限制性内切酶来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载DNA/RNA聚合酶聚合酶DNA或或RNA的探针标记的探针标记3末端和末端和5末端的补平末端的补平3末端的碱基置换末端的碱基置换DNA测序反应、定点突变

7、和转录测序反应、定点突变和转录3末端突出的切平末端突出的切平特特 性：性：以单链以单链DNA或或RNA为模板，从为模板，从5端向端向3端合成新链端合成新链应应 用用来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载性能指标：性能指标：5端向端向3端的外切活性端的外切活性3端向端向5端的外切活性端的外切活性聚合速度聚合速度错配率错配率耐热性耐热性延伸能力延伸能力常用的种类：常用的种类：E.coli DNA Polymerase IKlenow Fragment （35 exo-）T4 DNA PolymeraseTerminal TransferaseM-MuLV Reverse Transcr

8、iptase*M-MuLVReverse Transcriptase（RNase H-） T7/Sp6 RNA PolymeraseDNA/RNA聚合酶聚合酶来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB Vent系列聚合酶系列聚合酶特 性 / 种 类Vent Vent(exo-)Deep VentDeep VentDeepVent(exo-) DeepVent(exo-) 3- 5外切活性3- 5外切活性有有无无有有无无5- 3外切活性5- 3外切活性无无无无无无无无热稳定性热稳定性95C 6.7小时95C 6.7小时95C 6.7小时95C 6.7小时95C 23小时95C 23

9、小时95C 23小时95C 23小时错配率错配率低低较高较高最长扩增片段最长扩增片段13.2kb13.2kb15.0kb15.0kb14.0kb14.0kb15.0kb15.0kbVent DNA Polymerase 主要应用：常规主要应用：常规PCR扩增扩增 双脱氧法测序双脱氧法测序来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB Vent系列聚合酶系列聚合酶Vent DNA Polymerase与常规与常规Taq酶的错配率比较酶的错配率比较卖点：卖点：高保真高保真耐热性非常好耐热性非常好来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载DNA/RNA 修饰酶修饰酶DNA / RN

10、A Modifying Enzyme连接酶连接酶 Ligase激酶激酶 Kinase碱性磷酸酶碱性磷酸酶 PhosphataseBeta琼脂糖酶琼脂糖酶 Agarase甲基化酶甲基化酶 Methylase核酸酶核酸酶 Nuclease外切酶外切酶 Exonulease内切酶内切酶 EndonuleaserecA重组蛋白酶重组蛋白酶recA Protein来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载DNA/RNA 修饰酶修饰酶重点产品：重点产品： T4 DNA Ligase单位定义：单位定义：20000 NEB Unit = 300 Weiss Unit 4000 NEB Unit = 6

11、0 Weiss Unit T4 Polynucleotide Kinase （T4 PNK）对对DNA5末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆末端进行磷酸化，用于探针标记或克隆 Alkaline Phosphatase, Calf Intesinal （CIP）去除去除DNA 5和和3的磷酸基团，用于制备的磷酸基团，用于制备5的置换的置换标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。标记和载体克隆，阻止载体的自我连接。来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载分子量标准分子量标准来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载 DNA分子量标准分子量标准常用类型：整数分子量的常用类型：整数分子量的

12、 Marker1kb DNA Ladder2-log DNA Ladder100bp DNA LadderNEW来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载噬菌体噬菌体DNA和质粒和质粒DNA酶消化型的酶消化型的DNA分子量标准分子量标准非整数型的非整数型的 DNA分子量标准分子量标准来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载 DNA分子量标准分子量标准PGF 分子量标准分子量标准DNA被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装被包埋在凝胶中，以注射器的形式包装用于几十用于几十kb至上千至上千kb的的DNA分离时的分离时的Marker脉冲电泳分离脉冲电泳分离 分子量种类分子量种类： Lo

13、w Range MidRange Lambda Ladder Yeast Chromosome来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载RNA 分子量标准分子量标准适用于普通凝胶或变性胶适用于普通凝胶或变性胶条带为整数的分子量条带为整数的分子量 RNA分子量标准分子量标准来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载蛋白分子量标准蛋白分子量标准蛋白分子量标准蛋白分子量标准普通型普通型2-212kDa （精确）（精确）预染型预染型6-175kDa （估计）（估计） HRP蛋白蛋白Marker检测包检测包 6.5-165kDa （Biotin标记，标记，Biotin Ab）来自来自 中

14、国最大的资料库下载中国最大的资料库下载蛋白工具酶蛋白工具酶蛋白酶蛋白酶内切糖苷酶内切糖苷酶外切糖苷酶外切糖苷酶蛋白激酶和抑制剂蛋白激酶和抑制剂蛋白磷酸化酶和抑制剂蛋白磷酸化酶和抑制剂Factor Xa Protease来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载探针标记探针标记杂交检测杂交检测NEBlot Kit随机引物法探针标记试剂盒随机引物法探针标记试剂盒下游应用：下游应用： 文库筛选文库筛选 Southern / Northern 原位杂交原位杂交卖卖 点：点：标记的标记的dNTP参入率高参入率高模板用量在模板用量在25ng到到2ug半小时即可完成标记反应半小时即可完成标记反应可用

15、于多种类型的标记可用于多种类型的标记dNTP（同位素或非同位素标记）（同位素或非同位素标记）来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEBlot Phototope Kit随机引物法随机引物法探针标记试剂盒探针标记试剂盒用于化学发光检测用于化学发光检测与与Phptotope-Star Chemiluminescent Detection Kit配合使用配合使用生物素标记的探针稳定，可长时间存放生物素标记的探针稳定，可长时间存放杂交后可洗脱下来，进行反复杂交杂交后可洗脱下来，进行反复杂交来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载Phptotope-Star Chemilumin

16、escent Detection Kit卖卖 点：点：灵敏度同位素检测法相当灵敏度同位素检测法相当曝光时间短，只需曝光时间短，只需10-70分钟分钟信号稳定，可通过改变曝光信号稳定，可通过改变曝光时间来摸索最佳的信号强度时间来摸索最佳的信号强度来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载第三部分第三部分 NEB 蛋白表达产品介绍蛋白表达产品介绍来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载1. pMAL 蛋白融合表达蛋白融合表达 与纯化系统与纯化系统卖卖 点：点：生产级别的应用生产级别的应用高水平表达量高水平表达量1升培养上清可达到升培养上清可达到100mg的蛋白产量的蛋白产量与与M

17、BP融合表达可以增加融合表达可以增加蛋白的溶解性蛋白的溶解性来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载1. IMPACT蛋白表达蛋白表达 与纯化系统与纯化系统卖卖 点：点：应用了蛋白内含肽自我剪应用了蛋白内含肽自我剪切技术切技术无需蛋白酶去除标签，只无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程需一次过柱纯化过程Intein可接在蛋白的可接在蛋白的C端端或或N端端IMPACT-CN System来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载IMPACT-TWIN System卖卖 点：点：应用了蛋白内含肽自我剪应用了蛋白内含肽自我剪切技术，将两个切技术，将两个Intein接接在目的蛋白的

18、两端。在目的蛋白的两端。无需蛋白酶去除标签，只无需蛋白酶去除标签，只需一次过柱纯化过程需一次过柱纯化过程Intein行使剪切功能后，行使剪切功能后，可在目的蛋白两端产生带可在目的蛋白两端产生带S的氨基和羧基，可环化，的氨基和羧基，可环化，可标记可标记来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载第三部分第三部分 NEB英文目录附录的内容介绍英文目录附录的内容介绍NEBcutter V1.0来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载内容一内容一 分子生物学数据库索引分子生物学数据库索引REBASE 限制性内切酶数据库限制性内切酶数据库3100种限制性酶的相关信息种限制性酶的相关信息酶

19、的基因序列、甲基化敏感位点、结酶的基因序列、甲基化敏感位点、结构构5600篇参考文献篇参考文献InBase 内含肽数据库内含肽数据库分子生物学数据库网址总汇分子生物学数据库网址总汇224个网址个网址可按功能领域分类查找可按功能领域分类查找来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载内容二内容二 工具酶常用查询表工具酶常用查询表以酶识别序列分类的索引以酶识别序列分类的索引同裂酶索引同裂酶索引限制性内切酶的发展历史和知识背景限制性内切酶的发展历史和知识背景NEBuffer的酶的酶 活性对照表活性对照表双酶切缓冲液选择表双酶切缓冲液选择表酶稀释液对照查询表酶稀释液对照查询表限制性酶在引物延伸反

20、应中的活性表限制性酶在引物延伸反应中的活性表来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载限制性核酸内切酶的热失活对照表限制性核酸内切酶的热失活对照表酶切反应酶用量查询表酶切反应酶用量查询表 补平反应新酶识别位点查询表补平反应新酶识别位点查询表相同粘端酶查询表相同粘端酶查询表限制性酶识别位点中甲基化位点查询表限制性酶识别位点中甲基化位点查询表来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载内容三内容三 分子生物学常用工具表分子生物学常用工具表常用常用E.coli菌株表型及基因型查询表菌株表型及基因型查询表常用遗传标记常用遗传标记NEB菌株描述菌株描述遗传密码表遗传密码表氨基酸化学结构氨基

21、酸化学结构常用单位换算常用单位换算常用载体上的酶识别位点出现频率常用载体上的酶识别位点出现频率常用载体的酶切图谱常用载体的酶切图谱来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载内容四内容四 分子生物学实验分子生物学实验Protocol琼脂糖包埋的琼脂糖包埋的DNA的限制性酶消化的限制性酶消化基因组酶消化的选择指导基因组酶消化的选择指导甲基化酶反应甲基化酶反应来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载第五部分第五部分 NEB NEB 销售统计分析销售统计分析来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载2000年度NEB全国销售额的大区分配2000年度NEB全国销售额的大区分配4

22、.8513.085.56北京区北京区上海区上海区广州区广州区单位：万美金来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载12345678910QIAGENClontechNEB分子生物学试剂产品销售比例分子生物学试剂产品销售比例统计统计 2000.42001.3来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB产品种类销售比较NEB产品种类销售比较12%60%9%8%6%3%2%XS EnzymeRestriction EnzymeModifying EnzymeDNA MarkerProtein MarkerProtein ExpressionOthers2000.4 2001.3来

23、自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载2001.42001.7 NEB NEB产品种类销售统计产品种类销售统计7%62%12%7%7%5% 0%XS EnzymeRestriction EnzymeModifying EnzymeDNA MarkerProtein MarkerProtein ExpressionOthers来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载今年与去年4月至7月同期今年与去年4月至7月同期销售额比较销售额比较785770564997809113402157471521813454020000AprilMayJuneJuly20002001比去年同期增长

24、一倍多来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB2000年度月销售统计NEB2000年度月销售统计0.0010,000.0020,000.0030,000.0040,000.00April-00June-00August-00October-00December-00February-01NEB来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载NEB 2000年度上海地区销售统计NEB 2000年度上海地区销售统计1431301.82101065.54120128.9869642.110500000100000015000002000000上海上海江苏江苏浙江浙江湖北湖北年销售额

25、来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载0100200300XSSM+LTotalHincSphT4 PNKSpeT4 DNA PolymeraseEcoR KlenowSmaPstSacBglNocXbaSalHind XhoEcoRBamHNotT4 Ligase来自来自 中国最大的资料库下载中国最大的资料库下载目前的小酶库存目前的小酶库存ECOR IHinc IIHind IIIMsp IHae IIINde ISnaB IBamH ISAL IPST ISMA IKpn IBGI IIXBA IXHO IPvu IISac IBstE IISAU3A IFNU4H ISph ISTU INot INco IECOR VCla IPNKT4 DNA LigaseT4 DNA Po